70 ク ラ ミジ ア感 染 症 の診 断 にお け る特 異 的IgM 抗 体測 定 の意義 に関 す る検 討 札幌医科大学小児科学教室 沼 崎 啓 千 葉 峻 三 北海道立小児総合保健センター小児科 新飯田 裕 一 梅 津 征 夫 札幌市青木眼科医院 青 木 功 (平成3年8月7日 喜 受付) (平成3年8月29日 受理) Key words: IgM antibody, ELISA, 要 SeroELISA(R), IPAzyme 旨 ChlamydiatrachomtisChlamydiapsittac4Chlamydiapneumoniaeは それ ぞれ肺 炎 な どの呼 吸器感 染 症 を 発 症 す る こ と が 知 られ て い る.こ れ ら の ク ラ ミジ ア 肺 炎 の 診 断 に は血 清 中 の 特 異 的IgM抗 体 の測 定 が 診 断 的 価 値 が 高 い と され て き た.今 診断に 回,診 断 用 キ ッ ト(SeroELISA(R)お よ びIPAzyme(R))の お け る有 用 性 を 検 討 す る た め に 肺 炎 な ど種 々 の 疾 患 患 者 よ りク ラ ミジ ア 特 異 的IgM抗 児 肺 炎 患 者223例 中66例(29.6%),成 体 を 測 定 した.小 人 の 封 入 体 結 膜 炎 患 者31例 中8例(25.8%),ク 入 体 結 膜 炎 新 生 児 の 両 親16例 中5例(31.3%)な 炎 患 児 群 に お け る抗 ク ラ ミジ アIgM抗 ど よ りSeroELISA(R)でIgM抗 ラ ミジ ア に よ る 封 体 が 検 出 され た 。 小 児 肺 体 の 吸 光 度 は 他 の 群 よ り高 い 分 布 が 認 め ら れ た.SeroELISA(R) に よ る 抗 ク ラ ミ ジ ア 抗 体 の 測 定 は 診 断 に 有 用 で あ る もの と判 断 さ れ た. 緒 て は,組 織 培 養 法 に よ る分 離 同定 が 最 も信 頼 度 の 言 高 い 方 法 と され て きた が,技 術 的 な 問 題 か ら これ ク ラ ミ ジ ア 属 は 現 在3種(Chlamydiatrachomatis,Chlamydiapsittac4Chlamydia らの 方 法 を実 施 で き る 施 設 は 国 内 で も限 られ て い pneumoniae)に る た め 現 在 多 くの 簡 便 な 診 断 用 キ ッ トが 市 販,実 分 類 さ れ て い る が そ れ ぞ れ ヒ トに 種 々 の 疾 病 を 発 症 す る こ と が 知 ら れ て い る1).C 用 化 さ れ て い る.抗 tmhomatisは microimmunoHuorescence(MIF)法 成 人 に お い て 性 感 染 症(STD)の 重 体 検 査 に 関 して も が感 度 と特 要 な 病 原 体 と し て 知 ら れ る と共 に 小 児 科 領 域 で は 異 性 の 点 で優 れ て い る と され て きた が,同 様 の 問 新 生 児 の 封 入 体 結 膜 炎 や 乳 児,新 題 点 が 指 摘 され て い る5).ク ラ ミジ ア 感 染 症 は 一 生 児 の肺 炎 の 病 原 体 と し て 重 要 で あ る1)2).Cpsittaciも 古 くか ら 年 難 な 場 合 が少 な くな い.ま た 結 膜 炎 や 尿 道 炎 な ど 気 道 感 染 に お け る 病 原 性 も注 の 局 所 の感 染 に お け る抗 体 産 生 の 問 題 に 関 し て も オ ー ム 病 の 起 因 因 子 と し て 知 ら れ て い る が,近 Cpneumoniaeの 般 に そ の慢 性,遷 延 の 経 過 か ら血 清 学 的 診 断 が 困 目 さ れ て い る3)4).ク ラ ミ ジ ア 感 染 症 の 診 断 は 抗 原 論 議 が 多 い6).ク ラ ミジ ア 属 の3種 お よ び 抗 体 検 索 に 大 別 さ れ る.抗 は 血 清 中 の特 異 的IgM抗 別 刷 請求 先:(〒060)札 原 の検 出 に 関 し 幌市 中 央 区 南1条 西16丁 目 札 幌 医科 大 学 小児 科 学 教室 沼崎 啓 に よ る肺 炎 で 体 の検 出 が診 断的価 値 が 高 い こ と が 知 ら れ て い る5)6).