Title Author(s) Journal URL LDHおよびLDHアイソザイムに関する研究：原発性肝細胞性肝癌を中心として佐々木, 一元東京女子医科大学雑誌, 49(12):1062-1072, 1979 http://hdl.handle.net/10470/3985 Twinkle:Tokyo Women's Medical University - Information & Knowledge Database. http://ir.twmu.ac.jp/dspace/ 12 （東女医大誌第49巻第12号頁1062∼1072 昭和54年12月） LDHお．よびLDHアイソザイムに関する研究一原発性肝細胞性肝癌を中心として一東京女子医科大学消化器病老ンター外科（指導佐々木ササキ遠藤光夫教授）一元カズモト（受付昭和54年9月27日） AStud［y of Lactate Dehydr①geuase and五s⑪zymes in Hepato￠e11魁1arcarci以oma Kaz皿moto SASAK1， M．D． Institute of Gastroenterology（Director．l Pro￡Mitsuo ENI）0） Toky6 Womcn’s Medical College， Tokyo In o卸der to investigate tbe distribution of tissue Iactate dehydrogenase（LDH）and the relation with Edmondsoゴs classi丘cation， the activity and isozyme of正DH were determilled on Hepatocellul− arcarcinQma by examination of the serum and tissue extract． 1） Serum恥DH activity showed as high and isozyme pattem was so一ρalled tumor pattern which had main act三vity ih LDH3，4，5， beR）re surgical resection． The activity decreased and isozyme showed normal pattern after resection．ノコ 2） The quantity of tissue LDH in hepatocellularcarcinoma distributed as high in the surrounding non−tumor t三ssue near by the tumor． The isozymes of tissue LDH showed tumor pattem in the area of tumor and near by tumor。 3） The LDH50f tissue玉DH was closely related with Edmolldson，s classi丘cation． 4） The enzymatic border of tumor on Hepatoma existed beyo栽d the pathohistological border．目 2．慢性良性肝疾患および転移性肝癌次 3．原発性肝細胞性肝癌 1．緒言 H．対象． a．腫瘍部および非腫瘍部の組織内分布皿．．方法 b，肝癌組織のEdmondsOn分類との関係 A．工DH活性値測定 c．組織LDHと血清LDHの関係 B．LDHアイソザイム測定 V．考按 C．組織抽出法 VI．結論 D．組織抽出における血液Co載taminationに関して文献．L 緒．言 ∬1．成績乳酸脱水素酵素（LDH）の悪性腫瘍診断に関し A．血清LDHとアイソザイム B．肝組織LDHとアイソザイム 1． ⇒ト且干疾，患ては，1943年WarburgおよびCh降istian1）が血清中の解糖酵素による癌診断の可能性を示唆したこ一1062一 13 とに始まる．次いで，HillとLevi2）は悪性腫瘍ら，酵素め組織内分布の様子により，酵素上から患者で血清工DHが上昇することを報告し，悪性腫瘍のLDHによる診断のロ火を切った．一方，みた腫瘍の境界を知ることができることも推測され，さらに腫瘍細胞異型度とLDH酵素の関係も 1957年，Vesse13）らにより血清LDHは電気泳動重要な問題であろう．的に5つのFractionに分かれることが発見され，以上の観点から，原発性肝癌を中復に諸種の検 MarketとMφ11er4）が， Isozymeの概念を提唱討を行なった．した．次いで，LDH Isozymeの臓器特異性の発 H・対見5）へと展開した．象対象は血清LDHに関しては，健常者22例，急性肝炎 25例，慢性肝炎4例，肝硬変18例，原発性肝癌32例，転肝臓悪性腫瘍の血清LDH，特にアイソザイムに関しては検討がなされ，原発性肝癌で活性値は移性肝癌11例の計112例であり，組織mHに関しては上昇するが，一般に特有なアイソザイムパターン健常者10例，慢性肝炎3例，肝硬変5例，転移性肝癌3 はないとするもの6）7），LDH、， LDH3の異常を指例，原発性肝癌15例の計36例である．原発性肝癌15例の内訳は，手術切除例8例，剖検例7例であり，表1に示摘するもの8），LDH5が異常で有意の増加を示しした．