infoPoint Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösung für die klinische Diagnostik Anwendung Harris Hämatoxylinlösung wird im Bereich der Histologie und Zytologie häufig als Bestandteil der Hämatoxylin-Eosin-Färbung eingesetzt und dient der Färbung von Nukleoproteinen und Nukleinsäuren in Gewebeproben. Prinzip Hämatoxylin hat keine Färbeeigenschaften, sein Oxidationsprodukt, das Hämatein verleiht der Lösung die färbenden Eigenschaften. Die Oxidation kann entweder spontan erfolgen oder induziert werden. Die erste Option verläuft langsam, da sie auf der natürlichen Oxidation durch Luftsauerstoff und Licht beruht. Bei der zweiten, schnellen Methode, wird ein Oxidationsmittel (z. B. Quecksilber oder Iod) verwendet. Hierdurch wird jedoch die Haltbarkeit des Färbemittels reduziert, da Hämatein auch oxidiert werden kann. Aus diesem Grund haben Hämatoxylinlösungen, bei denen die Oxidation induziert wurde, eine kürzere Haltbarkeit, benötigen aber keinen Reifeprozess und können direkt nach ihrer Zubereitung verwendet werden. Die durch die Verwendung von Oxidationsmitteln auftretenden Probleme können durch die Erhöhung der Ethanolkonzentration und das Absenken des pH-Werts reduziert werden. Beide Strategien wurden in der ursprünglichen Rezeptur von Harris Hämatoxylinlösung übernommen. In einigen Fällen reichen diese Modifikationen nicht aus, um die Färbeaktivität nach dem Färben vieler Proben zu erhalten; wahrscheinlich weil das Oxidationsmittel das Hämatein verbraucht hat oder weil die Anzahl der zu färbenden Proben zu groß ist. Hauptvorteile Bessere Formulierung: • Besserer Kontrast und stärkere Farbfixierun • Höhere Kapazität zum Färben von Proben. Quecksilberfrei: • Zum Schutz der Umwelt. • Zum Schutz des Benutzers. Harris Hämatoxylin modifizierte Lösung wurde von PanReac AppliChem mit einem klaren Ziel speziell entwickelt: Steigerung der Haltbarkeit des Färbemittels, bei gleichbleibenden Eigenschaften der ursprünglichen Lösung. Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösung für die klinische Diagnostik IP-007DE;201507 MANUELLE Vorgehensweise AUTOMATISCHE Vorgehensweise Stufe Reagenz Zeit Stufe Reagenz Zeit Entparaffinieren Xylol 3 x 5 min Entparaffinieren Rehydrieren Ethanol 100 % Ethanol 90 % Ethanol 70 % Destilliertes Wasser 7 min 7 min 7 min 7 min Xylol Xylol-Ethanol Ethanol 100 % Ethanol 96 % 3 x 5 min 5 min 2 x 3 min 3 min Waschen Leitungswasser 4 min Färben Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösung 6 min Färben Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösung 6 min Waschen Leitungswasser 5 min Waschen Stabilisieren der Farbe Essigsäure 2 % 10 - 20 s Leitungswasser Essigsäure 4 min 12 s Waschen Leitungswasser Ethanol 96 % 5 min 1 min Waschen Leitungswasser lithiierten Ethanol 4 min 30 s Färben Eosin-Phloxin-Lösung (*) 5 min Färben Eosin-Phloxin-Lösung (*) 3 min Dehydrieren Ethanol 70 % Ethanol 90 % Ethanol 100 % Ethanol 100 % 5s 5s 1 min 5 min Klären Ethanol 96 % Ethanol 100 % Xylol 1 min 2 x 1 min 3 x 1 min Einbetten DPX Xylol 5s+ 5 min trocknen 5 min + trocknen Klären Xylol Einbetten Einschlussmittel (DPX, Eukitt, Histofluid...) (*) Zubereitung der Eosin-Phloxin-Lösung. Eosin-Stammlösung: 1,0 g Eosin gelblich (C.I. 45380) in Wasser auflösen und mit Wasser auf 100 ml auffüllen. Phloxin-Stammlösung: 1,0 g Phloxin in Wasser auflösen und mit Wasser auf 100 ml auffüllen. 10 ml der Eosin-Stammlösung mit 1 ml der Phloxin-Stammlösung mischen, 78 ml Ethanol 96 % und 0,4 ml Eisessig hinzugeben. Die Lösung homogenisieren und an einem vor Sonnenlicht geschützten Ort aufbewahren. Auswertung Zellkerne: blau. Zytoplasma: verschiedene Rot - und Rosatöne. Bestellinformationen Bestell-Nr. Beschreibung Inhalt 256991.1610 Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösung 500 mL 256991.1612 Harris Hämatoxylin, modifizierte Lösun 2,5 L 256879.1210 Eosin gelblich, alkoholische Lösung 1 % 500 mL 256879.1612 Eosin gelblich, alkoholische Lösung 1 % 2,5 L 251301.1609 Eosin gelblich - Lösung in verdünntem Alkohol 1 % 250 mL 251301.1611 Eosin gelblich - Lösung in verdünntem Alkohol 1 % 1000 mL 251299.1606 Eosin gelblich (C.I. 45380) 25 g 251299.1608 Eosin gelblich (C.I. 45380) 100 g Wir bieten ein großes Sortiment an histologischen Reagenzien an. Bitte fragen Sie nach weiteren Informationen. IP-007DE AppliChem GmbH Ottoweg 4 DE-64291 Darmstadt Germany Phone +49 6151 9357-0 Fax +49 6151 93 57-11 [email protected] Nova Chimica Srl Via G. Galilei, 47 I-20092 Cinisello Balsamo (Milano) Italy Phone +39 02 66045392 Fax +39 02 66045394 [email protected] PanReac Química SLU Garraf, 2 Polígono Pla de la Bruguera E-08211 Castellar del Vallès Barcelona (Spain) Phone +34 937 489 400 Fax +34 937 489 401 [email protected] www.itwreagents.com
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