今 回 筆 者 ら は enzymeimmunoassay(EIA)な 感 染 症 学 雑誌 どに よ る ク ラ ミ 第66巻 第1号 抗 ク ラ ミジ アIgM抗 ジ ア に 対 す るIgM抗 体 測 定 法 の 診 断 的 意 義 につ 体 の測 定 Fig. 1 71 SeroELISA (R) chlamydial い て 検 討 し た の で 報 告 す る. titration curve for serum IgM antibodies. 対 象 及 び方 法 臨 床 材 料:以 し,ク 下 の 症 例 よ り急 性 期 の 血 清 を 採 取 ラ ミ ジ ア に 特 異 的IgM抗 な っ た.0歳 体 の測定 を お こ か ら15歳 ま で の 小 児 肺 炎 患 児223例, 成 人 の 封 入 体 結 膜 炎 患 者31例,ク ラ ミジ ア に よ る 新 生 児 封 入 体 結 膜 炎 患 児 の 両 親16例,過 去 に トラ コ ー マ の 既 往 が 疑 わ れ た70歳 以 上 の 高 齢 者17例 り材 料 を 採 取 し た.ま 熟 児,呼 た 生 後1ヵ 吸 障 害 な ど の 患 児88例 よ 月以 内の極小未 よ り も検 体 を 採 取 し た. ク ラ ミ ジ ア 特 異 的IgM抗 体 の 測 定:C.tra- chomatisに 対 す るIgM抗 chomatisL、 株 のelementarybodies(EB)を と し たMIFお よ っ て お こ な っ た7)∼9).C. 対 す るIgM抗 を 接 種 し たHeLa229細 法(IF)に 抗 原 よ びenzyme-1inkedHuorescence assay(ELFA)に psittaciに 体 の 測 定 はCtra- 体 の 測 定 はIZAWA株 胞 を用 い た 蛍 光 抗 体 間 接 よ っ た.Cpneumoniaeに 抗 体 の 測 定 はTWAR株TW-183を MIF法 に よ っ た.血 対 す るIgM に お け るO.D.値 抗 原 と した ト ロ ー ル お よ び 陰 性 コ ン ト ロ ー ル の0.D.値 清 は す べ てIgM-rheumatoid factor(lgM-RF)に 均 は そ れ ぞ れ1.161お よ る非 特 異 反 応 の 出現 を 防 ぐ た め にRFAbsorbent(BehringwerkeAG)に る 前 処 理 を 加 え,MIFお よ よ びIFで 16倍 以 上 を 陽 性 と し た.さ は終末 抗体価 ら にEIAに よ るIgM よび 間 接 免 疫 ペ ロ キ シ ダ ー ゼ 法 に よ るIgM抗 体測 定 よ び0.024で 数 値 か ら 算 出 し たcutoff値 0.280で あ る.次 (R)で の0 .D.値(血 つ い てSeroELISA 清 希 釈 倍 数1:128)とIP- お け る 終 末 抗 体 価 を 比 較 し た(Fig. 2).相 関 係 数 は0.892で 体 の 測 定 を 行 っ た375検 あ っ た.さ ら に 今 回IgM抗 体 に つ い てSeroELISA(R) とIPAzyme(R)の の 間 に は 高 い 一 致 率 が 認 め ら れ た. Ctmchomatisの 分 離:2歳 未 満 の 肺 炎 患 児87 胞 に よ る組 織 培 養 法 で 鼻 咽 腔 ス ワ ブ よ りCtrachomatisの 分 離 も試 み た10). SeroELISA(R)に 体 の 測 定 結 果 をTable2に 炎 患 児 群,成 のEBお 対 し て1:2か 体 価 を 有 す る5検 平成4年1月20日 Fig.3に よ びreticulate ら1:32ま で の 体 につ い て各 希釈 濃 度 体 測 定:ク ラ ミジ 陽 性 率 で あ っ た.次 示 す.小 較 し て 高 い0.D.値 炎 患 者223例 Azyme(R)の 示 す.小 児 の 肺 人 の封 入 体 結膜 炎 患 者群 な どで は に お け る 陽 性 例 の1:128で お け る 諸 条 件 の 検 討:MIF法 でCtrachomatisL2株 bodies(RB)に 績 よ るIgM抗 法 ア 感 染 との 関 連 が 疑 わ れ た 各 種 の 疾 患 に つ い て IgM抗 25∼30%の 成 IgM抗 成 績 を 比 較 し た(Table1).両 SeroELISA(R)に 例 に つ い て はHeLa229細 れ らの 上 のIgM抗 SavyonDiagnosticsLtd.)