VOL.
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
939
CephalexinとMecillinamの
協 力作 川 に 関 す る研 究
大 槻 雅 子 ・奥
事 ・西 野 武 志 ・谷 野 輝 雄
京 都 鎚 科 大学 微 生 物学 教室
五
島
瑳
智
子
東 邦大 学 医 学 部 微 生 物学 教 室
(昭 和56年12月3日
Escherichia
Proteus
coil,
spp.に
Klebsiella
pneumoniae,
受付)
Enterobacler
対 し てCephalexinとMccillinamの
こ と を Chequerboard
titration
method,
spp.,
Serralia
併 用 がin vitroに
Fixed
combination
marcescens,
お い て協 力作 用 を示 す
に よ り確 認 し,in vivoに
method
おけ る 効 果お よび そ の 作用 機 作 に つ い て も検 討 を加 えた 。
増 殖曲 線 に 及 ぼす 影 響 を 検 討 した結 果。Cephalexin,Mecillinam単
独で は ほ とん ど変 化 を示 さ
ない 濃 度 を併 用 した場 合 に 濁 度 の 減 少や 殺 菌 作用 の 発 現 を 認 め,両
薬剤 間 に 協 力 作用 が あ る こ とが
わか った。 マ ウス を 用 いた 実験 的 感 染 症 に 対 す る 治療 効 果の 検 討 で も,両 薬 剤 を 併 用 した 場 合,協
力作 用が み られ,治 療 効 果が 優 れ て い た 。 ま た,そ
linamの 濃 度 比 はin vitroで
相 差顕 微 鏡
の と きの 血 中に おけ るCephalexi賛
走 査型 電 子顕 微 鏡 に よ り観察 した 結 果,Escherichia
長 化 が,Mecillinam作
とMccil-
協 力 作 用 が 認 め られ る割 合 と一 致 してい た 。 併 用 時 の 形態 変化 を 位
coliで はCephalexin作
用 で卵 形 細 胞 が 形 成 され,併 用時 に は 菌 体 はや や 伸 長 化 し,中
用で 伸
央 部が 膨 化
した ス ピン ドル細 胞 の 形成 を認 め た 。 この 膨 化 した 部 分 の 内 部 構造 を透 過 型 電 子 顕 微 鏡 で観 察 した
ところ菌 体 内や 細 胞 壁部 分 に 著 明な 変 化 は 認 め られ なか った が,膨
容 物が 流 出 して い る像 を 捉 え る こ とが で きた 。stabilizerを
化 した 細 胞 壁 の 一 部か ら細 胞 内
用 い ス フ ェ ロプ ラス ト形 成 能に つ い て
検討 した結 果,各 々 単 独で は ス フ ェ ロ プ ラス ト形 成 が 起 こ らな い 場合 で もそ れ らの 併 用に よ り,ス
フ ェ ロプ ラス トが 形 成 され る こ とを 確 認 した 。Cephalexinは
と3,Mecillinamは2に
ペ ニ シ リン結 合 蛋 白 質(PBPs)のla
親 和 性 を 示 し,併 用 時 に は これ らのPBPsへ
Cephalexin,Mecillinamそ
相 加的 な 親 和 性 を示 し た。
れ ぞれ 単 独 あ る い は併 用 に よ りあ らか じめ作 用を 受 け たEscherichia
coliの リン酸 緩 衝 液 中 で の溶 菌 活 性 は 両 薬 剤 で処 理 され る こ とに よ り単 独 処理 菌 に比 べ非 常 に 高 ま
って いた 。
最 近,penicillinの
作 用 機 作 研 究 の 一 環 と し てpeni-
形 成 す る2)。 一 方,MecillinamはPBP-2に
cillinの 標 的 酵 素 で あ る ペ ニ シ リ ン結 合 蛋 白 質(PBPs)
的 な 親 和 性 を 有 し て お り,Mecillinamの
と細 菌 細 胞 の 形 態 変 化 と の 関 連 性 が 注 目 さ れ て き て い