ているとするもの9）10），さらに，LDH、の低下， 11L 方 mH5の上昇が特徴的で， mH5が病勢の変化を法 A．乙DH活性値測定反映しているとするもの11）など種々の報告がみられ，未だ見解は一致していない．また，原発性肝癌を中心とした組織LDHに関しては，担癌状態の組織での組織LDH活i生値の上昇は恒常的ではないが，腫瘍部位と周辺部位との間に量的差異があるとされている12）．組織工DHアイソザイム mH活性値はMorgenst6m16）らの方法に基づく自動定量法により行なった． B．LDHアイソザイム測定 Wieme 1ηの方法に従って，寒天板を用いる電気泳動法にて行なった．寒天板製作は和光特殊寒天Bを用い，ベロナール緩衝液（pH 8・4，0・04M）に，0・8gr／dlの割では，LDH5を中心とする肝臓型を呈し，原発性合で混ぜ沸騰，水溶中で完全に透明化する（40分）．シ肝癌の場合も肝のどの部位をとっても同じようなャーレに寒天を注入放置し固める．その上にスライドグアイソザイムパターンであるとみなすものもあっラスをおきち更にその上に寒天を厚さ1・5m・n重層し固た13）14）．しかし，Stankweather15）は癌組織と遠隔め冷所に保存したものを用いた．1・5×8mmの3紙に非腫瘍組織を比較してみると，両者にアイソザイ試料をしみこませ，寒天板中央にのせ，充分試料がしみムパターンの差があり，さらに腫瘍周辺非腫瘍組込んだところで，泳動に移る．泳動条件は定電流65mA 織では，LDHアイソザイムパターンが，両州ので，泳動時間60分とした．反応染色は以下の基質染色液移行型を示すと述べており，前述の意見と異なっを使用した．ていることは興味がもたれる．，血清LDHとアイソザイムが臨床的に利用され／トリス緩衝液 56ml＼ 0．4gr！dl KCN 5m1 4m1 乳酸ソーダ価値を有しているが，その基盤たる組織LDHに Pherozinemethosulfate 関しては充分な検討がなされているとは言えず， 1麟 β一NAD ＼Nitrobluetetrozolium その点につき，特に悪性腫瘍を持つ組織が，内に LDH酵素をどのように含み，分布しているかを染色はフラン軍学37℃にて70分行ない，直ちに，固定染知ることが大切であり，組織LDHと血清mH 色液（エタノール：酢酸3水＝14＝1＝5）に入れ，未との関係についての解明もなされなければならな反応色素の黄色調，バックの紫色が消えるまで行なう． LDH酵素が，悪性腫瘍などでその性質を変アイソザイムパターンの変化となって現わその後，水洗を30分間， 3回行なったのち，乾燥に移それが，悪性腫瘍と特異的な関係にあるなシドメーターにて測定した。い．え，れ，る．フラン里中に一晩放置して乾燥させ，分画比はデン一1063一 14 Table l Analysis of 15 hepatocellularcarc三noma cases 恥 Age Sex Location Size of GrQss pf tu皿or 狽浮香iπ（cm） ≠垂垂?＝uance 9．5xg Edm㎝dsoゴs Suπoundi疏9 Mas団ve 皿 L．C． Massive 皿 Norm認 Nαiular 1 L．C．モ撃≠湯奄モ≠狽奄盾 Piver ti＄ue 1 65 Male Ope旧tion Right 2 53 Male Operation Right 7x 5 3 68 Male Operation Left 2x 3 8×6 Mお訂Ve 皿 L．C． 7×4 MassiVe 血 Norma1 9．5x8．5 Massive 皿十IV LI b． D迂fuse 4 63 Maユe Opera廿on Right 5 47 Male Autopsy Right 6 ．53 Male AutOP母 Right 7 53 Male Auto1菊y Left 皿 L．C． 8 56 Male Operation Right 8x 6 Massive H十1亘 L．C． 9 49 Male AutOPミy Right 11x12 Massive 皿 L．C． 10 35 Male AutOPSy Right 11×15 Mεs恵ve 皿 L，C．工1 52 Male AuめPミy Right． Massive n L．C．ユ2 68 Male Qpera麺on Right 6×5 Massive 皿 L・．C． 13 45 Ma｝e Ope田tion Right 5x 5 Ma5sive E L．C． 14 54 Female Ope臓賃on Right 12×6．5 MassiVe 耳 NQr甑 15 56 Male Right Nodular 皿 L．C． OperatiQn 2．5x 2 C・組織抽出法モジナイズ，3，000回転にて10分間遠心し，さらにその肝切除または剖検を行なった直後の原発性肝癌標本の上清を12，000回転10分間遠心して得られた上清を使用腫瘍部，非腫瘍部，腫瘍境界部より，各々数個の組織片し，血清と同一方法にて，LDH活性値，アムソザイムを採取し使用した．この際，肝標本のスケッチを行なを測定した．比較検討に便利なように，生理食塩水1ml い，採取部位を記入，分布地図を作製した．対照群は開にて1gの組織片を抽出したと換算し，推測絶対値と呼腹時，生検した肝組織片を使用した．