の 討 した. の平 は 図 に 示 す よ うに 用 キ ッ ト(IPAzyme(R)ChlamydiaTRUE-IgM(R), 有 用 性 につ い て も検 性 コン あ り,こ にMIFで1:8以 体 価 を 保 有 す る 血 清 検 体32に Azyme(R)に 抗 体 測 定 用 キ ッ ト(SeroELISA(R)Chlamydia TRUE-IgM(R),SavyonDiagnosticsLtd.)お を 測 定 し た(Fig.1).陽 に これ ら の 患 者 群 の0.D.値 の 分布 を 児 の 肺 炎 患 者 群 で は 他 の 群 と比 の 分 布 が 認 め ら れ た.小 に お お げ るSeroELISA(R)お 陽 性 例 の 年 齢 分 布 をTable3に 児肺 よ びIP示 す. 沼崎 72 Fig. 2 Scatter obtained Table 1 diagram of chlamydial by SeroELISA (R) Comparison of Fig. 3 IgM titers and IPAzyme SeroELISA (R) SeroELISA (R) titers from different popula- tions. S. with 啓 他 IP- Azyme (R) Table 3 Seropositivity rate of IgM antibodies at various ages in Japanese infants and children with pneumonia Table 2 bodies Seropositivity from of chlamydial different 乳 児 期 以 降 で もIgM抗 SeroELISA(R)と の 比 較:小 anti- 体 陽 性 例 が 散 見 さ れ た. 他 の 抗体 測 定 法 お よび 分離 と 児 肺 炎223例 成 績 をC.tnchomatisに に お け るSeroELISA(R)の 対 す るIgM抗 成 績 と比 較 し た(Tabl4).同 びC.pneumon2aeに IgM populations 体 の測 定 様 にCpsittaciお 対 す るIgM抗 よ 体 測 定 の結 果 と も 比 較 し た(Table5,Table6).2歳 炎 患 児87例 未満 の肺 に お け る 陽 性 例 はCtrachoma添 感 染症 学 雑 誌 第66巻 に 第1号 抗 ク ラ ミジ アIgM抗 Table 4 Comparison trachomatis of SeroELISA (R) MIF and ELFA from 223 infants with on serum and children C. samples with pneumonia 体の測定 73 対 して の みIgM抗 体 が 陽 性 だ っ た.次 に これ ら87 例 に お げ るSeroELISA(R)の chomatisの 成 績 をC.tra- 分 離 の結 果 と比 較 した(Table7).2 歳 未 満 で はCtrachomatisの 分 離 の 結 果 と比 較 して も良 好 な成 績 が 得 られ た. 考 察 ク ラ ミジ ァ属 は偏 性 細 胞 内 寄 生 性 の発 育 サ イ ク ル を 持 ち,ヒ トに お い てSTDや どの疾 病 を 引 き起 こす.こ 呼 吸器 感 染 症 な の うちCtrachomatis は新 生 児,乳 児 の 肺 炎 を 発 症 し,Cpsittaciは 鳥類 と の接 触 歴 を 有 す る もの に非 定 型 肺 炎 で あ る オ ウ Table 5 psittaci Comparison of IF on serum and children with SeroELISA (R) samples from with C. 223 infants pneumonia ム病 を発 症 す る1).従来TWARと Cpneumoniaeも 総 称 さ れ て きた 肺 炎 な どの呼 吸器 感 染症 の病 原 体 とな る こ とが 明 らか と な っ た3)4).ま た ク ラ ミ ジ ア感 染 症 の 診 断 に は 抗 原,抗 体 の検 索 を 中 心 に 多 くの方 法 の 存 在 が 報 告 され て い るが,ク ア 肺 炎 に お い て は 特 異 的IgM抗 ラ ミジ 体 の検 出が診 断 的 価 値 が 高 い.