ZUVERLÄSSIGE, SchnELLE Lc-AnALySEn

Poroshell 120 Säulen von Agilent – für HPLC und UHPLC
ZUVERLÄSSIGE, schnelle
LC-Analysen
Mit Poroshell 120-Säulen von Agilent
erhöhen Sie die Produktivität der
LC- UND LC/MS-Geräte in Ihrem Labor
„Wir haben uns aufgrund
der stabilen Leistung für
Poroshell 120 entschieden.“
„Poroshell 120 liefert eine
zuverlässige, exzellente
Leistung und ist damit der
neue ‚Standard‘ in unserem
Labor.“
„Bei komplizierten Proben,
und das sind bei mir die
meisten, kann ich mit
Poroshell 120-Säulen sehr
viel Zeit sparen.“
„Poroshell 120 ist für mich die
erste Wahl.“
Aussagen von Poroshell
120-Nutzern
Poroshell 120-Säulen steigern die Effizienz bei der Standard-HPLC und erhöhen die
Leistungsfähigkeit sämtlicher Geräte erheblich, ganz gleich, ob es sich um ältere 400- oder
neuere 1300-bar-UHPLC-Systeme handelt.
Mit diesen Säulen erreicht die Technologie, die Agilent mit seinen Poroshell 300-Säulen
eingeführt hat, ein neues Niveau: Sie ermöglichen einen höheren Durchsatz und eine bessere
Auflösung für ein breiteres Spektrum von kleinen Molekülen und Peptiden als je zuvor. Sie
zeichnen sich aus durch:
• Hervorragende Reproduzierbarkeit von Charge zu Charge – Poroshell 120-Säulen
werden mit einem eigens entwickelten, einstufigen Verfahren für poröse Außenschichten
hergestellt. Dadurch werden Unterschiede von Säule zu Säule und Charge zu Charge deutlich
reduziert.
• Geschwindigkeit und Auflösung wie bei Sub-2-µm-Säulen und erhebliche
Verbesserungen gegenüber 5-µm-Säulen, jedoch mit viel geringerem Rückdruck. Diese Säulen
verleihen HPLC und UHPLC eine neue Dimension an Flexibilität und Effizienz.
• Ausgezeichnete Peakform, insbesondere im pH-Bereich von 6 - 7, für schnellere und
genauere Resultate
• Lange Lebensdauer der Säule – Poroshell 120-Säulen verwenden eine 2-µm-Standardfritte
und verstopfen nicht bei verunreinigten Proben.
• Bis zu ZWÖLF Säulentypen, je nach Partikelgröße, einschließlich SB-C18 und SB-C8
für Applikationen bei niedrigem pH-Wert sowie Poroshell HPH-C18 und HPH-C8 für
Applikationen bei hohem pH-Wert
• Einfachen Methodentransfer auf ZORBAX gebundene Phasen und innerhalb der Poroshell
120-Produktfamilie für höchste Produktivität in allen Labors rund um die Welt
• Optionen für UHPLC-Vorsäulen – reduzierte Betriebskosten durch verlängerte Lebensdauer
der Poroshell 120-Säulen
• Skalierbarkeit innerhalb der Poroshell 120-Produktfamilie mit Säulenoptionen in
4-μm- und 2,7-μm-Konfigurationen für optimale Leistung für Ihre Methode
2
Inhalt
Was ist das Besondere an Poroshell 120-Säulen?
Die einzigartige Herstellungsweise der oberflächenporösen Partikel und gebundenen Phasen
ermöglicht bessere Ergebnisse Seite 4
Eine Familie von Partikelgrößen und gebundenen Phasen für
flexible Selektivität und Skalierbarkeit
Poroshell 120-Säulen mit 4-μm- und 2,7-μm-Partikeln lassen sich von und auf ZORBAX-Phasen
skalieren Seite 6
Ihre HPLC wird produktiver
Fast-LC-Leistung bei HPLC-Drücken Seite 16
Alle LC- und LC/MS-Geräte werden produktiver
Hochgeschwindigkeitstrennungen mit hoher Auflösung auf Ihren Geräten Seite 19
Steigerung der Flexibilität Ihrer UHPLC-Methoden
Sehr schnelle, hocheffiziente Trennungen bei größtmöglicher Bandbreite der Trennbedingungen
Seite 21
Einfacher Methodentransfer
Einsparung von Zeit und Geld durch die Methodenübertragung von 5-µm- oder 3,5-µm-Säulen
auf Poroshell 120-Säulen Seite 24
Lösungen für ärgerliche Durchsatz- und Auflösungsprobleme
Bewältigung der täglichen Herausforderungen mit Poroshell 120-Säulen Seite 28
Neue Möglichkeiten für die Analytik von Proteinen und Peptiden
Rascheres Peptid-Mapping und schnellere Proteintrennungen mit Poroshell-Säulen Seite 31
Deutlich bessere Flüssigchromatographie
Die neuen Agilent LC-Systeme der Serie 1290 Infinity II Seite 35
Technische Daten und Bestellinformationen Seite 36
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
3
Hohe Effizienz bei niedrigen Drücken
Nachgewiesene Säule-zu-Säule-Konsistenz
Das ist das Besondere an Poroshell 120
Ein Hauptmerkmal von Agilent Poroshell 120-Säulen ist ihre mikropartikuläre Säulenpackung mit poröser
Außenschicht.
Poroshell 120-Säulen sind mit 4-µm- und 2,7-µm-Partikeln erhältlich und bieten skalierbare Leistung.
Die Partikel bestehen aus einem festen Silicakern mit poröser Außenschicht. Durch diese spezielle
Konfiguration erhalten Sie alle Leistungsvorteile kleinerer vollständig poröser Partikel bei niedrigen
Rückdrücken.
1,8 μm durchgängig
Agilent Poroshell 120 2,7 μm
porös
Agilent Poroshell 120 4 μm
0,5 μm
0,75 μm
1,7 μm
1,8 μm
2,7 μm
2,5 μm
Porengröße
120 Å,
ideal für
niedermolekulare
Verbindungen
4 μm
Die Herstellung eines Poroshell 120-Partikels
Um optimale Säulen für die Trennung niedermolekularer Verbindungen herstellen zu können, haben wir eine völlig
neue Technologie für oberflächenporöse Partikel entwickelt. Um größtmögliche Reproduzierbarkeit der Partikel
und der chromatographischen Ergebnisse zu erreichen, wurde die Anzahl der Fertigungsschritte auf ein Minimum
reduziert.
SCHRITT 1
SCHRITT 3
Die Herstellung des festen Kerns
SCHRITT 2
Die festen Kerne der Poroshell 120-Partikel
weisen eine sehr glatte Oberfläche und eine
einheitliche Partikelgröße auf. Das trägt zur
engen Gesamtverteilung der Partikelgröße
bei. Das Ergebnis ist ein dichter gepacktes
Säulenbett und höhere Effizienz als bei
durchgängig porösen Partikeln.
Aufbringen der porösen
Außenschicht
Agilent bringt die poröse Außenschicht
in einem einzigen Fertigungsschritt
auf, welcher der bei der Fertigung
traditioneller ZORBAX-Säulen eingesetzten
Koazervationstechnik ähnlich ist. Mit diesem
einzigartigen, einstufigen Verfahren erhalten
wir bessere Ergebnisse und eine bessere
Reproduzierbarkeit von Säule zu Säule als
andere Hersteller.
Aufbringen der gebundenen
Phase
Die Produktfamilie der Agilent Poroshell
120-Phasen wird in Abstimmung mit
den ZORBAX-Produkten erweitert, um
Skalierbarkeit und Flexibilität bei der
Methodenentwicklung zu gewährleisten.
4
Ein Vergleich der
Partikelgrößenverteilungen von
durchgängig porösen Partikeln
und Poroshell 120-Partikeln
ZORBAX RX SIL 1,8 µm
ZORBAX RX SIL 3,5 µm
4 000
Nummer
Dieses Schaubild belegt, dass die
endgültige Partikelgrößenverteilung bei
Poroshell 120-Säulen besonders eng ist.
Das ist eine unmittelbare Folge der engen
Partikelgrößenverteilung der Kernpartikel.
Poroshell 120 2,7 µm
5 000
3 000
2 000
1 000
0
-1,5
Standard bei der
Partikelgrößenverteilung ist ein
90:10-Verhältnis, welches unter
1,5 liegen sollte
Die durchgängig porösen 1,8-μm-,
3,5-μm- und 5,0-μm-ZORBAX-Partikel
haben allesamt eine akzeptable
Partikelgrößenverteilung. Die Poroshell
120-Partikel jedoch weisen eine um 25 %
engere Partikelgrößenverteilung auf,
und das steigert die Trennleistung der Säule
erheblich.
Je einfacher der
Fertigungsprozess, desto
konsistenter die Säule
Ein einstufiges Verfahren für die Fertigung
der Außenschicht ermöglicht eine hohe
Reproduzierbarkeit der Säule. Dies ist aus
dem nebenstehenden Vergleich von fünf
Chargen erkennbar.
Die enge endgültige Partikelgrößenverteilung resultiert aus
der engen Partikelgrößenverteilung der Kernpartikel. Das trägt
zur Verringerung der Diffusion bei und ist der Grund für die
hohe Effizienz von Säulen mit oberflächenporösen Partikeln.
ZORBAX RX SIL 5,0 µm
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5 (µm)
Poroshell 120
(2,7 µm)
LN B10006
ZORBAX
1,8 µm
ZORBAX
3,5 µm
ZORBAX
5,0 µm
10 %
2,40 µm
1,67 µm
3,07 µm
4,59 µm
90 %
2,85 µm
2,45 µm
4,44 µm
6,21 µm
90:10-Verhältnis
1,16
1,47
1,45
1,35
Reproduzierbare Leistung von Charge zu Charge, Jahr
für Jahr
Poroshell 120-Partikel werden in einem speziellen Fertigungsprozess für poröse Partikel
hergestellt, der eigens von Agilent entwickelt wurde. Anstatt durch herkömmliche MultilayerTechnologie werden Poroshell 120-Säulen unter Verwendung eines einstufigen
Koazervationsverfahrens hergestellt, das konsistentere Partikel ergibt und damit
verlässlichere chromatographische Ergebnisse liefert.
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-902) aus fünf verschiedenen Chargen
2010
mAU
B10015
100
50
0
1
2
3
4
mAU
B10018
100
50
0
1
2
3
4
mAU
150
100
50
0
Min.
B11041
1
2
3
4
mAU
150
100
50
0
Min.
B11256
1
2012
Min.
2
3
4
mAU
150
100
50
0
Min.
B12041
1
2
3
4
Min.
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
5
Dank einer breiten Auswahl an
gebundenen Phasen müssen Sie
keine Kompromisse in puncto
Selektivität eingehen
Poroshell 120-Säulen werden am selben Produktionsstandort gefertigt
wie die branchenführende Agilent Produktfamilie der ZORBAX-Säulen.
Die Bindungschemie der Poroshell 120-Säulen ist mit allen ZORBAXSäulen abgestimmt. Das bedeutet für Sie: einfacherer Methodentransfer
und garantierte Skalierbarkeit von Labor zu Labor, rund um die Welt.
Alle Selektivitäten, die Sie brauchen, um Ihre Trennung
zu perfektionieren
Eine hervorragende erste Wahl
Poroshell 120 EC-C18 (USP L1) und EC-C8 (USP L7)*
Diese hochleistungsfähige Phase garantiert hervorragende
Peakform und Auflösung bei Säuren, Basen und neutralen
Verbindungen. Der Säulentyp weist große Ähnlichkeit mit der
ZORBAX Eclipse Plus-Phase auf und ermöglicht einen einfachen
Methodentransfer.
Ausgezeichnete Peakform, Effizienz, Auflösung und Lebensdauer.
O
O
O
O
O
O
N
N
O
N
N
O
N
N
N
N
N
HO
O
N
O
H
HO
HO
N
O
O
N
O
O
O
O
N
O
HO
O
N
O
HO
HO
HO
O
H3 C
Tipp: Wählen Sie zunächst die C18-Phase und verwenden Sie die C8-Phase für
geringere Retention bei verschiedenen
Proben.
O
O
O
O
OH
O
„Zahlreiche veröffentlichte Methoden von Agilent
verwenden Poroshell 120, was eine einfache
Methodenentwicklung ermöglicht.“
„Methoden können leicht von [ZORBAX] Eclipse
Plus-Säulen auf Poroshell 120 übertragen werden –
wir verwenden sie für alle Methoden.“
Zitate von Anwendern aus toxikologischen Laboren
6
6
C
N
N
N
N
O
O
O
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl (USP L11)*
O
Diese Phase bietet eine alternative Selektivität für
Verbindungen mit Phenylgruppen und ist der ZORBAX
Eclipse Plus Phenyl-Hexyl für leichten Methodentransfer
H3CO
sehr ähnlich.