各組織片は図1の称し使用した．ごとく，いずれの場合も一部をとり，ホルマリン固定し，病理組織学的検討を加えた． D・組織抽出における血液Conta血i皿atio塾に関して LDH測定用の新鮮な肝組織片は採取後直ちに，生食組織抽出を行なうにあたり，問題となるBlood Cont− 水10mlにて4℃恒温下，1分間洗浄した後濾紙上に aminationに関して， M・Castagna18｝は肝のホモジナイおき血液成分が完全に流出したのを確かめ，重量を測定ズは，潅流肝にて行なわるべきであるとし，そうでないし，生理食塩水Imlないし2mlを加え，0℃慎温田ホものでは大きな誤差が生ずるとしている．そこで，著者は得られた組織片の血液成分を充分洗浄し，具体的には赤色の消える時点まで行なった後，洗浄液と組織抽出液ー→葬ヒコ「．ロ，のヒ層，とを比較した．その結果は表2のごとくであるが，洗浄液は血液成分と組織液であると考えられるが，活性値は 1，000単位を越えることは少なく，アムソザイムでは肝組織パターン（肝臓型）が主体で，それに若干血清のパ一諾U響∪く∵ 洗浄液の活性値は組織抽出液の活性値の10％以下であ＼㊨一闘一一レPA了HOLOGICAL FINDING 量が少ない故に，その影響はわずかであると考えられ Fig。1 The method of detecting tissue LDH ターンが修飾されたものであると考えられた．しかも，り，血液成分が一部入り込んだとしても，活性値の絶対た．したがって，洗浄による組織抽出法にての比較検討一1064一 15 TaUe 2 The comparison of I．DH activity Ievel between tissue extract and fiushed saline tissue extlact No． Qf LDH activity 狽奄唐唐浮 iu／gr／ml） flu6hed sa1血e 1 皿皿 IV 1 9 17 26 LDH activity V（％） 1 ∬ 皿 w 750 0 11 20 21 78 96 iu／gr／ml） V（％） 1 8233 2 139Q6 1 8 20 28 43 4go 0 0 0 4 3 13116 2 7 18 30 43 600 0 8 3 5 4 8739 6 8 23 19 必 190 o 0 0 0 100 5 5042 4 5 11 10 70 450 0 0 0 0 100 6 5964 2 9 18 31 40 410 0 0 0 0 100 7 2598 4 6 12 26 53 230 0 0 0 0 100 8 839 7 13 22 26 32 230 0 0 0 0 100 9 3781 2 6 13 25 54 270 0 0 0 0 100 47 84』 567±134であつた．原発性肝癌では1，309±242，は充分，意義のある方法であると考えられた．． w・成績 A・血清LDHとアイソザイム転移性肝癌では胃癌からの肝転移が多いが，肝疾患92例と健常者22例を対象とし検討した．が高値を示している．っぎに，．エDHアイソザイ肝疾患例の内訳は急性肝炎25例，慢性肝炎4例，ムについても図2に図示した如くで，健常例では 1，417±530であり，悪性疾患では■DH活性値肝硬変18例，原発性肝癌32例，転移性肝癌11例で LDH三24％， LDH241％，工DH323％， LDH46 ある．これらにつき血清卑DHの平均値を表3に％，LDH55％であつた．急性肝炎においては，まとめた．すなわち，健常例は400を越えるもの極期にLDH5の増加があり，回復するにつれ健はなく，247±10であつた．急性肝炎では極期に常例のパターソに復帰する．対象とした25例は様 1，000までの上昇を認めたものもあ．るが，597±51 々の急性肝炎のステージを示していたが，一括しであつた．慢性肝炎は362±71であり，肝硬変はて平均をとるとLDH、21％， LDH、35％， LDH3 16％，LDH46％， LDH522％であつた．慢性肝 LDH Isozyme （％） S一LPHNo．of cases acti》随y 22 24ア±10 Acute Hepatiti5 25 597±51 Chronlc Hepatiti5 4 362±7！ Liver Cirrhosi5 18 56ア土134 Healthy contro［ Hepat。cellurar LDH1 LDH LDH3 LDH4 LDH5 41 23 6 5 35 16 6 22 29 43 17 1 10 26 43 19 7 6 19 35 20 9 16 19％，7％，6％であり，健常例に近いアイソザ 12 10 イムパターソを示した．原発性肝癌のアイソザイ 24 ．21 り，健常例にくらべ，LDH5の軽度上昇とLDH4 の低下がみられた，肝硬変では各々26％，43％， 34Carcinoma 1309±242 Meta5tatic 炎では，各々29％，43％，17％，1％，10％であ 1雪Li》erCaroinoma 川7±530 11 36 26 ムは19％，35％，20％，9％，16％で，健常例と比較すると，LDH、，、の低下およびLDH5の一ヒ昇 He訓thy Conしrol が認められた．