肺 炎 以 外 の ク ラ ミジ ア感 染 症 は特 徴 的 な臨 床 症 状 お よ び検 査 所 見 が 乏 し く,慢 性, 遷 延 性 の 経 過 を た ど る こ と もあ る た め 信 頼 度 の 高 い迅 速 診 断 法 の 開 発 が 課 題 と され て きた. ク ラ ミジ ア感 染 症 の診 断 に お い て感 度 と特 異 性 Table 6 Comparison of SeroELISA (R) with pneumoniae MIF on serum samples infants and children with pneumonia from C. 223 の 点 で 他 の 方 法 に 優 る と され て き たMIFや 組織 培 養 に よ る分 離 は 施 設 問 で の 手 技 の相 違 が 指 摘 さ れ て お り5),一 般 の 施 設 に お い て 実 施 さ れ る ま で に は な お 多 くの 問題 点 の解 決 が 必 要 で あ ろ う.ク ラ ミジ ア 属 のEBのmajoroutermembraneprotein(MOMP)のlipopolysaccharides(LPS) は 単 一 の もの で は な い が,属 特 異 的 抗 原 で あ る こ とが 知 られ て い る5). こ のLPS抗 原 はELISAの 抗 原 と して も応 用 が 可 能 で あ る.今 回 検 討 を加 えたSeroELISA(R)は このLPSを Table 7 Comparison trachomatis and with SeroELISA (R) between detection isolation of in 87 infants IgM of antibodies with pneumonia C. 含 む 抗 原 を 使 用 して お り,3種 ク ラ ミジ ア に 対 す るIgM抗 の と判 断 され た.こ 体 の測 定 が可 能 な も のSeroELISA(R)で 体 測 定 法 は他 のMIF,ELFA,IFな 類の のIgM抗 ど に よ る個 々 の ク ラ ミジ ア に 対 す る抗 体 測 定 法 と比 較 して も十 分 な 感 度 を持 つ も の と判 断 され た.ま た2歳 未 満 の 乳 児,新 生 児 肺 炎 の 診 断 に お い て はCtra- chomatisの 感 染 が 臨床 的 に重 要 で あ る が1)2),Ser- oELISA(R)で 平 成4年1月20日 のIgM抗 体 の測 定 は組 織 培 養 に よ 沼崎 74 る 分 離 と比 較 して も十 分 な 診 断 的 価 値 を 持 つ もの と判 断 され た.ELISA法 は 客 観 性 と感 度 に お い て 成 績 の 差 異 に 関 し て は,判 定 の 際 の 客 観 性 の 差 異 な ど が 原 因 と推 定 さ れ た.SeroELISA(R)に よ るIgM抗 稿 を終 え るに あた り診 断用 キ ッ トを提 供 して い ただ い た 明 治 乳業 株 式 会社 お よび 本研 究 に ご協 力 いた だ いた 大 給 臨 床検 査 所 優iれ,手 技 も比 較 的 容 易 で あ る.SeroELISA(R)と IPAzyme(R)の 啓他 体 の測 定 で は 個 々の ク 研 究会 にお い て発 表 した. 文 1) 沼 崎 ラ ミジ アを 鑑 別 で き な い点 は 今 後 の課 題 で あ る. 今 回 の 筆 者 らの検 索 にお い て も明 ら か な よ うに新 生 児,乳 児 に お い て はCtrachomatisに よるもの が 大 部 分 を 占 め る こ と な ど か ら,小 児 の 年 齢 に よ っ て は あ る 程 度 の 鑑 別 は 可 能 な も の と思 わ れ る.Cpneumoniaeに 対 す る高 い 抗 体 保 有 率 が 本 邦 の施 設 か ら も報 告 さ れ て い るが11)12),小児 の 肺 炎 な どの 疾 患 に お け る病 原 的 役 割 に関 して は 今 後 さ ら に検 討 が 必 要 で あ ろ う.ク ラ ミジ ア に 対 す る IgM抗 体 の上昇 は肺 炎 以外 の全 身性 の感染 にお い て も認 め られ る が,結 膜 炎 な どの 局 所 の感 染 で はIgM抗 体 の 上 昇 を 認 め な い もの と され て き た6).IgM抗 体 の み な ら ず,眼 感染症 におけ る IgG,IgA抗 体 測 定 の 意義 に 関 して も議 論 が 多 い13).