110 DNA への UV 照射によるダイレクトシーケンス法への影響 ◎国井 拓弥 1)、南木 融 1)、大木 圭子 1)、神田 智之 1)、山崎 慎介 1)、川村 真奈美 1)、川上 康 2) 筑波大学附属病院 1)、筑波大学医学医療系 2) （はじめに）PCR 法で増幅した DNA が、目的の遺伝子で ゲン)を用いて DNA を精製し、ダイレクトシーケンス法に あるかどうか確認するためには塩基配列を調べる必要があ て塩基配列を解析した。 り、通常、ダイレクトシーケンス法が用いられている。当 （結果）UV を照射する時間が 3 分までのゲルから抽出し 院検査室において、PCR 法にて増幅した DNA をアガロー た DNA を用いたときは、UV を照射していないものと同様 スゲルを用いて分離後、そのゲルから精製した DNA をダ に、ダイレクトシーケンス法で良好に塩基配列を読みとる イレクトシーケンス法にて解析する際、塩基配列の読みと ことができた。一方、UV を照射する時間が 5 分以上のゲ りができないことが複数回あったため、今回我々はその原 ルから抽出した DNA を用いたときには良好な結果が得ら 因について検討を行った。 れず、今回増幅した DNA の長さ約 530bp 中、約 150bp 程 （方法・対象）対象はインフォームドコンセントを得てい 度しか読みとることができなかった。 る CML 患者の検体を使用した。検体から ISOGEN(ニッポ （考察）DNA に UV を照射するとピリミジンダイマーを形 ンジーン)を用いて total RNA を抽出し、RNA PCR 成してしまうことが報告されている。今回の検討において Kit(AMV)Ver.3.0(TaKaRa)を用いて cDNA を合成した。合成 も UV を照射することによって形成されたピリミジンダイ した cDNA を BCR-ABL 遺伝子に特異的なプライマーを用 マーが、ダイレクトシーケンス法の解析に影響を与えたの いて PCR 法で増幅後、アガロースゲル電気泳動を行い、エ ではないかと考えられる。詳細については、今後検討して チジウムブロマイドで染色した。染色後のゲルに High いく予定である。 performance Ultraviolet transiluminator(フナコシ製)を用いて、 連絡先 筑波大学附属病院 検査部 306nm の UV を一定時間照射したものと、UV を照射しな TEL 029-853-3718 いものを作製し、それぞれ QIAquick Gel Extraction kit (キア
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