Ionization Variable Unit- IVU

IVU
- I o n i z a t i o n Va r i a b l e
Unit-
・・・IVU構成部分
本UnitをESIのアシストガス流路に設置することにより、アシストガスの組成を調製することが可能
になります。例として送り込む窒素にアセトニトリルやイソプロパノール、メタノールなどの気化気体
をESIアシストガスに導入することが可能です。
⇒N2ラインからの分岐パーツ、チューブ、圧力減圧弁、イオンソース部はIVUに含まれておりません。イオンソース部にアシスト
ガスを導入する構造を持たない場合、別途構成パーツを導入する必要があります。
Charge shiftの例：25 fmol BSA-digest, IVU-Methanol
100
461.749
90
Relative Abundance
582.321
Standard
80
70
653.365
60
+3
464.253
50
40
Nano-ESI LC/MS/MS condition
512.257
621.883
+3
30
547.320
474.233
450.238
628.311
537.253
487.735
446.275
458.192
584.738 521.271
10
+2
+2
489.193
20
443.787 740.406
499.303
589.796
426.732
558.261
732.470
0
100
IVU-Methanol
90
80
70
450.237
60
50
40
461.748
+2
30
20
584.734
10
582.319
653.362
464.251
512.255
571.861
6
7
8
9
443.784 740.402
10
11
12
13
Time (min)
14
MS:
Mode:
IVU condition;
IVU flow rate
Sample
OrbiTrap XL (Thermo)
Full MS scan
N2/ACN or Methanol
1.38 L/min
25 fmol BSA
/100 ng Hela digest
+1
+1
733.283
0
5
Zaplous LC/MS system(AMR)
Advance LC(Bruker Michrom)
HTS PAL(CTC Analytics)
1.2 ul/min
C18, 0.2x150, 3um, 120A
+2
710.844
537.250 487.733
545.341
696.357
LC/MS system:
LC pump:
Auto sampler:
Flow rate:
Analytical Column:
15
732.466
852.452
558.258
16
997.594
17
18
25 fmolのBSA-digestをLC/MSによって測定しました（Base peak
Chromatogram↑）。数種類のペプチドピークについて価数変化が起きていることを
示しています。
19
20
エーエムアール株式会社
東京都目黒区中根2-13-18
第百生命都立大駅前ビル〒152-0031
TEL: (03)5731-2281 FAX: (03)5731-2283
URL: http://www..amr-inc.co.jp
Number of identified proteins, T3
+27％
300
206
262
+11％ 228
150
100
100 ng Hela
/T3-IVU, N2
100 ng Hela
/T3-IVU, N2
and ACN
150
100
474.23
0
100 ng Hela
/T3-IVU, N2
and Methanol
100 ng Hela
/CSI-IVU, N2
100 ng Hela
/CSI-IVU, N2
and ACN
X05Hela3 #2081 RT: 19.53 AV: 1 NL: 1.00E5
T: FTMS + p NSI Full ms [420.00-1600.00]
+3
Standard
80
100 ng Hela
/CSI-IVU, N2
and Methanol
↑ IVU-導入効果の例：サンプル-100 ng HeLa digest
クローズ型ESIソース（CSI）にIVUを導入してタンパク質同定数の増加
が認められた。
X05Hela3 #2084 RT: 19.56 AV: 1 NL: 1.87E2
T: ITMS + c NSI d Full ms2 [email protected] [175.00-1385.00]
430.80
100
100
Standard
90
80
90
No
Identified
80
+2
+2
60
40
710.85
711.85
20
60
70
Relative Abundance
70
Relative Abundance
Relative Abundance
240
50
↑ IVU-導入効果の例：サンプル-100 ng HeLa digest
オープン型ESIソース（T3）にIVUを導入してタンパク質同定数の増加
が認められた。
50
686.87
40
687.38
30
445.12
490.78 519.14
701.84
593.16
667.18
686.8
687.0
687.2
687.4
m/z
687.6
687.8
688.0
70
Relative Abundance
701.84
442.73
450
490.78
500
536.17
550
593.16
600
m/z
700
↑ IVU-メタノール導入効果の例：サンプル-BSA 25 fmol
3価イオンが減少し、2価ピークへの価数シフトが認められた。
741.73
200
70
687.87
z=2
688.36
z=2
687.20
z=?
688.20
z=?
0
687.2
687.4
m/z
687.6
687.8
60
1172.67
1195.53
1000
1327.13
1200
688.0
688.2
1028.05
246.15
430.26
671.00
50
40
345.23
944.20
586.56
573.20
1198.15
815.32
30
20
687.0
800
m/z
1127.01
80
687.37
z=2
40
686.8
600
Protein
Identified
90
50
686.6
400
100
60
10
944.32
896.42 964.86
X16Hela #2186 RT: 19.51 AV: 1 NL: 2.88E2
T: ITMS + c NSI d Full ms2 [email protected] [175.00-1385.00]
30
737.30
667.18
650
+2
80
474.23
780.39
572.84
0
688.2
IVU-ACN
686.87
z=2
90
20
0
100
+2
1127.37
586.68 668.63
10
686.6
Relative Abundance
+3
60
342.99
267.04
688.38
0
712.35
IVU-Methanol
40
20
X16Hela #2185 RT: 19.50 AV: 1 NL: 1.00E5
T: FTMS + p NSI Full ms [420.00-1600.00]
80
50
687.88
10
722.31
710.84
60
30
20
0
100
40
268
200
50
100
+12％
256
250
200
0
+7％
300
Protein ID
Protein ID
250
Number of identified proteins, CSI
557.95
20
782.06
458.26
849.27
10
130
200
400
600
800
m/z
1000
1200
↑ IVU-アセトニトリル導入効果の例：サンプル100 ng HeLa digest
2価イオンが増加することによりMSMSによってタンパク質が同定された。
IVU-実験評価ご協力：
東京大学先端科学技術研究センター（RCAST）システム生物医学分子生物医学分野川村猛先生
⇒IVUによりイオン化ペプチドのチャージシフト効果が期待できます。4価、5価など多価傾向にイオン化するペプチドが2価、3価にチャージシフトするこ
とにより、ペプチド/タンパク質の同定数向上が期待できます。または多価シフトによって、分子量の大きいペプチドの同定数向上も期待できます
1)2)3)。
1) Andreas Brekenfeld, Kristina Marx, et al., ASMS 2013, TP716
エーエムアール株式会社
2) Stephanie Kaspar, Pengelley Stuart, et al., ASMS 2013, MP24, #486
東京都目黒区中根2-13-18
3) Matthias Pelzing, Sebastiaan Dolman, et al., ASMS 2012, ThP25
第百生命都立大駅前ビル〒152-0031
TEL: (03)5731-2281 FAX: (03)5731-2283
URL: http://www..amr-inc.co.jp

Download Report