OH H
N
CH 3
CH3
O
Poroshell 120 PFP (USP L43)*
H3C
O
OH
F
Alternative Selektivität für halogenierte
Substanzen und polare Analyten.
CH3
O
OH
OH
F
S
O
F
Applikationen BEI hohem pH-Wert HO
Poroshell HPH-C18 (USP L1)
und HPH-C8 (USP L7)
Das Silica in diesem speziellen Säulentyp wurde mit einem
patentierten Verfahren verändert, um die Stabilität im oberen
pH-Bereich zu erhöhen.
O
CH
HO
O
N
3
HO
O
O
O
H
HO
O
HO
O
CH
Bonus-RP ist polar eingebettet zur
Verbesserung der Peakform bei basischen
Substanzen im unteren und mittleren
pH-Bereich. Diese Phase entspricht der H3C
HO H
ZORBAX Bonus-RP.
O
O
HO
Poroshell 120 Bonus-RP (USP L60)
O
OH H
N
O
CH3
O
N
H
O
O
OH H
N
O
O
O
OH
Poroshell 120 HILIC*
Mit ihrem ungebundenen Silica
hält die Poroshell 120 HILIC
kleine polare Analyten zurück und
HO
trennt sie auf.
O
Applikationen bei niedrigem pH-Wert
StableBond SB-C18 (USP L1) und SB-C8
(USP L7)
StableBond zeigt gute Leistungen bei Säuren, Basen und
neutralen Verbindungen – mit überlegener Lebensdauer im
unteren pH-Bereich. Darüber hinaus ist ein problemloser
Transfer von ZORBAX SB-C18- und ZORBAX SB-C8Phasentypen auf diese Phasen möglich.
HO
O
N
H
N
Poroshell 120 EC-CN (USP L10)
O
Diese Cyano-Phase ist ZORBAX Eclipse XDB-CN
ähnlich und vereinfacht den Methodentransfer.
Poroshell 120 SB-Aq
Diese proprietäre Phase bietet eine alternative
Selektivitätsoption und eignet sich ideal für polare
Substanzen und hoch wässrige Bedingungen. Der
Säulentyp entspricht der ZORBAX SB-Aq.
HO
O O
OH
OH
O
OH
H
HO
H
HCl
N
H3C
OH
H
CH 3
OH O
HO
O
HO
OH
O
OH
OH
OH
OH
* Jetzt erhältlich mit 4-μm- und 2,7-μm-Partikelgrößen.
Videos, Application Notes und mehr, sowie Bestellmöglichkeiten, finden Sie auf agilent.com/chem/discoverporoshell
7
7
CH3
CH3
Agilent Poroshell 120 EC-C18
und Poroshell 120 SB-C18
bieten zur Trennungsoptimierung
unterschiedliche Selektivität
Mobile Phase: 35 % H2O, 65 % CH3CN
Flussrate: 1 ml/min
Temperatur: 30 ºC
5
1
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
4
0,5
0,45
0,4
MS-Akquisition: Dynamisches MRM
Verbindung
Vorläufer-Fragmentor
ion spannung
Anandamid
(AEA) 348 135
Palmitoylethanolamid
(PEA) 300
135
2-Arachidonoylglycerol (2-AG) 379 135
Oleoylethanolamid (OEA) 326 135
MS-Quelle:
Gastemp.: Gasfluss: Zerstäuber:
Kapillare:
Poroshell 120 SB-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 685975-302)
350 ºC
12 l/min
40 psi
4000 V
Analyten:
1. Anandamid (AEA)
2. 2-Arachidonoylglycerol
3. Verunreinigung
4. Palmitoylethanolamid (PEA)
5. Oleoylethanolamid (OEA)
0,35
0,3
0,25
0,2
2
0,15
0,1
3
0,05
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
2,2
2,4
2,6
2,8
3
3,2
3,4
3,6
3,8
Counts (%) vs. Erfassungszeit (Min.)
4
4,2
4,4
4,6
4,8
5
5,2
5,4
5,6
5,8
6
6,2
6,4
6,6
6,8
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-302)
1
5
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
0,5
4
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
2
0,2
0,15
3
0,1
0,05
300
0
250
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
2,2
2,4
2,6
2,8
3
3,2
3,4
3,6
3,8
4
Counts (%) vs. Erfassungszeit (Min.)
4,2
4,4
4,6
4,8
5
5,2
5,4
5,6
5,8
6
200
150
100
Agilent Poroshell 120 EC-C8:
geringere Retention für die
schnellere Analyse unpolarer
Substanzen
Mobile Phase:
60 % CH3CN, 40 % H2O
Flussrate:
0,85 ml/min
Temperatur:
26 ºC
Detektion:
254 nm
Probe:2 μl RRLC Checkout-Probe
(Best-Nr. 5188-6529),
Alkylphenone
50
0
Poroshell
120 EC-C8, 3,0 x 50 mm, 2,7 µm
0,5
1
1,5
(Best-Nr. 699975-306)
2
2,5
3
3,5
2
2,5
3
3,5
300
250
200
150
100
50
0
0,5
1
1,5
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 50 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 699975-302)
300
250
200
150
100
50
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
300
250
200
150
100
8
50
0
0,5
6,2
6,4
6,6
6,8
Säulen: Alle Säulen 4,6 x 100 mm
LC-System:
Agilent 1260 Infinity LC, Umgehung
von Druckpulsationsdämpfer und
Mischsäule
Mobile Phase: A: 0,1 % Ameisensäure
B: MeOH + 0,1 % Ameisensäure
Flussrate: 0,4 ml/min
Temperatur: 25 °C
Detektion: 260 nm
Probe: Phenolgemisch
Gradient: 40-80 % MeOH/14 min
ZORBAX Eclipse Plus C18 5 µm
mAU
200
100
0
2
4
6
8
10
12
Min.
4
6
8
10
12
Min.
4
6
8
10
12
Min.
6
8
10
12
Min.
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
mAU
200
100
0
2
Poroshell 120 EC-C18 2,7 µm
mAU
200
100
0
2
ZORBAX Eclipse Plus C18 1,8 µm
mAU
200
100
0
2
4
Phenolgemisch; Gradient skaliert auf Flüsse zwischen 0,5 und 3,5 ml/min
600
90,00
80,00
500
70,00
60,00
400
50,00
Druck (bar)
Diese Trennung einer Mischung von
Phenolen zeigt die Skalierbarkeit der
Selektivität von 5 μm Eclipse Plus C18auf Poroshell 120-Säulen mit 4-μm- und
2,7-μm-Partikelgröße. Es ist außerdem
eine deutliche Leistungssteigerung der
Peakkapazität erkennbar. Die 4-µm-Säule
bietet zudem einen minimalen Anstieg des
Rückdrucks gegenüber herkömmlichen
5-µm-Säulen, während die 2,7-µm-Säule
signifikant niedrigeren Rückdruck als Sub-2µm-Säulen bietet.
Phenolgemisch; Gradient bei 1,5 ml/min
Peakkapazität
Einfacher Ersatz für
herkömmliche LC-Methoden
mit 5-µm-Säulen
Eine Auswahl verschiedener Partikelgrößen
erleichtert Ihnen die Wahl der besten Säule für
Ihre Methodenentwicklung
40,00
30,00
20,00
200
100
10,00
0,00
300
0
1
2
3
Flussrate (ml/min)
4
0
0
1
2
3
Flussrate (ml/min)
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
Poroshell 120 EC-C18 2,7 µm
ZORBAX Eclipse Plus C18 1,8 µm
ZORBAX Eclipse Plus C18 5 µm
4
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
9
Leistungsfähige Screening-Methoden
mit Poroshell HPH-C18 und HPH-C8
Langlebigkeit, Stabilität und Zuverlässigkeit Ihrer Methode hängen von einer robusten
Methodenentwicklung ab. Weil sich Retention und Selektivität ionisierbarer Verbindungen
(z. B. von Säuren und Basen) bei verschiedenen pH-Werten erheblich verändern können, ist es
inzwischen üblich, bei der Methodenentwicklung Analysen im unteren, mittleren und oberen
pH-Bereich durchzuführen.
Poroshell HPH-C18 und HPH-C8 werden durch chemische Modifizierung der PoroshellPartikel mit einem patentierten Verfahren hergestellt, das Stabilität bei hohem pH-Wert verleiht.
Das bedeutet, dass Sie die Poroshell 120-Familie für all Ihre Anforderungen bei der Entwicklung
schneller LC-Methoden verwenden können, unabhängig vom pH-Wert der mobilen Phase.
Zuverlässige Trennungen bei unterschiedlichen pH-Werten
Hier wurde eine Methode im unteren, mittleren und oberen pH-Bereich angewendet, um jeweils dieselbe Mischung
aus Säuren, Basen und neutralen Verbindungen zu trennen. Die höchste Auflösung aller Verbindungen wurde im
oberen pH-Bereich erreicht; daher wäre ein hoher pH-Wert die beste Wahl für das weitere Vorgehen.
2
7
5
1
3
0
0,5
1
6
4
1,5
2
2,5
2
1
3
0
0,5
2
3
7
5
8
pH 3, 10 mM NH4 HCO 2
3,5
pH 4,8, 10 mM NH4CH3 CO2
6
4
1
1,5
2
2,5
3
7
1
3,5
pH 10, 10 mM NH4 HCO 3
8
6
3
0
5
4
0,5
Probe:
1. Procainamid
2. Koffein
3. Acetylsalicylsäure
4. Hexanophenon, Abbaupr.
8
1
1,5
2
5. Dipyrimadol
6. Diltiazem
7. Diflunisal
8. Hexanophenon
10
2,5
3
3,5
Hervorragende Stabilität bei hohen pH-Werten
Poroshell HPH-Säulentypen garantieren einheitliche Leistung und Langlebigkeit, auch bei Verwendung
mobiler Phasen mit hohem pH-Wert. Hier wurden 2 000 Injektionen einer Trennungsmischung mit sauren,
basischen und neutralen Verbindungen unter extremem Bedingungen bei pH 10 auf einer Agilent Poroshell
HPH-C18 und einer für den oberen pH-Bereich geeigneten Säule eines anderen Herstellers durchgeführt.
Die nicht von Agilent stammende Säule weist zwischen Nortryptylin und Heptanophenon einen Verlust an
Auflösung auf, während die Poroshell HPH-C18 die Auflösung beibehält.
Säule: Agilent Poroshell HPH-C18,
1
2
1,5
2,1 x 50 mm, 2,7 µm (Best-Nr. 699775-702)
3
2
7
4
5
2,5
3
Injektion 1
6
3,5
4,5 Min.
4
Injektion 500
1,5
2
2,5
3
3,5
4,5 Min.
4
Injektion 1000
1,5
2
2,5
3
3,5
4,5 Min.
4
Injektion 2000
1,5
2
2,5
3
3,5
LC-System: 1260 Infinity Binary LC
Flussrate: 0,4 ml/min
Mobile Phase: A: 1 0 mM Ammoniumbicarbonat,
eingestellt auf pH 10,0 in Wasser B: Acetonitril
Gradient: Zeit
0
5
5,1
4,5 Min.
4
Probe:
1. Methylsalicylat
2. 4 Chlorzimtsäure
3. Acetophenon
4. Chinin
5. Nortryptylin
6. Heptanophenon
7. Amitriptylin
%B
5
95
5
Säule: nicht von Agilent, hoher pH 2,1 x 50 mm, 3 µm
2
3
1
1,5
Injektion 1
4
2
2,5
5
3
4
3,5
7
6
4,5
Min.
Injektion 500
1,5
2
2,5
3
4
3,5
4,5
Min.
Injektion 1000
1,5
2
2,5
3
4
3,5
4,5
Min.
Injektion 2000
1,5
2
2,5
3
4
3,5
11
4,5
Min.
Optimieren Sie jede Trennung
mit einer Auswahl an orthogonalen Phasen
Bei der Optimierung von HPLC-Trennungen ist Selektivität das wirksamste Mittel. Aufgrund ihrer
außerordentlichen Flexibilität ist die Poroshell 120 EC-C18 der beste Ausgangspunkt für Ihre
Methodenentwicklung. Wenn Sie mit komplexen Analyten arbeiten, bietet die Poroshell 120-Familie viele
zusätzliche Säulentypen zur Auswahl.