転移性肝癌では11％，36％，26 Acute Hepatitl5 ％，12％，10％で健常例にくらべ，LDHI，2の低 Chronic Hepatiti5 下，LDH4，，の上昇がみられ，さらに原発性肝癌 Uver Cirrhosis Hepatoce「Mar との相違はLDH1の程度の高い低下及びLDH4 Metastatic の上昇が転移性肝癌に認められたことである． Carchoma Liver Carcinoma すなわち，原発性か，転移性かとの鑑別にアイソ Fig．2 S・LDH activity and isozy㎜e．pattern on ザイムパターンが役立つものと考えられる，つぎ var三〇us liver diseases 一1065一 16 S・LbH しDH isozyme （％）（u／頃e） ρatholo唇ical @ diagnosis @ LOH 11 lH 0．2 2．2 4．6 Iaqtlvity 評． v 置。σo healthy con琶roI 500 82390 16．1 74．8 1iver cirrhosi5 60000 0．3 0．8 33 17．7 770 。hroni。 heρatiti5 42000 0．1 1．寒 5．2 17．4 76．2 metas㎏tio 53000 2．7 9．0 15．1 72．6 撃奄魔??cardnoma 100 he8鮪y oon重rd 11v●r c■rrhos15 60 φ：hepatio re38c匙bn 20 F丑9・3 S∫S・LDH ac亡ivi亡y change af亡er hepa亡ic 0 resectlon KM． 1 H 厘111V V ohronlc hepatlt伽5 I II m mota5t飢■o l8り8r oarc■nom8 V IV ε、20 6．2篭 6．26 Fig．5 Tissue LDH and isozyme on various豆iver diseases 7．6 8．3 8．8 織しDH：活性値平均は82，390u／gn／mlで，アイソ 6，19 （operation date）ザイムではLDH5が74。8％と多くを占め， LDH4 玉6．1％，LDH34，3％， LDH22．2％， LDH乳0，2 S．T． H 匿覇11IVV ％であった． 10．5 2．慢性良性肝疾患および転移性肝癌 10，25 10．26 手術時，生検した11例の肝組織片にて検討した．病理診断に従って，各々，肝硬変5例，慢性 10，27 里0．31 10，23 （operation da亡e）肝炎3例，転移性肝癌3例であり，図3に示し Fig．4 S−LDH isozyme pattern schift after hepa− た．まず，肝硬変5例の活性値平均は60，000u／gr／ tlc resect1011 mlで，アイソザイムはLDH577．0％， LDH4 比，■DH活性値とアイソザイムを，原発性肝癌ユ7．7％，LDH33。3％， LDH20．8％， LDH10．3 切除前後において，その推移をみてみた．代表的％であり，健常例との明らかな違いはなかった．な3例を図3は示すが，’活i生値は肝癌の発育と共慢性肝炎3例の活性値平均は42，000u／gr／mlで，に上昇し，切除直後に血中濃度は最高に達し，切アイソザイムはLDH576．2％， LDH417．4％，除後10日から2週間の間に漸次下降し正常範囲に mH35．2％，1・DH21．1％， LDH10．1％であっなる．肝癌切除によるアイソザイムの変化は図4 た．転移性肝癌例は胃癌からの転移であり，転移の如くで，LDH4，5の減少，殊にLDH5は切除後腫瘍組織を含まぬ肝組織片を使用した．活性値は著明に減ってゆく，反面，LDH1，，は切除により 53，000u／gr／mlで，アイソザイムはLDH572．6 増加をみるが，エDH3は不変である．％，LDH415．1％， LDH39．0％， LDH22。7％， B．肝組織LDHとアイソザイム LDHユ0％であった．肝疾患群の組織mHとア 1．非肝疾患イソザイムはいずれも健常例に比較し，特徴的な手術開腹時生検し得た肝組織片で，肝疾患のな点は見出せなかった．また，肝組織LDHは数いもの10例を対象とした．内訳は胃十二指腸潰瘍万単位の活性値を示し，アイソザイムではLDH5 6例，胆石症4例である．図5に示すごとく，組に70％以上の活性があり，LDH4が15％以上，一1066一 17 LDH3に約5％， LDH、，、は非常に少ない分画であった． 1 ％ 3．原発性肝細胞性肝癌 1： a・腫瘍部および非腫瘍部の組織内分布：：対象とした原発性肝癌15例の腫瘍部，非腫瘍部， n ， o 』 3 境界部各々を一括して得た活性値平均は65，800 ‘ L」L」であった．アイソザイム平均はLDH』69．8％， LDH417．2％， LDH39．6％， LDH22．6％， mH1 0．7％で，健常例との比較ではLDH5の減少と LDH3の増加が認められた．しかしながら，肝癌 5 6 LlL」組織の腫瘍部と他の部位，厳密に言えば，肝の各部位により組織LDHは異なる．したがって，担癌組織で組織LDHを一律に論ずることはできな F且g．6 Tissue工DH and isozyme distribution on HCC specimen い．