小児 に お い て肺 炎 以 外 の疾 患 でIgM抗 体の 上 昇 を 認 め る頻 度 は抗 体 の 上 昇 を 認 め た もの の な か の0∼1%と 報 告 され て い る.ク ラ ミジ ア感 染 症 以 外 の 対 照 群 に お い て は 通 常 特 異 的IgM抗 体 が検 出 さ れ る こ とは少 な い9). 今 回 の検 索 に お い て 小 児 肺 炎 以外 の 疾 患 群 に お い て もIgM抗 体 の 上 昇 は 認 め た もの のO.D.値 を め や す と した 抗 体 の 分 布 は 肺 炎 群 よ り も低 値 で あ った.成 人 の 封 入 体 結 膜 炎 患 者 群 にお け るIgM 抗 体 の 上 昇 に 関 して は結 膜 炎 以 外 に 全 身 的 な感 染 が存 在 す る可 能 性 も あ り,こ れ らに 関 す る検 索 が 必 要 と思 わ れ る.新 生 児 の 封 入 体 結 膜 炎 の 両 親 の 群 で も同 様 にIgM抗 体 の上 昇 が 認 め られ た が,こ れ らの 診 断 的 意 義 に 関 して も同 様 の検 討 が 必 要 で あ ろ う.周 産 期 感 染 の ス ク リー ニ ン グ な ど に関 し て は抗 原 検 索 に 加 え,抗 体 測 定 の 応 用 も可 能 な場 合 が有 り得 る こ とが 示 唆 され た.小 児 肺 炎 な どク ラ ミジ ア感 染 症 に お け るIgM抗 つ い て報 告 し た が,ク 体 測 定 の 意i義に ラ ミジ ア属 間 の 交 差 反 応 な ど に 関 して は今 後 更 に 検 討 が 必 要 な もの と思 わ れ る. 三上 通 英 技 師 に深 謝 い た します.ま た本 研 究 の 要 旨は第65回 日本 感 染 症学 会 総 会 お よ び第9回 ク ラ ミジ ァ 啓, 千 葉 峻 三: 炎, 新 小 児 医 学 大 系, 歩, p.131-142,, 献 感 染 症. 4. 年 刊 版, 91A, 中 山 書 店, ク ラ ミジ ア 肺 小 児医 学 の 進 東 京, 1991. 2) Numazaki, K., Wainberg, M.A. & McDonald, J.: Clamydia trachomatis infectin in infants. C. M.A.J., 140 : 615-622, 1989. 3) Grayston, J.T.: Chlamydia pneumoniae, strain TWAR. Chest, 95 : 664-669, 1989. 4) Grayston, J.T., Campbell, L.A., Kuo, C.-C., Mordhorst, C.H., Saikku, P., Thom, D.H. & Wang, S.-P.: A new respiratory tract pathogen : Chlamydia pneumoniae strain TWAR. J. Infect. Dis., 161 : 618-625, 1990. 5) Barnes, R.C.: Laboratory diagnosis of human chlamydial infections. Clin. Microbiol. Rev., 2: 119-136, 1989. 6) Schacter, J., Grossman, M. & Azimi, P.H.: Serology of Chalmydia trachomatis in infants. J. Infect. Dis., 146 : 530-535, 1982. 7) Numazaki, K., Chiba, S., Nakata, S., Yamanaka, T. & Nakao, T.: Prevalence of antibodies to Chlamydia trachomatis in Japanese persons determined by microimmunofluorescence using reticulate bodies as single antigen. Pediatr. Infect. Dis., 3 : 105-109, 1984. 