Unsere Poroshell 120 PFP-Säulen enthalten beispielsweise einen Pentafluorphenyl-Liganden, der bei
herkömmlichen Umkehrphasen-Säulen einen orthogonalen Trennmechanismus bietet.1
PFP-Phasen zielen speziell auf polare Retentionsmechanismen ab und können dadurch Analyten auf der
Grundlage geringfügiger Unterschiede in Struktur, Substitution und sterischem Zugang zu polaren Einheiten
trennen. Die resultierende Selektivität für Positionsisomere, halogenierte Substanzen und polare Analyten
ist bei der Analyse komplexer Gemische und niedermolekularer Pharmazeutika von besonderem Nutzen.
Vergleichende Analyse von NSAIDs
Diese Trennung wurde mit vier verschiedenen Poroshell 120-Säulentypen unter Verwendung von Acetonitril
durchgeführt. Jeder Durchlauf dauerte nur fünf Minuten. Nur Poroshell 120 PFP löste alle Verbindungen auf, obgleich
sowohl auf der Poroshell 120 EC-C18- als auch auf der Poroshell 120 Phenyl-Hexyl-Säule die Verbindungen in der
gleichen Reihenfolge eluierten. Die Elutionsreihenfolge war bei den PFP- und den Bonus-RP-Säulen sehr ähnlich,
ausgenommen die letzten beiden Peaks.
400
300
400
200
300
100
200
0
100
0
0
0
1,5
2
2,5
1
1,5
2
2,5
1
0
4
3
1
0,5
2
1
0,5
1
1,5
2
0
0,5
11
1,5
2
2
1
75
7
8
6
8
3
4
3 7
3 7
4
2,5
3
2,5
3
2
6
3
2
0
5
4
3
0,5
3
5,9
5,9
Poroshell 120 PFP
9
9
3,5
4
3,5
4
6
Poroshell 120 EC-C18
8
6
8
3,5
3,5
4
4
4,7 5,6
9
4,7 5,6
9
8
8
3
0
0,5
0
0,5
400
300
400
200
300
100
200
0
100
2
0
400
300
400
200
300
100
200
0
100
2
1
0
400
300
400
200
300
100
200
0
100
1
1
1
1,5
2
1
1,5
2
1
2,5
2
2,5
2
3
3
3
3,5
4
3
3,5
4
5,6
4 95,6
7
9
4
7
8
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
8
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
Säulen: Poroshell 120 PFP, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 699975-408)
Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 699975-902)
Poroshell 120 Bonus-RP, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 699968-901)
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 699975-912)
Poroshell 120 Bonus-RP
Flussrate: 2 ml/min
Probe:
1. APAP
2. Phenacetin
Gradient: Zeit
% Organisch 3. Piroxicam
4. Tolmetin
0
8
LC-System: 1260 Infinity Binary LC
5. Ketoprofen
6
100
6. Naproxen
Mobile Phase: A: 20 mM NH4HCO2, pH 3,0 7
100
7. Sulindac
B: Acetonitril
8
8
8. Diclofenac
9. Difunisal
1. „Fluorinated HPLC Phases: Looking Beyond C18 for Reverse-Phase HPLC“ M. Przybyciel, LCGC Europe 19(1) S. 19-28, 2006.
12
Detektion: UV, 254 nm
Selektivität – das wirksamste Mittel zur Optimierung von HPLC-Trennungen
Positionsisomere (15 Verbindungen)
Mobile Phase A: Wasser (0,1 % Essigsäure), B: Acetonitril
Probe:
1.3,4-Dimethoxyphenol
2.2,6-Dimethoxyphenol
3.3,5-Dimethoxyphenol
4.2,6-Difluorphenol
5.2,4-Difluorphenol
6.2,3-Difluorphenol
7.3,4-Difluorphenol
8.Abbauprodukt 2,6-Dimethoxyphenol
Zeit
%B
015
1330
1530
1615
9.3,5-Dimethylphenol
10.2,6-Dimethylphenol
11.2,6-Dichlorphenol
12.4-Chlor-3-methylphenol
13.4-Chlor-2-methylphenol
14.3,4-Dichlorphenol
15.3,5-Dichlorphenol
Flussrate: 2 ml/min
Detektion: 270 nm
Säulenabmessungen: 4,6 x 150 mm
mAU
300
1
7
2
250
3 4
200
1
150
1
2
2
4 3
100
1
50
3,4
5
5
7,8
6
7
6
7
3 4
6
13
10
12
11
11 10
9
8,9 10
5
2
8 9
6
8
12
11
9
12
14
Poroshell 120 PFP
15
13
14
Poroshell 120 EC-C18
15
13
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
15
14
13
10
11
12
14
15
Poroshell 120 EC-C8
0
2
4
6
8
10
12
14
16 Min.
Diese Trennung veranschaulicht die Vorteile des PFP-Phasentyps. Bei dieser Analyse von 15 Positionsisomeren mit vier verschiedenen
Säulentypen bietet PFP die beste Auflösung.
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
13
Analyse von Betablockern: ein Vergleich von Poroshell 120-Phasen
Diese komplexe Trennung veranschaulicht, wie unterschiedliche Selektivitäten unterschiedliche
Ergebnisse liefern. Insgesamt ergab die Bonus-RP-Phase die beste Peakform und Auflösung. Dies gilt
insbesondere für Nadolol, das bei Verwendung der C18- und der Phenyl-Hexyl-Phase als gesplitteter
Peak auftrat.
mAU
2
300
1
200
100
3
6
5
4
7
Poroshell 120 Bonus-RP
0
-100
0
2
4
6
8
10
12
Min.
mAU
2
300
200
1
100
5
3
0
-100
0
2
4
mAU
6
8
200
1
100
3
0
2
4
mAU
6
8
2
300
100
10
1
0
3
4
6
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
12
Min.
6
5
4
0
200
7
2
300
-100
4
Poroshell 120 EC-C18
7
10
12
6
5
Min.
Poroshell 120 SB-C18
7
-100
Säulen: Poroshell 120 Bonus-RP, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (Best-Nr. 695768-901)
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (Best-Nr. 695775-912)
Poroshell 120 EC-C18, 2,1 x 100 mm, 2.7 µm (Best-Nr. 695775-902)
Poroshell 120 SB-C18, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (Best-Nr. 685775-902)
LC-System: 1260 Infinity Binary LC
Mobile Phase: A: 10 mM NH4HCO2, pH 3,8
B: MeOH
14
Flussrate: 0,4 ml/min
Temperatur: 40 °C
Detektion: Gradient: Probe:
1. Atenolol
5. Acebutolol
2. Pindolol
6. Propranolol
260 nm
3. Nadolol
7. Alprenolol
10 % B bis 30 % B/12 min 4. Metoprolol
Die Poroshell 120-Säulen mit
4-µm-Partikeln bieten weiterhin die
Flexibilität zusätzlicher Phasentypen. Aus
den fünf verfügbaren Säulentypen kann eine
Phase ausgewählt werden, die wichtige
Analyt-Interaktionen nutzt, beispielsweise
pi-pi-Wechselwirkungen, wie bei der hier
gezeigten Steroidtrennung.
Isokratischer Test
Säule:Poroshell 120 18 oder PH,
4,6 x 150 mm, 4 µm
Mobile Phase:64 % MeCN oder MeOH
36 % Wasser mit 0,1 % Essigsäure
Probe:
1.Triamcinolon
2.Prednisolon
3.Corticosteron
4.Estradiol
Temperatur:
25 ºC
Detektion:
220, 4 nm
5.DES
6.Dienestrol
7.Deoxycorticosteron
6
1
2
2
4
6
8
Min.
6
1
2
2
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
3
mAU
150
125
100
75
50
25
0
1,2 ml/min
4,5,7
mAU
250
200
150
100
50
0
Flussrate:
3 4
4
7
5
6
8
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl 4 µm
Min.
Trennung von Steroiden auf der Poroshell 120 EC-C18 4-µm- und der Poroshell 120 Phenyl-Hexyl 4-µm-Säule. Die Chromatogramme zeigen,
dass auf der Poroshell 120 Phenyl-Hexyl-Säule aufgrund der pi-pi-Wechselwirkungen der Analyten mit der stationären Phase eine bessere
Auflösung erzielt wurde.
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
15
Schnelle LC/UHPLC-Leistung mit EINEM
GEWÖHNLICHEN HPLC-SYSTEM?
Agilent Poroshell 120 macht es möglich
Mit Poroshell 120-Säulen sind bis zu 90 % (oder mehr) der Effizienz einer schnellen
Sub-2-µm-LC/UHPLC-Säule erreichbar, jedoch bei HPLC-Drücken (unter 400 bar).
Dank der Option, sowohl mit der 4-µm- als auch mit der 2,7-µm-Säule schnelle
Trennungen bei niedrigen Drücken durchzuführen, lässt sich Ihre Produktivität
erheblich verbessern. Nun können Sie – mit den im Labor vorhandenen HPLCSystemen – mehr Proben in kürzerer Zeit analysieren, wie im folgenden Beispiel
dargestellt. Außerdem können Sie Ihre Methode nahtlos auf ein Gerät der Agilent
1200 Infinity Serie Ihrer Wahl übertragen und dadurch die Produktivität noch
weiter steigern.
0,58 ml/min
Injektionsvolumen:4 µl
Temperatur: 26 ºC
2,223
0,826
2,816
1,518
2,016
2,5
5
9,753
Flussrate:
6,273
60 % Acetonitril,
40 % Wasser
← N = 25 053, Druck = 182 bar
4,132
Mobile Phase: 1,148
Bei dieser Probe neutraler Alkylphenone lieferte
die Poroshell 120-Säule > 90 % der Effizienz
einer 1,8-µm-Säule. Beachten Sie auch, dass
der Druck an der Poroshell 120-Säule etwa
50 % des Drucks an der 1,8-µm-Säule beträgt.
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-302)
0,646
UHPLC-Effizienz bei niedrigeren
Drücken
7,5
10
> 90 % der Effizienz von 1,8 µm
Detektion:DAD Sig = 254,4 nm
Ref = 360,100 nm
← N = 27 295, Druck = 386 bar
2,5
5
16
7,5
13,041
8,21 8
5,281
3,494
2,418
1,756
2,705
1,275
0,865
Eclipse Plus C18, 3,0 x 100 mm, 1,8 µm
(Best-Nr. 959964-302)
0,649
Probenvorbereitung:RRLC-Checkout-Probe
(Best-Nr. 5188-6529) versetzt
mit 50 μl 2 mg/ml Thioharnstoff
in Wasser/Acetonitril (65:35)
10
12,5
Min.
Agilent Poroshell 120 für HPLC
mit hoher Effizienz
In dieser Analyse von SoftdrinkKomponenten erbrachte die
Poroshell 120-Säule:
► > 90 % der Effizienz
einer Sub-2-µm-Säule
► die doppelte Effizienz einer 3,5-µm-Säule
► einen Druck unter 400 bar, während
der Druck bei den Sub-2-µm-Säulen
darüber lag
Der niedrige Rückdruck, der mit Methanol
als mobiler Phase erzielt wurde, ist
besonders signifikant, da Methanol einen
höheren Druck erzeugt als Acetonitril.
Säule:
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
Mobile Phase:A: 65 %, 0,2 % Ameisensäure
B: 35 % Methanol isokratisch
Flussrate:
0,5 ml/min
Injektionsvolumen: 1 µl
Temperatur: 26 °C
Detektion: UV, 220 nm
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-302)
mAU
300
N = 23 283
200
100
mAU
0
300
200
1
2
p = 314 bar
3
4
5
6
Min.
4
5
6
Min.
6
Min.
100
mAU
300
mAU
0
ZORBAX
RRHT Eclipse Plus C18, 3,0 x 100 mm, 1,8 µm
300
200
1
2
3
(Best-Nr.
959964-302)
200
100
100
0
mAU
0
300
200
N = 25 364
3
p = 456 bar
1
2
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
7
Min.
6
7
Min.
5
5
6
6
7
7
Min.
6
100
mAU
mAU
300
0
250
200
200
100
150
100
500
mAU
0
250
200
150
Page100
7
mAU
50
0
250
ZORBAX Rapid Resolution
Eclipse
Plus C18, 3,0
x 100 mm, 3,5
µm
1
2
3
4
1
2
3
4
(Best-Nr. 959961-302)
200
150
Page100
7
50
0
Page 7
N = 11 896
Min.
P = 153 bar
1
2
3
4
5
6
7
Min.
1
2
3
4
5
6
7
Min.
Probe:
1. Saccharin
2. Koffein
3. p-Hydroxybenzoesäure
4. Aspartam
5. Dehydroessigsäure
6. Benzoesäure
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
17
Warum eine Vorsäule
verwenden?
Ohne Vorsäule:
Säulenversagen nach nur 80 Injektionen.
Kurz gesagt: Mit Vorsäulen können Sie
Geld sparen, da sich die Lebensdauer Ihrer
Analysesäulen verlängert.
