PEG 沈殿による DNA の精製
(R.Kawai-Hirai)
1.
LB 1.5 ml で培養。一晩の培養でおよそ 10 g 回収可。
シークエンスに要する量は、Dye terminator 法１反応につき 0.4 g 、
Dye primer 法１反応につき 1.2 g 。
2.
通常のアルカリ法( mini prep.) によりプラスミド DNA を調製。
ただし、最後は TE 50 l ではなく、dH2O 33 l に溶解する。
PEG による沈殿では、分子量の比較的小さな DNA 断片は取り除けるが、
ゲノム DNA を取り除くことはできないので、電気泳動でサンプルの状態
を確認する。
3.
7 l 5 M NaCl
と 40 l 13 % PEG6000(MW7500) を加え、20 min 氷冷。
（生理研 original ; 32 l sample + 8 l 4 M NaCl + 40 l 13% PEG8000 ）
4.
1500 rpm、 20 min、 4 ℃で遠心。
5.
ペレットを 500 l 70% EtOH で wash 。
6.
ペレットを 500 l 70% EtOH で wash 。
7.
減圧乾燥。
8.
20 l dH2O でサンプルを溶解、- 20℃で保存。

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