そこで，、原発性肝癌15例につき，腫瘍部，非腫瘍部，境界部よりそれぞれ組織片を採り，活性 40％位となり，前述した健常例のパターンとは大きく異値，アイソザイムに付き比較検討した．以下各症なっている．腫瘍をとりまく肝組織のNo・4，5，6で例での成績である．は，LDH5が大部分の活性を示し，健常例にみられたパ症例1．K．M．53歳男ターンに類似している．症例2．S・T・56歳男右葉切除例で，腫瘍は大きさ7×5cm，塊状型で，右葉切除例で，腫瘍は大きさ8×6cln，塊状型， Edm− Edmondson皿型である．非腫瘍丁丁組織はほぼ正常である。図6の如く，腫瘍中心より肝辺縁に至り6コの組織 ondson皿＋皿であり，周囲肝組織は肝硬変を呈してい片を採取した。中心部よりNo・1からNo・5までの組た．腫瘍中心部より肝辺縁に至るNo・1よりNo・9ま織LDH活性値は上昇し， No・6で下降している． No・1 での9コの組織片を採取した．組織LDH活性値分布の腫瘍中心部が活性値は最低であった．組織LDHアイは，図7の如くNo・1よりNo・6に向って上昇し， No・ソザイムをその各々でみると，図6にみる如く，腫瘍内 6で最高値となり，肝辺縁に向い再び下阻している．ア No・1，2，3ではLDH320％， LDH430％以上， LDH5 イソザイムは腫瘍内のNo・1，2，3にてLDH3，4，5に活婁 2 3 …漏し』L」ゐるさ L」L」L」 7 8 9 L⊥」L」 Fig．7 Tissue五DH and isozyme distribution on HCC specimen 一1067一 18 しDH 1 ％さし」L壼 80 60 4 20 置 1 111 4 らおし」L」L」 L』 Fig．8 Tissue LDH and三sozyme distribution on HCC specimen 性のあるパターンで，境界部のNo・4では， LDH5が LOH u’巳r1岡 100 No．1，2，3にくらべ高い．周囲肝組織No・5，6，7， 1000 8，9はいずれもmH5に大部分の活性を有している．％ 80 50 症例3．Y．K．35歳男 40 20 右葉に存在する不整形の塊状型肝癌で，大きさは11× 500 15cm， Edmondson皿であった．剖検例である．腫瘍中 0 1 2 UL」 3 4 L副L」心より肝辺縁に至るNo・1よりNo・7まで7コの肝組織片を採取した．図8に示すように，組織工DH活性値分布はNo・1で最：即値を示し， No・6にて最高値を示した．すなわちNo・1よりNo・6に向い漸次上昇しNo・うし」 6で最高となり，No・7では活性値は下降している．アイソザイムはNQ．2，3の腫瘍組織とNo・5の腫蕩近傍の肝組織にてはrDH3，4，5に高い活性を有している。他のNo・．6，7は健常例の如き1・DH5に大部分の活性を有 F五g．9 Tissue LDH and isozyme distribution on するパターンを示す．さらにNo・1， NQ．4では， LDH5 HCC specimen に主活性が認められ，組織片の病理的検索でこの組織片は，大部分が壊死組織で腫瘍を含んでいないことにより症例5．T．H．53歳男腫瘍組織のパターンを示さなかったと思われた．右葉に存在する9・5×8・5cmの塊状型肝癌で，周囲組症例4．T．W．56歳男織は肝硬変で，Edmondson皿＋IVであった．剖検例である．図10−a，bに示した如く，組織LDHの分布を詳細大きさ2・5x2・Ocmの結節型肝癌で右回に存在し， Edmondson∬であり，肝組織は肝硬変であった．手術に調べるべく，腫瘍中心より肝辺縁まで連続切片とし動旧例である．図9に示すように腫瘍部より切除肝辺縁 No．1よりNo，12まで採取し検討した．活性値は腫瘍に向い各No・1からNo・5までの組織片を採取し検索しのNo・1よりNo・5まではいずれも低く， No・6の腫た．No・1，2では活性値は低く， No・3にて組織LDH 瘍境界より腫瘍から遠ざかるにつれて増加し，No・8で活性値は最：高を示し，No・4で再び下降， No・5で上昇す最高に達した．No・9より低下を示し， No・12まで徐るがNo．3よりは低い．アイソザイムの分布はNo・1，々に低下していったが，腫瘍内の活性値よりはいずれも 2，3にてLDH3，4，5に活性を有し， No・4，5にては高かった．LDHアイソザイムはNo．1よりNo．7まで LDH5に主活性のあるパターンに変化している．はLDH：3，4，5に活性のある腫瘍組織にみられたパターソ一1068一 19 Table 3 The comparison of tissue工DH三sozyme u19r／cc 」DH× 1eo ！ and edmondson’s cIassi丘cation on HCC 500 Total 1 皿 ≠モ狽奄魔奄狽皿 3106 t 9GO 2150G 500 200 識謬軋， 12345 醐響，繊馨 344 172 838 w V 3075 1 1161 18985 1 25790 103 335 232 25130 1∼亜 38946 467 2609 2142 33730 1∼皿 36250 1557 4054 4959 256鉛 E 37500 862 3938 1762 30937 皿 52727 2a67 13129 14710 22620 E 41000 410 3239 5289 32062 皿 75832 303 10詣4 24483 40629 H∼皿 83900 587 7467 25254 50591 耳一皿 660 4015 8305 41800 皿∼皿 2600 8940 14155 48425 皿 520 39480 皿灘羅． @ 簸．