Das vorliegende Beispiel zeigt einen
beschleunigten Lebensdauertest
mit 300:1 Wasser/Similac mit 0,1 mg
Sulfachloropyridazin und Sulfamethoxazol.
Flussrate: 0,65 ml/min
Injektionsvolumen: 10 µl
Temperatur: 23 °C
Detektion: Sig. = 254, 4 nm, Ref. = Off
LC-System: 1200 Infinity Serie
Peakbreite (min)
Austausch der Analysesäule
erforderlich
0,01
0,04
Peakbreite (min)
20
40
60
80
100
120
140
100
120
140
Injektion Nr.
0,02
0,01
0,04
0,030
0,02
0
20
Mit Vorsäule:
40
60
80
Injektion Nr.
Die Vorsäule fällt nach 80 Injektionen aus, die Analysesäule
wurde geschützt.
Nur Austausch der
preisgünstigeren
Vorsäule
0,01
0,04
A: 0,1 % Ameisensäure in Wasser
Gradient: 10 % B für 2 min gehalten,
Anstieg auf 45 % B in 2 min
0,02
0
0,03 0
0
Peakbreite (min)
Mobile Phase: B: Acetonitril
0,03
Peakbreite (min)
Indem Sie eine kostengünstigere Vorsäule
einsetzen, werden Beschädigungen durch
Partikel und stark adsorbierte Stoffe
vermieden. Dies gilt insbesondere für die
Analyse verunreinigter Proben. Faustregel:
Sie sollten Ihre Vorsäule austauschen, wenn
sich die Trennstufenzahl, der Druck oder die
Auflösung um mehr als 10 % ändert. Sie
müssen jedoch für die jeweilige Applikation
eine genaue Bestimmung vornehmen.
0,04
0,03
0
20
40
60
80
100
120
140
120
140
Injektion Nr.
0,02
Sulfachlorpyridazin
Sulfamethoxazol
0,01
0
0
20
40
60
80
100
Injektion Nr.
Probenvorbereitung: 100 ml Wasser + 0,333 ml
Similac + 1 ml 0,1 mg/ml
Sulfachlorpyridazin und Sulfamethoxazol
Sulfachlorpyridazin
Schnelle LC-Applikationen behalten ihre Geschwindigkeit mit
Agilent Fast Guard-Säulen bei
Agilent Fast Guard-Säulen für UHPLC sind auch bei hohen Drücken stabil und
zuverlässig, und sie sind vollständig kompatibel mit Agilent Fast LC- und UHPLCSäulen. Sie lassen sich zudem ohne spezielle Werkzeuge installieren.
Sehen Sie sich unser Video an und erfahren Sie, wie einfach
Agilent Fast Guard-Säulen installiert werden können:
agilent.com/chem/poroshell120
18
Sulfamethoxazol
Eine zuverlässige Wahl für hochauflösende LC/MS
und LC/MS/MS
Mit Poroshell 120-Säulen von Agilent erhöhen Sie die Produktivität Ihrer LC/MS- und
LC/MS/MS-Systeme. Die poröse Außenschicht und der feste Kern der Partikel der
Phase beschränken den Diffusionsabstand und beschleunigen die Trennung, während
die enge Partikelgrößenverteilung die Effizienz steigert und die Auflösung optimiert.
Weitere Vorteile sind:
•Schnelle und effiziente Auflösung Ihrer entscheidenden isobaren Verbindungen
• Bessere Auflösung von nahe zusammen eluierenden Peaks
• Mehr Substanzen in einer einzelnen Analyse auflösbar
• Optimierte LC/MS-Genauigkeit und -Identifizierung
• Standard-2-µm-Fritte, die sich bei verunreinigten Proben nicht verstopft
Trennung von Cholesterin
und anderen Sterinen unter
Verwendung von Poroshell 120
EC-C18-Säulen mit LC/MS/MS
Probe:
1.Calcifediol
2.Desmosterol
3.5-Cholesten-3-on
4.Lathosterol
5.Cholesterin
6.Campesterol
7.Stigmasterol
8.Cholestanol
9.Sitosterol
Beachten Sie, dass selbst bei einem
Cholesterin/Lathosterin-Verhältnis von
2000:1 eine ausreichende Auflösung
erreicht wurde. Dies ist für die effektive
Quantifizierung entscheidend, da die beiden
Substanzen dasselbe Molekulargewicht
haben.
Säule:
Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-302)
Mobile Phase:
80 % Acetonitril,
20 % Methanol
Flussrate:
0,6 ml/min
Injektionsvolumen:2 µl
Temperatur:
20 °C
Detektion:
APCI, positive ion
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
19
1D-Trennung von Vitamin D2/D3
auf Agilent Poroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 ermöglicht eine sehr schnelle
LC/MS/MS-Analyse von Vitamin D2/D3 in
Plasma. Die isokratischen Bedingungen
wurden variiert, um die Geschwindigkeit
der Trennung mit der chromatographischen
Auflösung zu vergleichen.
Säule:
Poroshell 120 EC-C18,
2,1 x 50 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 699775-902)
Mobile Phase: A: H2O + 0,1 % Ameisensäure
B: MeOH + 0,1 % Ameisensäure
Flussrate: 0,5 ml/min
Injektionsvolumen: 10 μl
Temperatur: 50 °C
Temperatur des
automatischen
Probengebers: 5 °C
Nadelspülung: Spülanschluss (50:25:25, IPA: MeOH:H2O) 5
Isokratische Analyse: A: 20 % B: 80 %
Analysendauer:
5 Min
x 104
1,9
1,8
1,7
1,6
1,5
1,4
1,3
1,2
1,1
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
85 % MeOH
3 Min
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3
Counts vs. Erfassungszeit (Min.)
x 103
7,5
7
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
* 2,007
1
25-OH Vitamin D3
80 % MeOH
5 Min
25-OH Vitamin D2
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3
Counts vs. Erfassungszeit (Min.)
Stabile Leistung – auch nach
3.000 Injektionen
Dieser Test zeigt die außergewöhnliche
Langlebigkeit der Poroshell 120-Säulen.
Die Leistung nimmt selbst nach 3000
Injektionen nur geringfügig ab. Die Stabilität
wird in der Konsistenz der Retentionszeiten
ausgedrückt (% RSD).
Analyt
% RSD
(RT)
Analyt
% RSD
(RT)
Analyt
% RSD
(RT)
Morphin
0,7
Meperidin
0,4
Triazolam
0
Codein
0,4
Zolpidem
0,3
Naltrexon
0,1
Hydrocodon
0,4
Fentanyl
0,1
Chlordiazepoxid
0,1
MDMA
0,3
EDDP
0,1
Desmethyldiazepam
0,1
Norfentanyl
0,2
Nitrazepam
0,1
Cocaethylen
0,2
Heroin
0,2
Propoxyphen
0,1
11-nor-9-Carboxy-delta-9-THC
0
Methylphenidat
0,2
Buprenorphin
0,3
20
Mit Agilent Poroshell 120-Säulen können Sie die
Flexibilität Ihrer UHPLC-Methoden steigern
Da der Grenzwert für den Druck bei Poroshell 120-Säulen 600 bar beträgt,
können Sie diese auch bei Ihren UHPLC-Methoden erfolgreich anwenden,
sogar bei Methoden mit sehr langen Säulen, hohen Flussraten und viskosen
Lösemitteln.
Agilent Poroshell 120 EC-C18 für
schnelle UHPL-Trennungen
Dieses Beispiel zeigt eine schnelle Trennung
unter Verwendung einer mobilen Phase,
die höhere Drücke erzeugt. Im oberen
Chromatogramm wurde eine Säule mit
3,0 mm Innendurchmesser bei einer
Flussrate von 0,5 ml/min und einem Druck
unter 400 bar eingesetzt, also eine typische
Auftrennung durch LC durchgeführt.
Obwohl diese Trennung schnell war (knapp
6 Minuten), zeigt sich im mittleren und
unteren Chromatogramm, dass sich die
Laufzeiten durch Steigerung der Flussrate
auf unter 3 Minuten senken lassen. Bei
diesen schnelleren Analysen erhöht sich der
Druck auf 400 bis 560 bar. Prüfen Sie die
flexiblen Upgrade-Optionen für die Agilent
1200 Infinity Serie, um die Vorteile der
UHPLC-Möglichkeiten zu nutzen.
Flussrate = 0,5 ml/min,
P = 300 bar, NBA = 24 597
300
P = 300 bar, NBA
200
100
0
2
4
6
Flussrate = 0,75 ml/min,
P = 433 bar
300
200
P = 433 bar
100
0
2
4
Flussrate = 1,0 ml/min,
P = 559 bar
200
100
P = 559 bar
0
2
4 Min.
Viskosere Lösemittel wie Methanol können bei HPLC- oder UHPLC-Drücken eingesetzt werden.
More viscous solvents like methanol can be used
Probe:
Poroshell 120 pressures.
EC-C18
atSäule:
HPLC or UHPLC
1. Saccharin
Page 14
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-302)
Mobile Phase:A: 65 %, 0,2 % Ameisensäure
B: 5 % Methanol isokratisch
Flussrate:
siehe Chromatogramme
2.
3.
4.
5.
6.
Koffein
p-Hydroxybenzoesäure
Aspartam
Dehydroessigsäure
Benzoesäure
Injektionsvolumen:1 µl
Temperatur:
26 ºC
Detektion:
Sig. = 220, 4 nm, Ref. = Off
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
21
Vergleich von HPLC- und
UHPLC-Trennungen nach der
EPA-Methode 8330 auf kurzen
und langen Agilent Poroshell
120 Säulen
50 mm Länge
P = 235 bar
SN USCFZ01017, Chargen-Nr. B10016
mAU
25
20
15
10
5
0
-5
Mit Poroshell 120-Säulen sind Sie
flexibel: Für eine höhere Auflösung
können Sie längere Säulen wählen.
Diese Chromatogramme zeigen, dass mit
steigender Säulenlänge Auflösung und
Druck steigen (bis hin zu UHPLC-Drücken
für die längste Säule).
2
4
Peak-Nr.
Verbindung
Trennstufen
k’
2
Acetophenon
114 120
0,29
3
Benzol
109 931
0,46
4
Toluol
114 800
0,65
10
12
14
16
18
Min.
100 mm Länge
P = 358 bar
SN USCFX01069, Chargen-Nr. B10034
25
20
15
10
5
0
-5
-10
2
4
6
8
10
12
14
16
18
Min.
150 mm Länge
P = 568 bar
SN USCFW01049, Chargen-Nr. B10022
mAU
40
30
10
.
20
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
Min.
Die Abstimmung von Säulenlänge, Auflösung und Analysendauer ist bei jeder Trennung wichtig.
Säule: Mobile Phase: Flussrate: Temperatur: Da einer der Vorteile von Poroshell
120-Säulen im geringen Rückdruck besteht,
können mehrere Säulen in Reihe geschaltet
werden. Das ergibt eine besonders hohe
Trennleistung pro Zeiteinheit und ermöglicht
eine bessere Trennung von komplexeren
Proben.
8
mAU
Beachten Sie, dass die Auflösung durch die
Säulenlänge, jedoch nicht durch die Charge
des Säulenmaterials beeinflusst wird:
der Beweis, dass Poroshell 120-Säulen
reproduzierbare Leistung erbringen.
Agilent Poroshell 120-Säulen in
Reihe liefern die beste Effizienz
bei HPLC- und UHPLC-Drücken
6
mAU
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
0
mAU
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
mAU
0
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
0
Poroshell 120 EC-C18, 2,7 µm
25 % Methanol, 75 % Wasser
1 ml/min
44 ºC
3 Poroshell 120 Columns in Series – 4.6 x 150 mm, 2.7µm
Poroshell
120 Columns
in mm,
Series
4.6 x 150
mm, 2.7µm
Drei 3
Poroshell
120 EC-C18-Säulen,
4,6 x 150
2,7 µm–(Best-Nr.
693975-902)
in Reihe für
besonders hohe Effizienz.
3 Poroshell 120 Columns in Series – 4.6 x 150 mm, 2.7µm
0
Flussrate:
1 ml/min
N ~ 83 000 (Peak 4)
Maximaldruck: 316 bar
1
2
3
4
5
6
Min.
0
1
2
3
4
5
6
Min.
0
1
2
3
4
5
6
Min.
Flussrate:
1,5 ml/min
N ~ 103 000 (Peak 4)
Maximaldruck: 478 bar
0
1
2
3
4
5
6
Min.
0
1
2
3
4
5
6
Min.
3
4
5
6
Min.
0
Flussrate:
1,8 ml/min
1
2 (Peak 4)
N ~ 115 000
Maximaldruck: 573 bar
Maximale Effizienz bei
1,8 ml/min
0
1
2
3
4
5
6
Min.
