CRISPR-Cas9 遺伝子改変マウス作製サービス発注方法  発注の流れ 1. ご希望内容のヒアリング  2. 5. 秘密保持契約の締結の要不要（同等契約が未締結の場合） - 改変の種類（null KO、Point mutation、cKO、KI） - 標的遺伝子名、Gene Bank ID - 受託繁殖サービス（F1 マウスの解析、繁殖コロニー立ち上げなど）ご利用の有無 CRISPR ベクターを設計して作製可否を検討、業務実施についてご相談します見積書のご提示  4. - CRISPR ベクターの設計  3. 作製サービスのお見積りおよび作製可否の検討に必要な情報をヒアリングします上記内容を踏まえた見積書をご提示します契約書の締結  契約案をご提示して内容をご確認頂いた上で、締結の手続きをします  作製サービスのみをご利用の場合は、契約書の代わりに発注書を使用いたします CRISPR ベクターの作製  CRISPR ベクターの作製を開始します（納期目安をご案内します） - 作製が難しい場合はお断りさせて頂くか、ご了解の上で以降の作業を進めさせて頂きます - 75mer 以上の DNA を導入する cKO、KI の場合、お客様にて二本鎖 DNA（KI ベクター）の作製と送付をお願いします（以下の基準でご準備ください）＜KI ベクター＞濃度：200ng/μL 以上 DNA 量：7μg 以上精 6. 製：脱塩グレードもしくは逆相カラムグレード以上 CRISPR ベクターの活性確認  in vitro でベクターの活性を確認します ※ 活性に問題がある場合はベクターの再設計などをご相談します 7. ファウンダーマウスの作製  CRISPR ベクター等を C57BL/6J マウス前核期受精卵 200～300 個へ注入します  仮親マウスへ胚移植をして産仔（ファウンダーマウス）を獲得します 8. ファウンダーマウスの解析  null-KO、Point mutation の場合 -  DNA ダイレクトシーケンスによる解析を実施して目的の変異を持つ個体を選抜します cKO、KI の場合 - PCR 等による解析を実施して目的の変異を持つ個体を選抜します＜ご注意事項＞ - On Target 領域のみシーケンスを実施します Off Target の解析をご希望の場合にはご相談ください - CRISPPR ベクターの Random Integration の解析は実施致しますが、KI マウスの場合、KI ベクターの Random Integration の解析は実施致しません（ご希望の場合はご相談ください） - 変異領域配列の決定には、F1 マウスのシーケンスを実施する必要があります F1 マウスの解析をご希望の場合にはご相談ください 9. 納品  お客様施設もしくは弊社受託施設（筑波事業所）へ納品します 10. 請求  納品月の月末に請求書を発行します（翌月末支払い）  マウス作製後の受託繁殖サービスについて作製後のマウスは、お客様ご自身にて繁殖されるか、弊社受託施設にて繁殖供給するサービスをご提供しております。繁殖供給サービスでは、お客様のご希望に合わせたプランをご提示します。 A) 微生物学的検疫・クリーン化 B) ファウンダーマウスからのライン化（ex. 次世代への継代と遺伝子解析による個体選抜） C) コロニー拡大と定期供給（ex. Homozygote♂20 匹 D) 他系統等の掛け合わせ（ex. ジャクソン研究所 Cre マウスなど） E) 凍結受精卵・凍結精子の作製と保管 3 カ月毎の供給）マウス作製と同時進行（もしくは事前に）でご希望内容のヒアリングをして、繁殖供給計画と見積書をご提示します。繁殖供給サービスをご委託頂ける場合は、契約案をご提示し締結させて頂きます。筑波大学にてマウスを作製した後は、そのまま弊社受託施設へ引き取りをさせて頂き、ご契約内容に沿って繁殖供給業務等を開始いたします。詳しくは営業担当者へご相談ください。日本チャールス・リバー株式会社営業部 TEL: 045(474)9340 FAX: 045(474)9341 Email: [email protected] HP: http://www.crj.co.jp/