Data Sheet High Fidelity Pol Thermostable DNA polymerase for high accuracy Thermus species, recombinant, E. coli High Fidelity Pol 【本酵素の特徴】本酵素は、Taqポリメラーゼに校正機能を持つ酵素をブレンドしたポリメラーゼであり、高い正確性と優れた伸長性を併せ持っております。ロングリードを行う場合に有効で(<30kb)、Taqポリメラーゼに比べて、高い正確性を有します(Taqの約 4 倍、ER*High Fidelity Pol==3.4×10 -6)。 * ER(エラー率)は、変異頻度／塩基数×サイクル数によって算出されます。【内容】 ● 2.5units/μl High Fidelity Pol (red cap) ● 10×High Fidelity buffer (green cap) ● GC Enhancer (white cap) 100μl 1000μl 1000μl 【PCR プロトコール】 ● 反応溶液の調製 50 μl PCR Assay 5 μl 10×High fidelity buffer 200 μM each dNTP 0.2-0.5 μM forward Primer 0.2-0.5 μM reverse Primer 1-100 ng Template DNA 0.5 μM(1.25 units) High Fidelity Pol1) Fill up to 50 μM PCR grade H2O green cap ※dNTP は 10mM を 1μl 使用で 200μM ※Primer は 10μM を 1μl 使用で 0.2μM red cap ● PCR 反応 Initial denaturation 95℃ 2 min Denaturation 95℃ 20 sec 50-68℃ 30 sec Elongation 72℃ 1 min/kb Final Elongation 72℃ 1 min/kb Annealing2) 3,4) 1× 20-30× 1× 1) ポリメラーゼは反応試薬中、必ず最後に添加して下さい。 2) アニーリング温度は使用する Primer の Tm 値に依存します。 3) ターゲットが 5kb 以上の場合、伸長温度は 68℃に設定することをお勧めします。 4) 伸長時間は、増幅したいターゲットの長さに依存します(1min/1kb)。 High Fidelity Pol Data Sheet High Fidelity Pol 【活性の定義】 74℃で 30 分間に 10nmol のデオキシヌクレオチドを不溶性沈殿に取り込む酵素量を 1unit とする。【GC Enhancer】本試薬には GC Enhancer が標準添付されております。GC Enhancer は、GC 含有率の高いターゲットを増幅する際に有効な試薬です。ご使用の際は、反応溶液中、終濃度が 10 - 20％となるように添加することを推奨しております。（原液：100％）【保存】 -20℃ ※本試薬は研究目的の場合にのみご使用いただけます。診断・臨床用試薬として使用しないで下さい。本製品の使用にあたり、安全性の確保に十分留意して下さい。 High Fidelity Pol Data Sheet 販売元株式会社グライナージャパン東京都港区赤坂 2-17-44 福吉坂ビル 2 階 TEL：03-3505-8875 FAX：03-3505-8945 http://www.greiner-bio-one.co.jp/ テクニカルサポート株式会社ファスマック DNA 合成事業部神奈川県厚木市緑ヶ丘 5-1-3 TEL：046-222-6962 FAX：046-222-8444 Mail：[email protected]