0
1
2
3
4
5
6
Min.
0
1
2
3
4
5
6
Min.
22
Schnelle Analyse von 11 in
Analgetika verwendeten
Substanzen auf einer Agilent
Poroshell 120 EC-C18-Säule
In diesem Beispiel wurde eine hohe
Flussrate verwendet, um die Trennung
von 11 häufig in Analgetika eingesetzten
Substanzen an einer Poroshell 120-Säule zu
beschleunigen.
4
600
500
Druckmaximum 540 bar
400
1
300
5
200
2,3
7
6
100
10
9
11
8
0
0
1
2
3
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-902)
Mobile Phase:A: Wasser + 0,1 %
Ameisensäure B: Acetonitril
Flussrate:
3,5 ml/min
Injektionsvolumen:5 µl
Temperatur:
40 °C
Detektion:
DAD 254 nm
4
5
6
7
Probe:
1. Acetaminophen
2. Koffein
3. 2-Acetamidophenol
4. Acetamid
5. Phenacetin
6. Sulindac
7. Piroxicam
8. Tolmetin
9. Ketoprofen
10. Diflusinal
11. Diflunisal
Mit den A-Line Verbrauchsmaterialien
von Agilent erhalten Sie die volle
Leistungsfähigkeit Ihres LC-Systems
Mehr Möglichkeiten für noch mehr Leistung durch:
• Praktisch
• Einfach
• Effizienter
Mehr Infos:
agilent.com/chem/A-Line
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
23
Komplexe Methodentransfers einfach gemacht
Viele Methoden, die auf längeren 5-µm-C18-Säulen entwickelt wurden,
lassen sich schnell und einfach auf kürzere Poroshell 120-Säulen übertragen,
insbesondere bei den neuen Poroshell-120 4-µm-Säulen. Neue Änderungen
der USP-Vorschriften erleichtern die Übertragung konventioneller Methoden
auf neuere Technologien wie Agilent Poroshell 120. Dadurch können
Chromatographieanwender den Durchsatz drastisch erhöhen und ihre Kosten
senken.
Auf den folgenden Seiten sehen Sie, wie sich fünf Trennungen, darunter auch
USP-Methoden, auf Poroshell 120-Säulen wiederholen lassen, und das dreibis fünfmal schneller als dieselben Trennungen auf 5-µm-Säulen.
20.687
29.290
23.076
20.687
29.290
16.151
16.435
15.248
15.248
12.674
11.116
16.151
16.435
11.596
12.674
11.596
11.116
9.712
110 bar
20
Flussrate: 1 ml/min
%B
8
33
33
23.076
40
0
110 bar
9.712
60
20
Zeit
0
33
35
Säule:ZORBAX Eclipse Plus C18,
4,6 x 250 mm, 5 µm
(Best-Nr. 959990-902)
5
10
15
20
25
30 Min.
5
10
15
20
25
30 Min.
0
Zeit
%B
0 8
12 33
13,233
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-902)
0
5.450
4.558
5.920
4.437
1000
50
7.037
2.311
2.606
2.311
5.450
4.558
5.920
4.437
150
50
325 bar
3.867
200
100
2.606
250
150
325 bar
2.189
250
200
mAU
7.037
Flussrate: 1 ml/min
mAU
3.867
Beide Trennungen wurden auf einem
älteren Agilent Gerät der Serie 1100
durchgeführt, was beweist, dass sogar
Gradientenmethoden übertragen werden
können, ohne dass der Druck 400 bar
übersteigt.
80
40
1.719
Wie Sie sehen, sind die beiden Trennungen
praktisch gleich. Das untere Chromatogramm
wurde jedoch, statt in 30 Minuten wie
das obere Chromatogramm, in etwas über
7 Minuten erstellt – eine hervorragende
Steigerung der Produktivität.
80
mAU
100
60
2.189
In diesem Beispiel wurde eine komplexe
Methode von einer 250 mm langen ZORBAX
Eclipse Plus C18-Säule mit 5 µm auf eine
100 mm lange Poroshell 120 EC-C18-Säule
übertragen. Alle Bedingungen bis auf die
Gradientendauer wurden gleich gehalten.
Diese wurde an die kürzere Säule angepasst.
mAU
100
1.719
Methodentransfer zwischen
Agilent Poroshell 120 und ZORBAX
ermöglicht Zeiteinsparungen und
Skalierbarkeit
5
Probe:
1.Sulfadiazin
2.Sulfathiazol
3.Sulfapyridin
4.Sulfamerazin
5.Sulfamethazin
6.Sulfamethazol
7.Sulfamethoxypyridazin
5
8.Sulfachloropyridazin
9.Sulfamethoxazol
10.Sulfadimethoxin
24
Min.
Mobile Phase:
A: 0,1 % Ameisensäure
in Wasser
Min.
B: 0 ,1 % Ameisensäure in Acetonitril
Erweiterung der Agilent Poroshell 120 Plattform um 4-μm-Säulen
Mit dieser Ergänzung erhalten Chromatographieanwender und
Methodenentwickler eine skalierbare Lösung für die Poroshell
120-Plattform. Diese robuste Plattformerweiterung, die zunächst
aus den Säulentypen EC-C18, EC-C8, Phenyl-Hexyl, PFP und HILIC
besteht, ermöglicht Anwendern einen einfachen Methodenersatz
und damit einen problemlosen Einstieg in die Poroshell 120-Familie.
USP-Methode für NaproxenTabletten: 4,5-mal schnellere
Analyse auf Agilent Poroshell 120
bei HPLC-Drücken
Diese Naproxen-Trennung zeigt, wie einfach
es sein kann, eine Methode auf Poroshell
120-Säulen zu übertragen, ohne die
Flussrate oder mobile Phase zu ändern.
Das erste Chromatogramm zeigt eine USPAnalyse auf einer Agilent ZORBAX Eclipse Plus
C18-Säule, die scharfe Peaks, das Dreifache
der benötigten Effizienz und eine Auflösung
von ~ 14 liefert.
Beim zweiten und dritten Chromatogramm
ergab die Poroshell 120 EC-C18 4-µm-Säule
(150 mm und 100 mm) als einfacher Ersatz 1
höhere Effizienz und Auflösung als die
Originalmethode. Da der Druck bei der 150mm- und der 100-mm-Säule nur 165 bzw. 98
bar beträgt, ist diese isokratische Methode
eine hervorragende Option für die HPLC.
Das vierte Chromatogramm zeigt, dass die
Poroshell 120 EC-C18 2,7-µm-Säule (100 mm)
größere Effizienz und Auflösung ermöglicht –
bei doppelt so hoher Geschwindigkeit wie die
Originalmethode. Die Poroshell 120 EC-C18Säule (50 mm) im fünften Chromatogramm
erfüllt immer noch die Anforderungen an
Effizienz und Auflösung, ist jedoch 4,5-mal
so schnell wie die 5-μm-Säule.
Die Säulendrücke sind um 50 % geringer als bei der Poroshell 120
2,7-µm-Säule und die Effizienz ist fast doppelt so hoch wie bei
herkömmlichen porösen 5-µm-Säulen. Chromatographieanwender,
die eine moderate Leistungssteigerung wünschen, können die
Poroshell 120 4-µm-Säule ohne Probleme in ihre Methode
integrieren.
Anforderung an Methoden zur Eignung für das System: N > 4000, Rs > 11,5
mAU
60
50
40
30
20
10
0
N = 10 639
95 bar
0
1
2
3
4
6
5
7
N = 19 054
165 bar
0
1
2
3
4
6
5
N = 13 186
98 bar
0
1
2
3
4
2-mal so schnell
N = 21 046
mAU
30
25
N = 20 676
20
6
5
15
10
5
8
2
3
4
5
7
8
Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm (L1), 2,7 µm
(Best-Nr. 695975-902)
13,67 µl Injektion
Rs = 17,0
P = 238 bar
3
4
5
4,5-mal so schnell
mAU
30
N = 11 281
25
N = 12 051
20
15
10
5
0
1
2
6
7
6
7
Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 50 mm (L1), 2,7 µm
(Best-Nr. 699975-902)
6,7 µl Injektion
Rs = 12,6
P = 133 bar
Min.
Poroshell 120 ist eine ausgezeichnete Wahl für schnellere Methoden bei HPLC-Drücken.
Mobile Phase:
Flussrate:
50:49:1 MeCN:H2O:Essigsäure
1,2 ml/min
Eine Videodemonstration des Transfers einer Naproxen-Methode auf Poroshell
120-Säulen bei gleichzeitiger Optimierung des LC-Systems finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120video
25
Probe:
1. Naproxen
2. Butyrophenon
9
Min.
Agilent Poroshell 120,
4,6 x 100 mm [L1], 4 µm
(Best-Nr. 695970-902)
L/dp = 25 000
0
1
Min.
Agilent Poroshell 120,
4,6 x 150 mm [L1], 4 µm
(Best-Nr. 693970-902)
L/dp = 37 500
7
2-mal so schnell, gleicher Rückdruck
mAU
60
50
40
30
20
10
0
9
8
2-mal so effizient
mAU
60
50
40
30
20
10
0
ZORBAX Eclipse Plus C18,
4,6 x 150 mm,
nach USP vorgeschriebene
5-µm-Säule
(Best-Nr. 959993-902)
L/dp = 30 000
9
Min.
Schnelle Analyse bei
niedrigem Druck
Hier wurde eine Methode zur Analyse
von 11 nicht nutritiven Lebensmittel- und
Getränkezusatzstoffen von einer 5 μm
ZORBAX Eclipse Plus C18-Säule auf eine
Poroshell 120 EC-C18-Säule übertragen.
Dabei wurde die Analysendauer von
über 13 Minuten auf unter 3 Minuten
reduziert. Der Lösemittelverbrauch wurde
um mehr als 80 % gesenkt und die
Auflösung des kritischen Paares wurde
von 1,8 auf 3,0 verbessert.
ZORBAX Eclipse Plus, 5 µm, Pmax = 120 bar
mAU
200
mAU
Mobile Phase: Flussrate: Temperatur: A: 20 mM Ammoniumacetat, pH 4,80
B: Acetonitril
1 ml/min
30 °C
Gradient: 14 % B bei t0, Anstieg auf 52 % B in 12,0 min
Kritisches Paar
150
200
Kritisches Paar
100
150
50
Rs 1,79
100
0
50
2
4
6
8
10
12
Min.
0
mAU
140
2
Poroshell
120 EC-C18,
2,7 µm4
6
8
10
12
Min.
120
Mobile Phase: Flussrate: • Analysezeit verkürzt von 13,1 auf 2,6 min
Temperatur: 100
80
mAU
60
40
40
20
• Nachlaufzeit verkürzt von 7 auf 1,8 min
• Lösemittel- und Mobilphasenverbrauch verringert um mehr als 80 %
Gradient: 14 % B bei t0, Anstieg auf 52 % B in 2,1 min
• Auflösung des kritischen Paars verbessert von 1,79 auf 3,01
mit Poroshell 120
0
20
2
4
6
Kritisches Paar
0
Hier wurde eine zehnminütige USPMethode für Simvastatin-Tabletten
problemlos auf eine Poroshell 120-Säule
übertragen – mit einem fünfmal so
schnellen Ergebnis. Beachten Sie, dass die
Säulenlänge um 70 % reduziert wurde.
Eine 250 mm lange Säule wurde durch
eine 75 mm Poroshell 120 EC-C18-Säule
ersetzt, wobei dies immer noch als
Methodenanpassung anzusehen ist.
Die Poroshell 120 EC-C18-Phase ist
anderen USP L1-Phasen ähnlich, weshalb
auch die Ergebnisse ähnlich sind. Die
Poroshell-Säulen ermöglichen jedoch
die wesentlich schnelleren Trennungen.
8
10
12
Min.
Rs 3,01
1
Schnellere Analyse von
Simvastatin mit Poroshell 120
A: 20 mM Ammoniumacetat, pH 4,80
B: Acetonitril
0,851 ml/min
30 °C
2
Min.
ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 x 250 mm, 5 µm – (Best-Nr. 959990-902)
6
Mobile Phase:65 % CH3CN,
35 % 3,9 g/l NaH2PO4, pH 4,5
40
40
35
35
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
5
0
0
9,907
9,907
Flussrate:1,5 ml/min für 5-µm-Säule
2,8 ml/min für 2,7 µm Poroshell 120-Säule
Temperatur:
45 ºC
Detektion:
DAD Sig. = 238, 8
Ref. = 360, 100 nm
2
2
4
4
6
6
8
8
10
10
Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 75 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 697975-902)
40
40
35
35
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
5
0
0
1,457
1,457
USPAnforderung
2
2
26
5 µm
(1,5 ml/min)
2,7 µm
(2,8 ml/min)
TR
–
9,907
1,457
k’
> 3,0
5,962
5,122
N
> 4 500
16.939
14 439
Tf
< 2,0
1,09
1,10
Trennung von Morphin und
Metaboliten mit einer Poroshell
120 HILIC-Säule
Immer mehr Labore setzen HILIC im
Rahmen der Wirkstoffforschung und
Arzneimittelentwicklung frühzeitig ein, und
zwar aus folgenden Gründen:
• Um MS-Kompatibilität zu erzielen
• Um die Retention polarer Substanzen und
ihrer stärker polaren Abbauprodukte zu
verbessern
Poroshell 120 HILIC, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 695775-901)
2
x 10
1
0,9
0,8
1
2
0,7
0,6
0,5
1
0,4
0,3
0,2
4
0,1
0
3
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
• Um die LC/MS-Empfindlichkeit zu erhöhen
Probe
1.Normorphin
2.Morphin
3.M6G
4.M3G
Die Trennung von Morphin und Metaboliten ist
ein Beispiel für eine schnelle, effiziente HILICLC/MS-Methode. Hier sehen Sie, dass diese
polaren Substanzen auf der Poroshell 120 HILICSäule mit exzellenter Peakform und Effizienz in
weniger als 2 Minuten vollständig aufgelöst
wurden. Bei einer Umkehrphasen-Methode
unter hoch wässrigen Bedingungen dagegen
wäre die Retention der Analyten unzureichend.
Analyse von Vitamin B und
verwandten Substanzen
mit einer 2,1 x 100 mm
2,7-µm-Poroshell 120-HILICSäule
Mit HILIC werden keine IonenpaarReagenzien benötigt, wie z. B.
Hexansulfonsäure, die üblicherweise
in mobilen Phasen zur Trennung von
B-Vitaminen verwendet wird. Darüber
hinaus werden die LC/MS-Kompatibilität
und die Retention verbessert.
1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9
Counts (%) vs. Erfassungszeit (Min.)
Mobile Phase: Flussrate: Temperatur: Druck: A: 100 mM NH4HCO2, pH 3,2
B: Acetonitril: 100 mM NH4HCO2, pH 3,2 (9:1)
0,8 ml/min
25 °C
270 bis 505 bar
LC-System: 1290 Infinity LC und
6410 Triple Quadrupol LC/MS
Zeit
%B
0 100
0,44100
1,9355
Poroshell 120 HILIC, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 695775-901)
2
x 10
1
0,95
1
2
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
4
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
1
3
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 0,75 0,8 0,85 0,9 0,95 1 1,05 1,1 1,15 1,2 1,25 1,3 1,35 1,4 1,45 1,5 1,55 1,6 1,65 1,7 1,75 1,8 1,85 1,9
Counts (%) vs. Erfassungszeit (Min.)
Probe
1.4-Aminobenzoesäure
2.Nicotinamid
3.Riboflavin
4.Nicotinsäure
Mobile Phase: Flussrate: Temperatur: Druck: Acetonitril: 100 mM NH4HCO2, pH 3,2 (9:1)
0,7 ml/min
25 °C
240 bar
LC-System: 1290 Infinity LC und
6410 Triple Quadrupol LC/MS
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
27
Agilent Poroshell 120-Säulen:
Überzeugend im Alltag
Eine 2-μm-Säuleneinlassfritte überzeugt auch bei stark verunreinigten
Proben
Sub-2-μm-Partikel bieten erhebliche Vorteile bei Geschwindigkeit und Auflösung, verstopfen
jedoch leicht bei verunreinigten Proben, da am Säuleneinlass eine 0,5-µm-Fritte verwendet
werden muss. Bei Poroshell 120-Säulen wurde dieses Problem mit einer 2-μm-Standardfritte
gelöst, die bei verunreinigten Proben nicht verstopft, auch nicht bei unfiltriertem Plasma.
Die Beladbarkeit der Poroshell 120-Säulen mit basischen
Probensubstanzen ist vergleichbar mit der von Sub-2-µm-Säulen
Kleine, nichtporöse Partikel verfügen über eine geringe Oberfläche zur Wechselwirkung mit
der Probe und weisen nur eine begrenzte Beladungskapazität auf. Poroshell 120-Säulen
hingegen sind mit ihrer größeren Oberfläche auf größere Kapazität ausgelegt. Tatsächlich lässt
sich die Beladungskapazität von Poroshell 120-Säulen mit der von 1,8-μm-Säulen vergleichen,
auch für die schwierigsten basischen Substanzen.
Die Peakform, die Sie für genaueste Ergebnisse brauchen
Poroshell 120-Säulen liefern, vor allem im pH-Bereich von 6 bis 7, im Vergleich zu anderen
Säulen mit oberflächenporösen Partikeln eine außergewöhnlich gute Peakform.
Geräte der Serien Agilent 1100 und 1200 Infinity lassen sich problemlos
für Poroshell 120-Säulen optimieren
Aufgrund ihrer Eigenschaften eignen sich Poroshell 120-Säulen ideal für die meisten HPLCund UHPLC-Instrumente, einschließlich der neuen Agilent 1290 Infinity II Geräte. Alles,
was Sie für LC-Systeme der Serien 1100 und 1200 Infinity benötigen, sind geringfügige
Änderungen in der Konfiguration (z. B. Flussrate, Länge und Innendurchmesser der
Anschlussleitungen, Volumen der Durchflusszellen und Peakbreiteneinstellung des Detektors).
Dann ist der Weg frei für bessere Ergebnisse mit niedrigeren Drücken und höherer Effizienz.
28
Diflusinal in Plasma
200 000
400
380
180 000
360
340
160 000
320
300
140 000
280
260
120 000
240
220
100 000
200
180
160
140
Lösemittel A: Wasser mit 0,1 % TFA
Lösemittel B: MeCN mit 0,08 % TFA
Flussrate: 1 ml/min 1 μl Injektion
120
100
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 50 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 699975-302)
80
60
40
20
Injektionsvolumen:1-µl-Injektionen
0
1
1001
501
Probe: Gefälltes Plasma:
2 Teile Plasma, 7 Teile
20:80 Wasser:MeCN mit 0,1 %
Ameisensäure mit 1 Teil Diflunisal
in 50:50 Wasser:MeCN 10 µg/ml
(Endkonzentration Diflunisal
1 µg/ml) geschüttelt und 10 Minuten
zum Absetzen stehen gelassen
Nicht zentrifugiert und nicht filtriert
LC-System:
Zeit
0
0,5
0,6
1,1
2,5
1501
Enddruck
Trennstufen
80 000
%B
20
90
90
20
20
2001
Effizienz (N)
Poroshell 120-Säulen reduzieren die
Verstopfungsgefahr deutlich, sogar bei stark
„verunreinigten“ Proben wie ungefiltertem
Plasma. In diesem Fall wurden die Proteine
ausgefällt, die Probe wurde jedoch weder
zentrifugiert noch gefiltert. Sogar unter diesen
Bedingungen gab es keine Drucksteigerung,
auch nicht nach 2500 Injektionen.
Diflusinal in Plasma
Druck
Agilent Poroshell 120 mit 2-μmFritte verstopft nicht
60 000
40 000
20 000
2501
0
Injektionen
1200 Infinity RRLC (SL)
Beladung mit Basen - Nortriptylin
Probenbeladung wie mit
vollständig porösen Partikeln
Die Beladungen dieser Säulen liegen
im typischen Bereich, was belegt, dass
Poroshell 120-Säulen ohne Weiteres für
Trennungen basischer Analyten eingesetzt
werden können.
Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(USCFX01084)
(Best-Nr. 695975-302)
0,6
ZORBAX Eclipse Plus C18,
3,0 x 100 mm, 1,8 µm
(USUYB01454)
(Best-Nr. 959964-902)
0,5
0,4
Peakbreite
In diesem Beispiel wurde Nortriptylin (eine
basische Substanz) auf mehrere Säulen
von Agilent geladen. Beachten Sie, dass
die Poroshell 120 2,7-μm-Säule über
dieselbe Beladungskapazität verfügt wie die
1,8-µm-Säule und dass die 3,5-µm-Säule
eine größere Anfangspeakbreite aufweist,
was die Auflösung beeinträchtigen kann.
0,7
ZORBAX Eclipse Plus C18,
3,0 x 100 mm, 3,5 µm
(USUXV01418)
(Best-Nr. 959961-902)
0,3
0,2
0,1
0
0,0002
0,002
0,02
Nortriptylin-Konzentration (mg/ml)
0,2
80 % 25 mM Na2HPO4-Puffer, pH 3,0,
20 % Acetonitril
Temperatur: 30 ºC
Detektion: 205 nm
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
29
Agilent Poroshell 120-Säulen
liefern ausgezeichnete
Peakformen für bessere
Ergebnisse bei basischen
Substanzen
Diese Trennung einer basischen Substanz
zeigt die Überlegenheit von Poroshell
120-Säulen gegenüber den Säulen
von Mitbewerbern bei der Trennung
anspruchsvoller Analyten.
Poroshell 120
Tf = 1,48
80
60
Anderer Hersteller P
Anderer Hersteller S Tf = 4,78
Tf = 2,68
40
20
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 50 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 699975-902)
0,777
Flussrate:1,5 ml/min
2,767
3,061
2,454
5,942
10
15
20
25
0,793
5
7,087
3,103
3,544
600
400
24 °C
Detektor:
DAD 254 nm, 2-μl-Durchflusszelle
35
Min.
35
Min.
N = 12 300, Tf = 2,95
k’ = 6,11, N = 16 300
200
30
Anderer Hersteller S
4,6 x 150 mm
800
0
10
15
20
25
0,940
5
200
9,536
4,179
5,039
600
400
30
Poroshell 120 EC-C18, 4 µm
4,6 x 150 mm (Best-Nr. 693970-902)
800
N = 15 400, Tf = 1,21
k’ = 8,56, N = 16 000
0
5
10
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 150 mm, 4 µm
Mobile Phase:20 mM 40 % K 2HPO4/ KH2PO4
pH 7, 60 % Methanol
Flussrate:
1,2 ml/min
15
20
25
Probe:
1. UraciI
2. Propranolol
3. Butylparaben
4. Dipropylphtalat
5. Amitriptylin
30
Min.
Temperatur:
N = 6900, Tf = 3,74
k’ = 5,95, N = 17 060
3,239
0
0,902
1,093
200
1,8
Anderer Hersteller T
4,6 x 150 mm
800
400
1,6
Probe:2-µl-Injektion von
250 µg/ml Amitriptylin,
50 µg/ml Uracil in H2O/CH3CN (9:1)
Mobile Phase:20 mM 40 % Na2HPO4,
pH 7, 60 % Acetonitril
600
1,4
30
35
Min.
Schelle, zuverlässige Trennungen
von Proteinen und Peptiden
Die Agilent Poroshell-Technologie ist perfekt geeignet für
die Trennung und Charakterisierung komplexer Biomoleküle,
darunter sowohl intakte als auch verdaute Proteine. Agilent
AdvanceBio RP-mAb-Säulen sind speziell für die besonderen
Herausforderungen der Charakterisierung monoklonaler
Antikörper konzipiert. Verwenden Sie für das Peptid-Mapping
von Proteinverdauen unsere mit einer schwierig zu trennenden
Peptidmischung vorgetesteten AdvanceBio Peptide MappingSäulen, um optimale Leistung bei Ihrer Peptid-Mapping-Applikation
zu gewährleisten.
Trennung monoklonaler
Antikörper mit hoher
Geschwindigkeit und hoher
Auflösung
Große Biomoleküle wie monoklonale
Antikörper werden in der Regel langsam
getrennt, um eine bei diesen langsam
diffundierenden Analyten mögliche
Peakverbreiterung zu reduzieren. Die bei
AdvanceBio RP-mAb-Säulen eingesetzte
Poroshell-Technologie verringert den
Diffusionsabstand und lässt so höhere
Flussraten und steilere Gradienten zu –
selbst auf 600-bar-Systemen.
Der weite Durchmesser der Poren, 450 Å, in
der dünnen Schicht ermöglicht den großen
Antikörpermolekülen vollen Zugang zur
gebundenen Phase und sorgt damit für eine
optimale Chromatographie. Die Auswahl an
robusten gebundenen Phasen, die eigens für
die Trennung von monoklonalen Antikörpern
entwickelt wurden, d. h. C4, SB-C8 sowie
eine spezielle Diphenyl-Phase, bietet eine
Reihe verschiedener Selektivitäten, die die
Optimierung der Auflösung erlauben.
