in vitro 皮膚感作性試験（human Cell Line Activation Test：h-CLAT) h-CLATは、ヒト単球性白血病患者由来株（THP-1細胞）を用い、被験物質暴露後の細胞表面抗原（CD54,CD86)の発現量の変化を指標として皮膚感作性を評価する in vitro皮膚感作性試験法であり、現在OECDテストガイドライン（TG)化が進められています。【方法】 1. 被験物質の細胞生存率が75％となる用量を基準に被験物質の希釈系列を調製し、細胞を暴露 2. 24時間培養後、抗体染色 3. フローサイトメーターで分析 4. CD86及びCD54に関して、それぞれ相対蛍光強度（RFI）を算出使用フローサイトメーター全自動細胞解析装置 Cytomics FC 500 (Beckman Coulter社）【評価】陽性判定基準 CD86：RFI＞150％, CD54：RFI＞200％ 3回試験し、どちらか一方の抗原で2回以上陽性となった場合に皮膚感作性陽性と判定表 TG案での技術確認用10物質の試験結果 CERI 結果技術確認用10物質 * P/N 2,4-Dinitrochlorobenzene P Chloramine T P Nickel sulfate P Phenylacetaldehyde P Hydroxycitronellal P Imidazolidinyl urea P 1-Butanol N Glycerol N Lactic Acid N Vanillin N P:Positive, N:Negative, N/A : not applicable MIT (μg/mL） 2.8 226.3 75.0 25.8 24.9 57.4 N/A N/A N/A N/A TG案記載結果* P P P P P P N N N N MIT: Minimal induction threshold 陽性と判定される最も低い濃度 *: OECD (2015), In Vitro Skin Sensitisation: human Cell Line Activation Test (h-CLAT). DRAFT PROPOSAL FOR A NEW TEST GUIDELINE . Organisation for Economic Cooperation and Development, Paris. Available at: https://www.oecd.org/env/ehs/testing/151216-Draft-h-CLAT-TG-After-Expert-Meeting -(clean)-Final.pdf OECD TG案記載の技術確認用10物質の判定結果は、TG案記載の結果と全て一致することを確認しました。 CERI では Local Lymph Node Assay (LLNA)、Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA)試験やDerek Nexusの in silico法にも対応しており、Integrated Approach on Testing and Assessment（IATA)による評価も可能です！