蕪繋ノ 55000 74545 2220 羅禦 40000 Fig．10a Tissue工DH distribution on HCC αassification 31 81000 1215 2511 77274 皿 75610 3251 7561 64798 皿∼lv 58125 230 1740 55680 血∼lv ’ b・肝癌組織のEdm・oudson分類との関係％ 1 2 3 ii」鴨L』］ LIL面L面これらの各例において，組織．■DHアイソザイムをEdmOndsOn分類19）に従つて配例すると表 3の如くである．Edmondson Iおよび1十Hではアイソザイムの変化は少なく，LDH5を主活性とする肝臓組織にみられるパターンであるが， Edmondson皿，皿十皿，皿， H十IV， Wと異型度が進むにつれ，．mH3，4，5に活性を持つ腫瘍組織に特徴的なパターンに変化してゆく．すなわち，ア L抽．L」L】ユリ腫瘍細胞の異型度がすすむにつれ，組織LDH：アイソザイムも変化し，より腫瘍に特微的なパターンになつてゆく．次に，腫瘍組織LDHとアイソりロコザイム各分画を，u／gr／mlの推測絶対値に換算統一し，Edmondson分類に従つて配列し比較した．組織mH活性値はEd皿∼皿，皿で高く認めら Fig．10b Tissue LDH三sozy狐e distribut量o鼓on HCC を示し，No・8以降No・12まではLDH5が主活性を持れるが，各分画別の比較では特に工DH5において，Edmondson Iより］［Vに向い増加してゆく傾向が認められた．つ肝組織のパターソになつている．注月すべきは，腫瘍 C・組織LDHと血清L・DHの関係に近いが非腫瘍組織のN・・7においても腫瘍内にみら肝癌では血清LDHは上昇し，アイソザイムパれるパターソを呈したことである．ターンは変化し，LDH4，5の上昇， mH2の低下一1069一 20 慧」∴皿雇 11 lll IV V No員・tumor ti55口e LDH isozyme of HCC 1 11 m ■V V 1 S・LDH iso竃yme of Tumor ti55ue LDH healthy oontroI i50zym謄of・・HCC 醒1 旧 ■V われた． V・考按血清LDH：およびアイソザイムが，はたして肝疾患殊に原発性肝癌の臨床的診断にいかなる役割をなすのか，まず肝疾患でのLDH活性値及びア V イソザイムを検討した．健常人22例を対照とした健常例の平均活性値は247u／mIで， LDHアイソザイムパターンでは，LDH2が最：も高く， LDH2 ＞LDH1≧LDH：3＞mH4≧LDH5となり諸家の報告と一致している．各肝疾患については，急性肝置 II 旧 IV V 炎で炎症とともに活性値およびLDH5が消長する．肝硬変では，LDH活性値は健常例にくらべ高いが，アイソザイムパターンに特微的変化は出現しない．原発性肝癌では，LDH活性値は著一こ上昇し，アイソザイみではLDH5の増加， 111曜lilVV ／・・＼ L∵L∴コロロロ旧VV LDH4の比較的増加， LDH、，，の減少が認めらリれる．転移性肝癌においても，活性値の上昇， B．IDH1織器。蕊 1旧旧∵ LDH、，5の増加， LDH、，、の低下があり，特に Fig．11 The model of the relation between LDH、，4の異常が目立っており，原発性肝癌との S一工DH and T・1．DH 鑑別が可能であった．したがって，原発性肝癌でを示す．腫瘍切除により活性値は正常範囲まで低は，活性値の上昇と特徴的なアイソザイムの変化下し，アイソザイムも正常パターンに復帰する．により急性肝炎はもとより転移1生肝癌との鑑別も歌主状態での血清LDHの変化は何に由来するか吉田9）らと同様アイソザイム上可能であると考えを調べる意味で原発性肝癌の組織LDHを腫瘍組られた．織LDHと周囲非腫瘍組織LDHの両者の面か原発性肝癌での血清LDH活性値は，肝癌切除ら血清LDHへの影響などに付き比較検討した．後正常範囲まで下降する．下降に要する時間は2 対照とした健常群の血清LDH活性値及びアイソ週間ぐらいである．アイソザイムも正常復帰し，ザイムパターンは，恒常的であると考えられるこそれは五DH5の変化が主である．これら肝癌切除とより，担癌状態での血清LDHの変化は組織前後の血清LDHの変化は，肝組織よりのLDH LDHの遊離により修飾される．その血清への遊酵素の血中への反映の様子を示すものと考えられ離修飾が腫瘍部よりの遊出が主体をなすのが，肝る．約2週間に亘る血清LDHの変化の復帰は従組織全体がその役割をなすのか，両者に付き模式って次の可能性が考えられる．すなわち，組織よ図を作り検討した．図11に示す如く，血清1DH りのLDH酵素の血中停滞期間が長い，ことぽをアイソザイムに非腫瘍組織LDHアイソザイムを修飾したものと，腫瘍組織のみの■DHアイソザかえれぽ排泄に時間がかかるのか，あるいは肝組織より血清への放出，移行に時間がかかるのか，イムを修飾したものに分け比較した．