High Sensitivity Protein-250-Kit Empfindlichkeit wie bei Silberfärbung mit dem Agilent 2100 Bioanalyzer Empfindlichkeit im Pikogrammbereich, kombiniert mit einem extra breiten linearen dynamischen Bereich Das High Sensitivity Protein-250-Kit ist der erste Mikrofluid-Assay für den Proteinnachweis im unteren Pikogrammbereich. Der lineare dynamische Bereich erstreckt sich über 4 Größenordnungen und gestattet damit die Quantifizierung niedrig konzentrierter Verunreinigungen neben dominanten Hauptpeaks in nur einem Lauf. Das Kit eignet sich hervorragend zur Lösung typischer QA-/QCFragestellungen in Verbindung mit dem Proteingehalt - und das schnell und reproduzierbar, wie es nur ein Bioanalyzer kann. Gründe für die Umstellung von CE-LIF auf den Agilent 2100 Bioanalyzer • Gründe für die Umstellung von SDS-PAGE mit Silberfärbung auf den Agilent 2100 Bioanalyzer • • • • • Zuverlässigere Daten – Vorgepackte Reagenzien und standartisierte Assays liefern hoch reproduzierbare Daten. Schnellere Ergebnisse – Größenbestimmung und Quantifizierung von 10 Proben nach der Probenpräparation (Analysendauer: 30 Minuten). Quantitative Ergebnisse – relative und absolute Quantifizierung in einem weiten linearen Bereich, Reinheitsdaten inklusive. Kein manuelles Färben und Entfärben – alles in einem einzigen automatisierten Schritt enthalten. Automatisierung – Trennung, Nachweis und Analyse verlaufen automatisiert und gewährleisten benutzerunabhängige und normierte Ergebnisse. • • Schnellere Ergebnisse – Größenbestimmung und Quantifizierung von 10 Proben in weniger als 40 Minuten, Daten zu Qualität, Reinheit und Konzentration inklusive. Vordefinierte Methode – macht die Methodenentwicklung überflüssig; der Validierungsaufwand wird geringer. Weiter dynamischer Bereich für die Quantifizierung – robuste • • Quantifizierung von kleinen Peaks unter 0,1 % neben einem Hauptprodukt in ein und demselben Lauf. Geeignet für die Qualitätskontrolle in Arbeitsbereichen, die strengen gesetzlichen Richtlinien unterliegen – 21 CFR Part 11-konforme Security Pack Software, IQ- und OQ/PV-Dienste für Hardware und Software, Konformitätserklärung für Verbrauchsmaterialien. Minimaler Probenverbrauch – nur 5 µl Proteinprobe je Analyse erforderlich. Technische Daten Protein 250 (Bestellnr. 5067-1575) Größenbestimmung Typische Auflösung Typische Richtigkeit Empfindlichkeit LOD (S/N >3) Linearer dynamischer Bereich Reproduzierbarkeit Quantifizierung Gesamtproteinmenge für die Markierung 10-250 kDa 10 % Unterschied in MW 10 % CV (BSA) 1 pg/µL (markerte BSA in Wasser) bis zu 4 Größenordnungen 20 % CV (BSA) ≥1 ng/µl Physikalische Daten Analysendauer Probenzahl Probenvolumen Kitstabilität 30 Minuten 10 Proben/Chip 4 µl für die Markierungsreaktion 6 Monate Empfindlichkeit und Quantifizierung in nur einem Schritt Arbeitsablauf (einschließlich Präparation neuer Proben für die kovalente Proteinmarkierung) S Probe am p le Transfer in geeigneten Puffer 5 – 30 min (Präzipitation, Ultrafiltration, Pufferaustausch-Zentrifugationssäulen) Markierung mit Farbstoff 30 min 5 min Markierungskit (N-Hydroxysuccinimidylester-Chemie) Probenpräparation für den 2100 Bioanalyzer (SDS-Denaturierung, ggf. Verdünnung) Trennungskit 35 min Analyse auf dem 2100 Bioanalyzer S am Daten p lep le S am 95 48 24 12 6.0 3.0 1.5 0.7 Größe kDa 250 59 29 15 7.3 3.7 1.8 0.9 0.5 Größe kDa 100000 250 150 10000 100 70 150 50 100 30 • Probenpräparation für die Markierungsreaktion (Überführen der Probe in einen Puffer mit niedriger Salzkonzentration im pH-Bereich von 8-9) auf Wunsch des Kunden. • Probenmarkierung (mit Hilfe des Markierungskits wie im Agilent Markierungsprotokoll beschrieben) • Chip-Präparation und Analysenlauf auf dem Agilent 2100 Bioanalyzer (unter Anwendung der Kitreagenzien wie in der Agilent Kurzanleitung beschrieben) Mehrfachergebnisse in einem einzigen Analysenschritt ng geladenes Protein Signal-Rausch-Verhältnis ng geladenes Protein Der Arbeitsablauf von der Ausgangsprobe bis hin zu den digitalen Daten umfasst 3 Schritte und dauert insgesamt weniger als 2 Stunden. 70 50 30 15 15 Das High Sensitivity Protein-250-Kit liefert mehrere Ergebnisse in einem einzigen Analysenschritt. y = 12,791x0,8578 R2=0,9964 1000 100 10 1 0.1 1.0 10.0 100.0 1000.0 10000.0 Konzentration von markiertem BSA auf dem Chip in pg/µL 5 PA-Gel nach Silberfärbung Ansicht eines 2100-Pseudo-Gels Kits für den Agilent 2100 Bioanalyzer sind für die Analyse von DNA, RNA, Proteinen und Zellen erhältlich. Kontaktieren Sie uns: Telefon: 0800/603-1000 (Deutschland, gebührenfrei) 01/25125-6800 (Österreich) 0848/80356 (Schweiz) E-Mail: [email protected] • Reproduzierbare hochwertige Daten bis hinunter in den Pikogrammbereich von Proteinen • Lineare Quantifizierung über einen Bereich von 4 Größenordnungen • Schnelle Reinheitsdaten als digitalisierter und normalisierter Datensatz www.agilent.com/chem/2100-protein250 © 2008 Agilent Technologies Inc. Publikationsdatum: 1. März 2008 Publikationsnummer: 5989-7997DEE