Säule:
AdvanceBio RP-mAb C4
2,1 x 100 mm, 3,5 µm (Best-Nr. 795775-904)
Mobile Phase:
A: 0,1 % TFA in Wasser:IPA (98,2)
B: IPA:ACN:mobile Phase A (70:20:10)
Flussrate:
1,0 ml/min
Temperatur:
80 °C
Detektor:
UV, 254 nm
Gradient:
10–58 % B in 4 min, Spülung 1 min bei 95 % B,
erneute
Äquilibrierung 1 min
bei 10 % B
Probe:5 μl-Injektion der intakten
humanisierten rekombinanten
Herceptin-Variante IgG1 von
Creative Biolabs (1 mg/ml)
Charakterisierung in weniger als 2 Minuten
mAU
140
mAU
12
120
10
8
6
100
4
2
0
80
-2
-4
60
1,3
1,4
1,5
1,6
1,7
1,8
1,9
2
2,1
2,2
40
20
0
1,3
1,4
1,5
1,6
1,7
1,8
1,9
2
2,1
2,2
Agilent verfügt über eines der größten Sortimente an Biosäulen,
beispielsweise mit den AdvanceBio-Säulen für mehr Genauigkeit
und Produktivität bei der Trennung biologischer Stoffe. Weitere
Informationen finden Sie unter agilent.com/chem/advancebio
31
Tryptischer Peptid-Map eines
mAb mittels BioConfirm
Molecular Feature Extractor von
Stratagene
Unter Verwendung des BioConfirm
Molecular Feature Extractors lässt sich
100 % Sequenzabdeckung bei der leichten
und der schweren Kette desselben
monoklonalen Antikörpers zeigen.
QTOF-Geräteparameter
Quelle – ESI-positiv
Gastemperatur:
325 ºC
Trocknungsgas:
10 l/min
Zerstäuber:40 psi
Vcap:
4000 V
Fragmentor:
150 V
Skimmer:
65 V
Octapole 1 RF:
750 V
MS:
4 Hz
Massenbereich: 200-3200 m/z
Referenzmasse:922,009798
Akquisitionsmodus:Extended Dynamic Range
Mode (2 GHz)
Insulin-Analyse: Transfer von
einer ZORBAX StableBond
1,8-μm-Säule auf eine Poroshell
120-Säule zur Steigerung der
Effizienz
Die Poroshell 120 SB-C18-Säule lieferte
aufgrund ihrer größeren Poren und der
schnelleren Diffusion durch die 120-Å-Poren
die doppelte Effizienz wie die ZORBAX
RRHD SB-C18-Säule mit 80 Å. Poroshell
120-Säulen eignen sich ideal für kleine
Proteine wie Insulin oder andere Peptide und
bieten eine höhere Effizienz bei niedrigeren
Drücken.
x 106
4,8
4,6
4,4
4,2
4
3,8
3,6
3,4
3,2
3
2,8
2,6
2,4
2,2
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Counts vs. Erfassungszeit (Min.)
Säule:Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 150 mm, 2,7 µm
(Best-Nr. 683975-302)
Detektion: QTOF, ESI-positiv
Gradient: Aus der Tabelle ersichtlich
Mobile Phase:
A: Wasser, 0,1 % Ameisensäure
B: ACN, 0,1 % Ameisensäure
Flussrate: 0,3 ml/min
Temperatur: 40 °C
Zeit
0
3
13
15
Zeit
%B
15,190
17 90
18 2
%B
2
2
45
65
ZORBAX SB-C18, 4,6 x 100 mm, 1,8 µm – (Best-Nr. 828975-902)
mAU
mAU
500
500
400
400
300
300
200
200
100
1000
0 5
5
1
1
N1 = 5215
N = 5215
Tf11 = 1,4
Tf1 = 1,4
7,5
7,5
10
10
1. Schweineinsulin
2. A-21 Desamido-Insulin
N2 = 6691
N = 6691
N22 = 1,2
N2 = 1,2 2
2
12,5
12,5
15
15
255 bar
255 bar
17,5
17,5
20 Min.
20 Min.
Poroshell 120 SB-C18, 4,6 x 100 mm, 2,7 µm – (Best-Nr. 685975-902)
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
1000
0 5
5
N1 = 10 860
N = 10 860
Tf11 = 1,1
Tf1 = 1,1
7,5
7,5
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
1000
0
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
1000
10
10
12,5
12,5
1
1
N1 = 7854
N = 7854
Tf11 = 1,4
Tf1 = 1,4
5
5
7,5
7,5
32
10
10
N1 = 9768
N = 9768
Tf11 = 1,0
Tf1 = 1,0
12,5
12,5
1
1
1
1
N2 = 12 370
N = 12 370
Tf22 = 1,0
Tf2 = 1,0
15
15
17,5
17,5
N2 = 9434
N = 9434
Tf22 = 1,1
Tf2 = 1,1
2
2
15
15
N2 = 10 710
N = 10 710
Tf22 = 1,0
2
Tf2 = 1,0
2
2
2
190 bar
190 bar
20 Min.
20 Min.
237 bar
237 bar
17,5
17,5
20 Min.
20 Min.
198 bar
198 bar
Peptid-Map für biosimilares EPO
Das obere Chromatogramm zeigt ein
Peptid-Map eines hoch glycosylierten
EPO eines Biosimilars. Bemerkenswert
ist die hervorragende Auflösung kleiner
Peptidfragmente bei UV-Detektion.
Das untere Chromatogramm zeigt
dieselbe Trennung bei Anwendung der
Massenspektroskopie zur Bestimmung
der Sequenzabdeckung (100 %). Der
Vergleich von Peptid-Maps erfolgt
mittels UV-Detektion, während für die
Identifizierung von Substitutionen und
Modifikationen von Aminosäuren MS
ideal ist. Mit der AdvanceBio Peptide
Mapping-Säule ist es demnach einfach,
die Identität eines Proteins zu bestätigen
und posttranslationale Modifikationen
nachzuweisen.
300
250
200
150
100
50
0
0
5
Säule: 10
15
A
dvanceBio Peptide Mapping,
2,1 x 250 mm, 2,7 µm,
(Best-Nr. 651750-902)
Flussrate: 0,4 ml/min
Injektion: 5 µl (2,0 mg/ml)
Temp.: 55 ºC
20
25
Detektion: Min.
30
220 nm
Gradient: A: Wasser (0,1 % FA)
B: ACN (0,1 % FA),
0–28 min, 3–45 % B;
28–33 min, 45–60 % B;
33–34 min, 60–95 % B
x 10 6
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
12,155
Cpd 1: 12,155
0,5
0
11
11,5
12
12,5
13
13,5
14
14,5
15
15,5
16
16,5
17
17,5
18
18,5
19
19,5
20
20,5
Counts vs. Erfassungszeit (Min.)
21
21,5
22
22,5
23
23,5
24
24,5
25
25,5
26
26,5
27
27,5
EPO-Verdau, LC/MS-TOF,
100 % Sequenzabdeckung erzielt bei Verwendung der MassHunter Workstation-Software
AdvanceBio Peptide Mapping-Säulen von Agilent bieten dieselben Vorteile bei
schnellen LC-Analysen wie Poroshell 120-Säulen und sind mit einer komplexen Peptidmischung
chargengetestet, um Eignung und Reproduzierbarkeit zu gewährleisten. AdvanceBio Peptide
Mapping-Säulen sind auch in der neuen Länge von 250 mm für maximale Auflösung der
komplexesten Peptid-Maps erhältlich.
Erfahren Sie mehr auf agilent.com/chem/advancebio
oder fordern Sie die Publikation
5991-1696EN an.
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
33
Welche Fast-LC-Säule ist für Ihre Anforderungen am besten geeignet?
Agilent bietet die größte Auswahl an Fast LC-Säulen. Zur Produktfamilie gehören Poroshell 120-Säulen, ZORBAX Rapid Resolution High
Definition (RRHD)-Säulen, 1,8 µm (stabil bis 1200 bar), und ZORBAX Rapid Resolution High Throughput (RRHT)-Säulen, 1,8 µm (stabil bis
600 bar). Um die Skalierbarkeit zu gewährleisten, binden wir alle diese Säulen mit ähnlichen stationären Phasen. Die große Auswahl bietet
Ihnen ein Höchstmaß an Flexibilität für die Entwicklung von Methoden, mit denen Sie Ihre Bedingungen optimieren können.
Ihre Laborsituation
Agilent empfiehlt
Begründung
UHPLC-Geräte (1000+ bar) und HPLCGeräte (z. B. Agilent 1290 Infinity LC und
1260 Infinity LC – 600 bar)
1. Poroshell 120, 4 μm und 2,7 μm
2. ZORBAX RRHD 1,8 µm
Poroshell 120 kann auf beiden Gerätetypen einfach verwendet werden.
Mit ZORBAX RRHD können Sie die UHPLC-Möglichkeiten des 1290
Infinity LC optimieren.
Nur HPLC-Geräte mit 400-600 bar –
Agilent 1200 Infinity Serie, Agilent 1100
(400 bar) sowie 1220 Infinity LC oder 1260
Infinity LC (600 bar)
1. Poroshell 120, 4 μm und 2,7 μm
2. ZORBAX Eclipse Plus 3,5 µm und 5 µm
Mit Poroshell 120 4-μm- und 2,7-μm-Säulen können Sie die Leistung
älterer 400-bar-Geräte steigern und die Leistung neuerer 600-barUHPLC-Geräte weiter optimieren. Für eingeführte Methoden, die nicht
übertragen werden können, bietet die Säule ZORBAX Eclipse Plus eine
herausragende Peakform und Leistung.
Kombination von UHPLC-Geräten
(Agilent 1290 Infinity LC, andere Geräte
mit mehr als 1000 bar) und HPLC-Geräten
(z. B. Serie 1200 Infinity)
1. ZORBAX RRHD 1,8 µm
2. Poroshell 120, 2,7 µm
ZORBAX RRHD liefert auf allen diesen Geräten eine optimale Leistung.
Poroshell 120 kann auf den 600-bar-Geräten zur Optimierung der
Leistung eingesetzt werden.
Sie wünschen sich optimale
Ergebnisse bei der Probenanalyse?
Beginnen Sie mit der optimalen
Probenvorbereitung
Verringern Sie die Notwendigkeit wiederholter Läufe und minimieren
Sie Interferenzen, die die Trennung, die Detektion und die
Quantifizierung beeinträchtigen können. Das Agilent Portfolio für
die Probenvorbereitung kombiniert innovative Produkte, modernste
Herstellungsmethoden und strenge Qualitätskontrollen – für
zuverlässige, konsistente Resultate.
agilent.com/chem/samplepreparation
34
Durchbrechen Sie die Leistungsgrenzen Ihrer
UHPLC-Geräte und steigern Sie die Zuverlässigkeit
Ihrer herkömmlichen Methoden
Gleichgültig ob Sie ein bewährtes LC-System für Routineanalysen
oder ein besonders ausgefeiltes LC/MS-System mit hoher
Auflösung brauchen: Die Agilent Infinity 1200 Serie hat es.
In Kombination mit Poroshell 120-Säulen liefern Geräte der Serie
Infinity 1200 eine ausgezeichnete Auflösung und Empfindlichkeit
und erhöhen die Trennleistung. Sie garantieren auch einfachen
Methodentransfer zwischen Systemen ohne Neuentwicklung oder
Revalidierung.