模式図に示肝組織に肝癌切除後も腫瘍の影響が長時間残ってすごとく後者の修飾によるものが大であると考えいるのか，のいずれであろう．られる．すなわち，肝癌における血清LDHア肝組織LDH活性値の各肝疾患群平均は，慢性イソザイムパターンの変化は，腫瘍組織部よりの肝：炎42，000ロ／gr／ml，肝硬変60，000u／gr／ml，転移 LDHの血中への放出に負うところ大であると思性肝癌53，000u／gr／ml，原発性肝癌65，800u／gr／ml，一1070一 21 で各群の間に大きな差は認めない．健常群平均に変化しており，腫瘍型を示すアイソザイムは同 82，390u／gr／m1と較べてもむしろ肝疾患群にて二部位より腫瘍に近い部位に存在している．以上の値を示している．したがって肝疾患における血清組織LDHの肝内分布の状況は，服部13）らの報告 LDHの上昇は，組織mHが上昇した結：果によとは異なり，肝癌でのアイソザイムパターンは部るものでないといえる．位により異なっており，Starkweather15）の報告にむしろ近い．また，腫瘍外縁のアイソザイムの変肝組織LDH：アイソザイムパターンは，健常群に：おいて，LDH575％， LDH416．1％，1・DH3 化からみて，病理組織学的には腫瘍細胞を含まな 4．6％，LDH22．2％， LDH、0．2％であり， LDH5 い部でも酵素的セこは，腫瘍型を示しており，腫瘍が主体を占めW圭eland5）の言う肝臓型（玉eber の影響の波及，又は前癌状態を酵素上有している type）を示した．また，原発性肝癌を除く肝疾患と考えられた．群の組織LDHアイソザイムでは転移性肝癌で肝癌組織mHとアイソザイムを細胞異型度 LDH3に増加をみたほかは健常例にみられたいわを示すEdmondsOn分類に従い配列してみると，ゆる肝臓型を示した．以上のことより，各肝疾患 mH5の推測絶対値（u／gr／m1）はEdnlondson grade での血清mHの変化と肝組織LDHの変化との Iよりgrade IVに向い漸次増加してゆく，アイ問に関係がないようにみえるが，肝疾患での血清ソザイムパターンもgrade Iよりgrade IVに向 LDHの変化は肝の病態に最も影響されていると考えるべぎであり，それは，LDH酸素の肝組織い特徴的な腫瘍型に変化してゆく，これは，肝癌よりの逸脱方法又は逸脱量，或いはどの部の組織度とエDH酵素の生化学的変化との間に関係が認より逸脱するのか，によるものであると考えるべめられることを意味するものである．での腫瘍細胞の病理学的変化，すなわち細胞異型きであろう．これらの問題点を解明すべく肝癌で最後に，原発性肝癌での血清工DH変化は，恒のLDH：を調べてみた．原発性肝癌i5例の肝組織 LDH活性値平均は65，800であり，他の肝疾患と常的に存在する血清内のLDH活性値，アイソザイムに担癌肝組織よりの組織工DHの遊離が修飾くらべ特別高いものではなかった．組織■DHアされて生ずるものであり，それは腫瘍内よりの組イソザイム各分画平均はLDH10％， LD瑞2．6 織LDHの逸脱，放出を主体とし，腫瘍周囲の二％，工DH39．6％， LDH417．0％， LDH569．8％丁による変化の結果，遊離する組織LDHが付加であり，健常群と比較しLDH3の増加とLDH5 したものと考えられた． VL結論の減少が認められた．次に，各症例につき組織原発性肝癌を中心とし血清LDHおよび組織 LDHを腫瘍部，非腫瘍部，境界部の部位別に採 LDHを測定し以下の結論を得た．取し検討した．各症例に凡そ同一の傾向がみられ．1）肝癌における血清LDH活性値は非常に高た．すなわち，腫瘍内の活性値は低く，腫瘍中心部では最低を示し腫瘍辺縁に向い徐々に上昇してく，アイソザイムではmH1，2の低下， LDH5のゆく，そして腫瘍辺縁の外側肝組織で非常に高い上昇をみた．アイソザイムの変化より転移性肝癌活性値を示しその後肝辺縁に向い下降してゆく，との区別が可能であった． 2）正常肝組織LDH活性値は血清にくらべしかし，肝辺縁の活性値は腫瘍中心より高い．各部位別のアイソザイムパターンを調べると，腫瘍非常に高く，数万単位を示す．アイソザイムでは内では■DH，，4，5に主活性帯があり，周囲肝組織 LDH5が多くの比率を占める．悪性疾患を除く肝では主活性はLDH5に存在する．次に腫瘍外縁疾患においても同様であった． 3）肝癌での肝組織LDHは腫瘍部，非腫瘍部でのアイソザイム変化と活性値の変化を合せて比較すると，最高の活性値を示した部位では，アイにて異なり，腫瘍境界部が最高を示し，腫瘍中心ソザイムは既にLDH5を主活性帯とする肝臓型部が最も低い．アイソザイムパターンは腫瘍部，一1071一 22 境界部において，LDH3，45が主活性で，健常群 spec量es speciac pattcrns． Proc Natl Acad Sci 45753∼763 （1959）と異なる．非腫瘍部ではLDH5が主活性となり， 5）W量eland， Th． and G． P∬eiderer 3 Nachweis いわゆる肝臓i型を示した． der Heterogenitat von Milchsaure dehydro genascn verschiedencn Ursprungs durch 4）非腫瘍部での組織LDHの変化では，腫瘍 Tragerclektrophorese． Biocb Zschr 329 H 2∼ 外縁で活性値は最高を示すが，アイソザイムパタ 116（1957）ーンは肝臓型である．