Data Sheet Hot Start Pol Heat-activatable DNA polymerase for high specificity Thermus aquaticus, recombinant, E. coli Hot Start Pol 【本酵素の特徴】 本酵素は特異リガンドにより、常温時のポリメラーゼ活性を抑制したポリメラーゼであり、特異性に優れ、ター ゲット DNA 以外にも副産物が含まれる場合に有効です。常温時に起こる非特異的にアニールするプライマーおよび プライマーダイマーによる伸長反応が抑制されます。この抗体はターゲット DNA を解離させる際の高温のステップ (Initial denaturation)で不活化されるので、以後 DNA ポリメラーゼは通常通りに機能することができます。 【内容】 ● Hot Start DNA Pol (red cap) 50μl 5 units/μl heat–activatable DNA Polymerase in 20mM Tris-HCl, 100mM KCl, 0.1 EDTA, 1mM DTT, 0.5％ Tween-20, 0.5％ Nonidet P-40, 50％(v/v) Glycerol, pH 8.0(25℃) ● 10×Hot Start buffer complete (green cap) 1000μl 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl 2, pH8.5(25℃) ● 10×Hot Start buffer without MgCl2 (blue cap) 1000μl 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, pH8.5(25℃) ● MgCl2 Stock Solution (yellow cap) 1000μl 25mM MgCl2 ● GC Enhancer (white cap) 2000μl 【PCR プロトコール】 ● 反応溶液の調製 50 μl PCR Assay 5 μl 10×Hot Start buffer complete 200 μM each dNTP 0.2-1 μM Forward Primer 0.2-1 μM Reverse Primer 2-50 ng Template DNA 0.2-0.5 μM(1-2.5 units) Hot Start Pol1) Fill up to 50 μM PCR grade H2O green cap ※dNTP は 10mM を 1μl 使用で 200μM ※Primer は 10μM を 1μl 使用で 0.2μM red cap ● PCR 反応 Initial denaturation 94℃ 2 min Denaturation 94℃ 30 sec 45-68℃ 30 sec Elongation3) 72℃ 30 sec – 4 min Final Elongation 68℃ 2 min 2) Annealing 1× 30× 1× Hot Start Pol Data Sheet Hot Start Pol 1) ポリメラーゼは反応試薬中、必ず最後に添加して下さい。 2) アニーリング温度は使用する Primer の Tm 値に依存します。 3) 伸長時間は、増幅したいターゲット DNA の長さに依存します(1min/1kb)。 【活性の定義】 72℃で 30 分間に 10nmol のデオキシヌクレオチドを不溶性沈殿に取り込む酵素量を 1unit とする。 【MgCl2 Stock Solution】 本試薬には、MgCl2 Stock Solutionが標準添付されておりますので、実験に応じて最適なMgCl2濃度にすることが可 能です。Mg2+の反応溶液中の濃度は通常 1.5ｍＭが適量とされており、10×Hot Start buffer completeは、反応溶液中 での終濃度が 1.5mMとなるようにMgCl2が混合されておりますが、最適化を行う場合は、バッファーとして 10×Hot Start buffer without MgCl2をご使用下さい。 50 μl PCR Assay MgCl2 Stock. 2μl 3μl 4μl 6μl Final MgCl2 Conc. 1mM 1.5mM 2mM 3mM 【GC Enhancer】 本試薬には GC Enhancer が標準添付されております。GC Enhancer は、GC 含有率の高いターゲットを増幅する際 に有効な試薬です。ご使用の際は、反応溶液中、終濃度が 10 - 20％となるように添加することを推奨しております。 （原液：100％） 【保存】 -20℃ ※本試薬は研究目的の場合にのみご使用いただけます。診断・臨床用試薬として使用しないで下さい。本製品の使 用にあたり、安全性の確保に十分留意して下さい。 Hot Start Pol Data Sheet 販売元 株式会社グライナージャパン 東京都港区赤坂 2-17-44 福吉坂ビル 2 階 TEL：03-3505-8875 FAX：03-3505-8945 http://www.greiner-bio-one.co.jp/ テクニカルサポート 株式会社ファスマック DNA 合成事業部 神奈川県厚木市緑ヶ丘 5-1-3 TEL：046-222-6962 FAX：046-222-8444 Mail：[email protected]
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