Enorm
Enorm
Enorm
kostengünstig
zuverlässig
leistungsfähig
1220
Infinity LC
1260
Infinity LC
1290
Infinity II LC
Erfahren Sie unter
agilent.com/chem/infinity,
weshalb die Agilent 1200 Infinity Serie
die beste Wahl ist
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
35
Technische Daten und Bestellinformationen
Agilent Poroshell 120 4-µm-Säulen
NEU
Abmessungen (mm)
EC-C18
EC-C8
PFP
4,6 x 250
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 50
3,0 x 250
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 50
2,1 x 250
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 50
690970-902
693970-902
695970-902
699970-902
690970-302
693970-302
695970-302
699970-302
650750-902
693770-902
695770-902
699770-902
690970-906
693970-906
695970-906
699970-906
690970-306
693970-306
695970-306
699970-306
650750-906
693770-906
695770-906
699770-906
690970-408
693970-408
695970-408
699970-408
690970-308
693970-308
695970-308
699970-308
650750-408
693770-408
695770-408
699770-408
Vorsäulen für 4-µm-Säulen
Phenyl-Hexyl
HILIC
Abmessungen (mm)
EC-C18
690970-912
693970-912
695970-912
699970-912
690970-312
693970-312
695970-312
699970-312
650750-912
693770-912
695770-912
699770-912
690970-901
693970-901
695970-901
699970-901
690970-301
693970-301
695970-301
699970-301
650750-901
693770-901
695770-901
699770-901
4,6 x 5
3,0 x 5
2,1 x 5
820750-916
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 75
4,6 x 50
4,6 x 30
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 75
3,0 x 50
3,0 x 30
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 75
2,1 x 50
2,1 x 30
693975-902
695975-902
697975-902
699975-902
691975-902
693975-302
695975-302
697975-302
699975-302
691975-302
693775-902
695775-902
697775-902
699775-902
691775-902
821725-916
HOHER
pH
Agilent Poroshell 120 2,7-µm-Säulen
Abmessungen (mm) EC-C18
823750-916
EC-C8
SB-C18
SB-C8
NEU HPH-C18
NEU HPH-C8
693975-906
695975-906
697975-906
699975-906
691975-906
693975-306
695975-306
697975-306
699975-306
691975-306
693775-906
695775-906
697775-906
699775-906
691775-906
683975-902
685975-902
687975-902
689975-902
681975-902
683975-302
685975-302
687975-302
689975-302
681975-302
683775-902
685775-902
687775-902
689775-902
681775-902
683975-906
685975-906
693975-702
695975-702
693975-706
695975-706
689975-906
699975-702
699975-706
683975-306
685975-306
693975-502
695975-502
693975-506
695975-506
689975-306
699975-502
699975-506
683775-906
685775-906
693775-702
695775-702
693775-706
695775-706
689775-906
699775-702
699775-706
36
NEU
Agilent Poroshell 120 2,7-µm-Säulen (Fortsetzung)
Abmessungen
(mm)
Phenyl-Hexyl
SB-Aq
Bonus-RP
HILIC
EC-CN
NEU PFP
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 50
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 50
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 50
693975-912
695975-912
699975-912
693975-312
695975-312
699975-312
693775-912
695775-912
699775-912
683975-914
685975-914
689975-914
683975-314
685975-314
689975-314
683775-914
685775-914
689775-914
693968-901
695968-901
699968-901
693968-301
695968-301
699968-301
693768-901
695768-901
699768-901
693975-901
695975-901
699975-901
693975-301
695975-301
699975-301
693775-901
695775-901
699775-901
693975-905
695975-905
699975-905
693975-305
695975-305
699975-305
693775-905
695775-905
699775-905
693975-408
695975-408
699975-408
693975-308
695975-308
699975-308
693775-408
695775-408
699775-408
Hinweis: Poroshell 120-Säulen haben einen Druckgrenzwert von 600 bar/9000 psi.
Agilent Poroshell 120 Schnelle Vorsäulen für UHPLC
Abmessungen
(mm)
EC-C18
EC-C8
SB-C18
Phenyl-Hexyl
Neu PFP
HPH-C18
4,6 x 5
820750-911
820750-913
820750-912
820750-914
820750-915
820750-921
3,0 x 5
823750-911
823750-913
823750-912
823750-914
823750-915
823750-921
2,1 x 5
821725-911
821725-913
821725-912
821725-914
821725-915
821725-921
Abmessungen
(mm)
HPH-C8
SB-C8
SB-Aq
Bonus-RP
HILIC
EC-CN
4,6 x 5
820750-922
820750-923
820750-924
820750-925
820750-926
820750-927
3,0 x 5
823750-922
823750-923
823750-924
823750-925
823750-926
823750-927
2,1 x 5
821725-922
821725-923
821725-924
821725-925
821725-926
821725-927
Hinweis: Vorsäulen in Verpackungseinheiten mit 3 Stück erhältlich
Technische Daten der gebundenen Phasen der Agilent Poroshell 120-Säulen
Gebundene Phase
Porengröße
Temp.
Grenzwerte
pH-Bereich
Mit Endcapping
KohlenstoffBeladung
Oberfläche
EC-C18
120 Å
60 ºC
2,0–8,0
Doppelt
10 %
130 m²/g
EC-C8
120 Å
60 ºC
2,0–8,0
Doppelt
5%
130 m²/g
SB-C18
120 Å
90 ºC
1,0–8,0
Nein
9%
130 m²/g
SB-C8
120 Å
80 ºC
1,0–8,0
Nein
5,5 %
130 m²/g
HPH-C18
100 Å
60 ºC
3,0–11,0
Doppelt
Proprietär
95 m²/g
HPH-C8
100 Å
60 ºC
3,0–11,0
Doppelt
Proprietär
95 m²/g
Phenyl-Hexyl
120 Å
60 ºC
2,0–8,0
Doppelt
9%
130 m²/g
SB-Aq
120 Å
80 ºC
1,0–8,0
Nein
Proprietär
130 m²/g
Bonus-RP
120 Å
60 ºC
2,0–9,0
Dreifach
9,5 %
130 m²/g
HILIC
120 Å
60 ºC
0,0–8,0
Nein
–
130 m²/g
EC-CN
120 Å
60 ºC
2,0–8,0
Doppelt
3,5%
130 m²/g
PFP
120 Å
60 ºC
2,0–8,0
Ja
5,1 %
130 m²/g
Die Angaben stellen typische Werte dar.
37
Einzigartige Säulentypen
mit höherer Stabilität bei
hohem pH-Wert
Agilent Poroshell 300 5-μm-Säulen
Beschreibung
Abmessungen (mm)
300SB-C18
300SB-C8
300SB-C3
300Extend-C18
Narrow-Bore
2,1 x 75
660750-902
660750-906
660750-909
670750-902
MicroBore
1,0 x 75
661750-902
661750-906
661750-909
671750-902
821075-920
821075-918
821075-924
820888-901
820888-901
820888-901
5185-5968
5185-5968
5185-5968
Kapillare
0,5 x 75
Vorsäulenkartusche, 4 St.
2,1 x 12,5
5065-4468
Vorsäulen-Hardware-Kit
MicroBore-Vorsäule, 3 St.
1,0 x 17
5185-5968
Hinweis: Poroshell 300-Säulen dürfen nicht über 400 bar/6.000 psi betrieben werden.
Technische Daten der gebundenen Phasen der Agilent Poroshell 300-Säulen
Gebundene Phase
Porengröße
Temp. Grenzwerte
pH-Bereich
Mit Endcapping
Poroshell 300SB-C18, C8, C3
300 Å
90 ºC
1,0–8,0
Nein
2,0–11,0
Ja
Poroshell 300Extend
40 °C über pH 8
300 Å
60 °C unter pH 8
Die Angaben stellen typische Werte dar.
Agilent AdvanceBio RP-mAb-Säulen
Agilent AdvanceBio Peptide Mapping-Säulen
Beschreibung
Bestellnummer
Beschreibung
Bestellnummer
C4, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
793975-904
4,6 x 150 mm, 2,7 μm
653950-902
C4, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
795975-904
3,0 x 150 mm, 2,7 μm
653950-302
C4, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
799975-904
2,1 x 250 mm, 2,7 μm
651750-902
C4, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
793775-904
2,1 x 150 mm, 2,7 μm
653750-902
C4, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
795775-904
2,1 x 100 mm, 2,7 μm
655750-902
C4, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
797775-904
4,6 mm Fast Guard*
850750-911
C4, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
799775-904
3,0 mm Fast Guard*
853750-911
SB-C8, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
783975-906
2,1 mm Fast Guard*
851725-911
SB-C8, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
785975-906
SB-C8, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
789975-906
SB-C8, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
783775-906
SB-C8, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
785775-906
SB-C8, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
787775-906
SB-C8, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
789775-906
Diphenyl, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
793975-944
Diphenyl, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
795975-944
Diphenyl, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
799975-944
Diphenyl, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
793775-944
Diphenyl, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
795775-944
Diphenyl, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
797775-944
Diphenyl, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
799775-944
*Fast Guards verlängern die Lebensdauer von Analysesäulen, ohne die Trennung zu verlangsamen oder
die Auflösung zu beeinträchtigen.
Agilent AdvanceBio Peptide Mapping, Spezifikationen
Gebundene
Phase
C18
Porengröße
120 Å
Temp.
Grenzwerte
60 ºC
pH-Bereich*
2,0–8,0
Mit
Endcapping
Doppelt
Die Angaben beziehen sich nur auf typische Werte.
Agilent AdvanceBio RP-mAb Spezifikationen
Gebundene Phase
Porengröße
Temp. Grenzwerte
pH-Bereich*
Mit Endcapping
AdvanceBio RP-mAb C4
450 Å
90 ºC
1,0–8,0
Ja
AdvanceBio RP-mAb SB-C8
450 Å
90 ºC
1,0–8,0
Nein
AdvanceBio RP-mAb Diphenyl
450 Å
90 ºC
1,0–8,0
Ja
Die Angaben stellen typische Werte dar.
*Die Säulen sind für eine optimale Verwendung bei niedrigen pH-Werten konzipiert. Bei pH 6–8 sind sämtliche Säulen auf Silica-Basis bei Betriebstemperaturen < 40 °C und niedrigen
Pufferkonzentrationen im Bereich von 0,01–0,02 M am stabilsten.
38
Agilent AdvanceBio Oligonucleotide-Säulen
Beschreibung
Bestellnummer
2,1 x 50 mm, 2,7 µm
659750-702
2,1 x 100 mm, 2,7 µm
655750-702
2,1 x 150 mm, 2,7 µm
653750-702
2,1 mm Fast Guard
821725-921
4,6 x 50 mm, 2,7 µm
659950-702
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
655950-702
4,6 x 150 mm, 2,7 µm
653950-702
4,6 mm Fast Guard
820750-921
Oligonukleotid Resolution Standard
5190-9028
Oligonukleotid-Ladder-Standard
5190-9029
Agilent AdvanceBio Oligonucleotide-Säulen Spezifikationen
Gebundene Phase
Porengröße
Temp. Grenzwerte
pH-Bereich*
Mit Endcapping
C18
100 Å
65 ºC
3,0–11,0
Doppelt
Innovation von Agilent: Die erste LC-Säule mit oberflächenporösen Partikeln für die Oligonukleotidanalytik, die bei hohen pH-Werten
stabil ist
Agilent AdvanceBio Glycan-Mapping-Säulen
Beschreibung
Bestellnummer
4,6 x 250 mm, 2,7 μm
680975-913
4,6 x 150 mm, 2,7 μm
683975-913
4,6 x 100 mm, 2,7 μm
685975-913
2,1 x 250 mm, 2,7 μm
651750-913
2,1 x 150 mm, 2,7 μm
683775-913
2,1 x 100 mm, 2,7 μm
685775-913
2,1 mm, 2,7 μm, Fast Guard
821725-906
Agilent AdvanceBio Glycan Mapping-Spezifikationen
Maximaler
Gebundene Phase
ID (mm)
Partikelgröße (µm)
Mit Endcapping
pH-Stabilität
Betriebstemperatur
Amid HILIC
2,1 und 4,6
1,8, voll porös
Nein
2–7
60 °C
1200 bar
Amid HILIC
2,1 und 4,6
2,7, oberflächenporös
Nein
2–7
60 °C
600 bar
Druck
Weitere Informationen zu Agilent Poroshell 120-Säulen finden Sie unter
agilent.com/chem/poroshell120
39
AGILENT SÄULENTYPEN:
Behalten Sie die vollständige Kontrolle über Ihre Analysen
Das Agilent Wertversprechen:
10 Jahre garantierte Leistung
Agilent Poroshell 120 ist ein Produkt unserer langjährigen Erfahrung in der
Fertigung hochwertiger und leistungsstarker Lösungen für die Chromatographie von
niedermolekularen Verbindungen und Biomolekülen. Wir bieten alternative Selektivitäten
und Optionen für schnelle LC-Trennungen sowie eine Reihe von Säulen für die
Charakterisierung von Biomolekülen an.
Über die Weiterentwicklung unserer
Produkte hinaus bietet Agilent etwas
Einzigartiges in der Branche – unsere
Wertzusage von 10 Jahren. Agilent
garantiert eine mindestens 10-jährige
Gerätenutzung ab Kaufdatum. Andernfalls
rechnen wir den Restwert dieses Systems
auf ein neueres Modell an.
Mit den Produktfamilien Agilent Bond Elut Silica, Polymeric SPE und Captiva Filtration für
die Probenvorbereitung liefern wir die größte Auswahl an Lösungen zur Steigerung des
Durchsatzes und zur Optimierung der Datenqualität.
Mit mehr als 40 Jahren Erfahrung in der Fertigung von Polymer- und Silica-Phasen stellt
unser Team eine akribische Überwachung der Produktionsprozesse sicher und widmet sich
der kontinuierlichen Entwicklung fortschrittlicher Lösungen, mit denen Sie noch produktiver
arbeiten können.
Weitere Informationen finden Sie unter
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© Agilent Technologies, Inc. 2015
Gedruckt in den USA, 21. August 2015
5990-5951DEE
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