しかし，さらに腫瘍に近い 6）服部信：癌の血清酵素学的診断（肝癌を中心として）．診断と治療531950∼1956（1965） 7）川井和夫・本山玲子・井口栄子：血清乳酸脱部位のアイソザイムは，腫瘍組織を含まないにもかかわらずLDH3，も5に活性のある腫瘍型であっ水素酵素のIsozymeに関する研究．県立ガンセンター新潟病院医誌3（2）47∼53（1963） 8）浅野健夫・小野昌利・福留正郎・高安正雄・鷹野譲・和気由紀子・宇都宮俊裕：癌を中心とした内科的疾患における血清および胃粘膜た．これは，肝癌境界において，病理組織学的な腫瘍境界を越え．て，生化学的境界が存在することを意味するものと考えられた． 5）肝癌組織mHと細胞異型度を示すEd・の乳酸脱水素酵素』アイソザイムについて．日 mondson分類との間に関係が認められた．特に内会誌541060∼1069（1965） 9）吉田光孝・吉場朗：LPH一アイソザイムの臨床的応用．臨床病理17185∼189（1969） 10）石井隆；．転移性肝癌におけるLDHおよびそのIsozymeに関する実験臨床的研究．日本消化器病学会雑誌67（2）108∼121（1970） 11）野間啓輔：肝疾患における血清LDH Zymo・ gramの検討．肝臓16（9）587∼595（1975） 12）栗原稔：組織中の乳酸脱水素酵素活性値と LDH5の推測絶対値において一層，明瞭であった． 6）肝癌における血清LDHアイソザイムは，血清中に恒常的に存在するLDH酵素に，肝腫瘍からの逸脱，崩壊および腫瘍周辺の炎症，腫瘍の影響などによる組織LDH放出により反映されるそのIsozyme pattemの腫瘍特異性に関する臨ものと考えられる．床的ならびに実験的研究．日大錦塗25393∼ 422 （1966） 13）服部信：肝癌における乳酸脱水素酵素アイソザイム，日本臨床24371∼377（1966）稿を終わるにあたり，ご指導，ご校閲を賜わった遠藤（なお，本論文の要旨および一部は，第60回日本消化 14）P且e童derer，αund ED． Wacぬsm耐h言Alters und Funktionsabh銭ngige Dif艶renzierung der Lactat Dehydrogenase Mcnsehlicher Organe． Bioch Zschr 334185∼198（1961）器病学会総会，第62回日本消化器学会総会および第10回 15）Starkweather， W凪and H．K：． Shock 3 光夫教授並びに小幡裕教授に深謝するとともに，当センター諸学兄姉，当センター検査室諸氏に感謝致します． Somc observation on the lactate dehydrogeneル Intemational Congress of Gastroenterologyにおいて著 ase of human neop正astic tissue．8ioch Biophys 者が発表した．） Acta 62440∼442（1962） 16）Morgenste叫S．， R． Flor， G． Kessler and （ヨ）＿飾α斎乱面。㎞夢 B．Klein 3 Automated detcrmination of NAD coupled enzymes． Determination Qf lactiq fbrmente im Blutserum von Tumor Ratten． Biochem Zschr 314：399∼408（1943） dehydrogcnase． Anal Bioch 13149∼161（1965） 17）wieme， R．J・31mproved technique of agargel e正ectrophoresis oll microscope s星ides． Clin 2）Hi11， B．R． and C． Levi 3 Elevation of a serum． Chim Acta 4317∼321（1959） 18）Castagna，肌；Blood content of rat llver homogenates， Nature 205405∼907（1965） component in neoPlastic disease． Cancer Rcs 14513∼515 （1954） 3）Vesse1， E．S． and A．G． Beam＝Localization of lactic acid dchydrogenase activity in 19）Edmo職doson， H．A． and P．E． Ste量ner 3 serum． Proc Soc Exp 8iol Med 9496∼100 Primary carc三noma of the至iver． A study of （1957） lOO cases among 48900 necropsies． Cancer 7 4）Market， C．L． and F． Mo皿er 3 Multiple 462∼503（1954） fbrms of enzymes； tissue， ontogenic and 一1072一