販売元 株式会社グライナージャパン 東京都港区赤坂 2-17-44 福吉坂ビル 2 階 TEL：03-3505-8875 FAX：03-3505-8945 http://www.greiner-bio-one.co.jp/ テクニカルサポート 株式会社ファスマック バイオ研究支援事業部 神奈川県厚木市岡田 3088 ケーオービル A 棟 4 階 TEL：046-281-9902 FAX：046-281-9931 Mail：[email protected] Data Sheet Taq Pol ／ high yield buffer Thermostable DNA polymerase Thermus aquaticus, recombinant, E. coli Taq Pol ／ high yield buffer 【本酵素の特徴】 本試薬は Routine PCR 用に最適化されており、合成効率に優れ、広範囲の反応系に適応できます。付属のバッフ ァー*には、標識・修飾されたヌクレオチドの取り込みを促進する成分が含まれております。 ＊バッファーには、界面活性剤が含まれておりますので、自動分注装置をご利用の場合にはお勧めいたしません。 【内容】 ● Taq Pol (red cap) 50μl 5 units/μl Taq DNA Polymerase in 20mM Tris-HCl, 100mM KCl, 0.1 EDTA, 1mM DTT, 0.5％ Tween-20, 0.5％ Nonidet P-40, 50％(v/v) Glycerol, pH 8.0(25℃) ● 10×High Yield buffer complete (green cap) 1000μl 600mM Tris-HCl, 150mM (NH4)2SO4, 20mM MgCl2, 0.05％ Tween-20, 0.05％ Nonidet P-40, pH 8.8(25℃) ● 10×High Yield buffer without MgCl2 (blue cap) 1000μl 600mM Tris-HCl, 150mM (NH4)2SO4, 0.05％ Tween-20, 0.05％ Nonidet P-40, pH 8.8(25℃) ● MgCl2 Stock Solution (yellow cap) 1000μl 25mM MgCl2 ● GC Enhancer (white cap) 2000μl 【PCR プロトコール】 ① 3kb 以下の DNA 増幅を行う場合 ● 反応溶液の調製 50 μl PCR Assay 5 μl 10×High Yield buffer complete 200 μM each dNTP 0.2-1 μM forward Primer 0.2-1 μM reverse Primer 2-50 ng Template DNA 0.2-0.5 μM(1-2.5 units) Taq Pol1) Fill up to 50 μM PCR grade H2O green cap ※dNTP は 10mM を 1μl 使用で 200μM ※Primer は 10μM を 1μl 使用で 0.2μM red cap ● PCR 反応 Initial denaturation 94℃ 2 min Denaturation 94℃ 30 sec 45-68℃ 30 sec Elongation3) 72℃ 30 sec – 4 min Final Elongation 68℃ 2 min Annealing 2) 1× 30× 1× Taq Pol / High yield buffer Data Sheet Taq Pol ／ high yield buffer 1) ポリメラーゼは反応試薬中、必ず最後に添加して下さい。 2) アニーリング温度は使用する Primer の Tm 値に依存します。 3) 伸長時間は、増幅したいターゲット DNA の長さに依存します(1min/1kb)。 【活性の定義】 70℃で 30 分間に 10nmol のデオキシヌクレオチドを不溶性沈殿に取り込む酵素量を 1unit とする。 【MgCl2 Stock Solution】 本試薬には、MgCl2 Stock Solution が標準添付されておりますので、実験に応じて最適な MgCl2 濃度にすることが 可能です。本試薬を用いる際、Mg2+の反応溶液中の濃度は 2.0mM を適量としており、10×High Yield buffer complete は、反応溶液中での終濃度が 2.0mM となるように MgCl2 が混合されておりますが、最適化を行う場合は、バッファ ーとして 10×High Yield buffer without MgCl2 をご使用下さい。 50 μl PCR Assay MgCl2 Stock. Final MgCl2 Conc. 3μl 4μl 6μl 8μl 1.5 mM 2mM 3mM 4mM 【GC Enhancer】 本試薬には GC Enhancer が標準添付されております。GC Enhancer は、GC 含有率の高いターゲットを増幅する際 に有効な試薬です。ご使用の際は、反応溶液中、終濃度が 10 - 20％となるように添加することを推奨しております。 （原液：100％） 【保存】 -20℃ ※本試薬は研究目的の場合にのみご使用いただけます。診断・臨床用試薬として使用しないで下さい。本製品の使 用にあたり、安全性の確保に十分留意して下さい。 Taq Pol / High yield buffer Data Sheet
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