8) Numazaki, K., Chiba, S., Moroboshi, T., Kudoh, T., Yamanaka, T. & Nakao, T.: Comparison of enzyme linked immunosorbent assay and enzyme linked fluorescence immunoassay for detection of antibodies against Chlamydia trachomatis. J. Clin. Pathol., 38: 345 50, 1985. -3 9) Numazaki, K., Chiba, S., Yamanaka, T., Moroboshi, T., Aoki, K. & Nakao, T.: Detection of IgM antibodies against Chlamydia trachomatis by enzyme linked fluorescence immunoassay. J. Clin. Pathol., 38 : 733-739, 1985. 10) Numazaki, K., Chiba, S., Yamanaka, T., Umetsu, M. & Nakao, T.: Pneumonia due to Chlamydia trachomatis in Japanese infants. Tohoku J. Exp. Med., 143: 413-420, 1984. 11) 岸 本 寿 男: Chlamydiapneumoniae 感 染 症 に 関 す る研 究 (第2報) (TWAR株) 一 健 常者 及 び急 性 呼 吸 器 感 染 症 患 者 に お け る血 清 疫 学 的 検 討 一. 染 症 誌, 64: 986-993, 感 1990. 感 染症 学 雑 誌 第66巻 第1号 抗 ク ラ ミジ アIgM抗 12) 尾 内 一 信, 金 本 康 夫, Chlamydia pneumoniaeと 牛 尾 光 宏: 年 齢 別 抗 体 保 有 率 の 検 討. 日本 に お け る 75 体 の測 定 13) 銭 蘭, 青 木 功 喜: IPAZYMETMに そ の 他 の ク ラ ミジ ア の ジ ア 眼 感 染 症 の 血 清 診 断 の 検 討. 感 染 症 誌, 1317-1322, 65: 19-25, よるクラ ミ 感 染 症 誌, 64: 1990. 1991, Evaluation of Chlamydial IgM Antibodies for Clinical Diagnosis Kei NUMAZAKI & Shunzo CHIBA Department of Pediatrics, Sapporo Medical College Yuuichi NIIDA & Masao UMETSU Hokkaido Children's Hospital & Medical Center Koki AOKI Aoki Eye Clinic, Sapporo Chlamydia trachomatis (C. trachomatis), C.psittaci, and C.pneumoniae are now well established as pathogens of respiratory infections including pneumonia. Serum samples from 223 infants and children with pneumonia, 31 patients with adult inclusion conjunctivitis, 16 parents of babies with neonatal inclusion conjunctivitis and others were tested for IgM antibodies to Chlamydiae. Diagnostic kits for chlamydial IgM antibodies (SeroELISA(R)and IPAzyme(R))have been also evaluated for their diagnostic value. It was found that detection of specific IgM antibodies with SeroELISA has a diagnostic value in chlamydial pneumonias. 平 成4年1月20日
© Copyright 2024 ExpyDoc
![本文PDF [2149K] - J-Stage](http://s3.expydoc.com/store/data/007154699_1-5800bb1b73dd7f357a2546a8701498aa-250x500.png)