細 胞 は 卵 形 細 胞 を 形 成 す る3,4)。
る。1975年SPRATT1)はEscherichia coliの
上 に存 在 す る β-lactam抗
生 物 質 に 親 和 性 を 示 す6種
蛋 白 質 に つ い て 報 告 し,こ
PBP-3が
そ れ ぞ れ 細 胞 の 伸 長 ,形
との 関 係 を 明 らか に し た 。PBP-1は
分 離 さ れ た が,こ
る と細 胞 は 溶 菌 し,PBP-2が
形 成,PBP-3が
の
態 決 定,分
裂に対す
細胞の形態変化
さ ら にPBP-1aと
形 態,さ
の よ うにCephalexinとMecillinam
coliに
対 して 異 な っ た形 態 変 化 を示 す
阻 害 され る と卵形 細 胞 の
阻 害 され る と細胞 の伸 長 化 が 起 こ る。
の親 和 性
作 用 を受 けた 細 胞 は 伸 長 化菌 を
薬 剤 を 併 用 した 場 合 に起 こ る細 胞
らに併 用 時 の抗 菌 力 の 変 化 につ い て検 討 を 行 な
っ た 。 ま た,そ
の 作 用 機 作 に つ い て も若 干 の 検 討 を 加 え
た。
れ ら の蛋 白 質 が 阻害 され
CephalexinはEscherichia coliのPBP-3へ
が強 く,Cephalexinの
わ れ わ れ は,こ
がEscherichia
こ と に 興 味 を も ち,両
の 中 でPBP-1,PBP-2,
る必 須 蛋 白 質 で あ る と推 論 し,PBPsと
PBP-1bsに
細胞質膜
対 して 特 異
作 用 を受 け た
I.
1.
実 験 材 料 お よび 実 験 方 法
使用菌株
実験には Staphylococcus
coJi19株,
bacter
Klebsiella
aerogenes
5株,
aureus
pneumoniae
Enterobacter
1株
Escherichia
13株,Entero-
cloacae
6株
CHEMOTHERAPY
940
Serratia
Proteus
12株,
mirabilis
Proteus
2.
Proteus
11株,
morganis
luteus
ATCC 9341,
製 し,こ
Mccillinam
(MPC),
め,こ
Pivmecil-
のいずれ も力
Benzylpenicillin(PCG)
([14C]PCG)は
The
Radiochemical
Center
ham,
の もの を 使 用 し た,,
(Amers-
infusion
ッス イ)を
methodに
ず,hcart
ti-
間培養後の
固 定 した 場 合 の 最 小 発 育 阻 止 濃 度
求 め た 。 ま た,CEXとMPC併
用 の 検 討 に はheart
い,Biophotometer
な い,対
infusion
用時の殺菌作
broth(ニッ
BIO-LOG
ス イ)を
II (JASCO)で
用
数 期 に 薬 剤 を 添 加 し た 。 以 後,経
培養を行
時的に濁度 と
生 菌 数 の 変 化 を測 定 した 。
4.
mucin
は Klebsiella
pneumoniae
coli
ST-0198
を1群10匹
KC-1
あ るい
率 を 求 め, LITCHFIELD-WILCOXON
後 の生 存
法5)に よ りED50値
を
算 出 した 。
5.
与 し,経 時的 に1群4匹
るい はPMPCを
の マ ウスか らエ ー テ ル麻 酔 下 で
の 測 定 に は Micrococcus
Antibiotic
MPCの
6.
medium
luteus
ATCC 9341 を検定菌
8 (Difco)
測定 に は Escherichia
す る 方 法7)に
を 用 い る 方 法6),
を 検定菌 と
coli NIHJ
Ethylenediaminetetraacetic
acid
存 在 下での抗
MgCl2を
coli
ST-0198
brothを
を106cells/ml含
む
heart
用 い る液 体 希 釈 法に よ り37℃18時
MICを
求 め,同 時 に ethylenediaminetetraacetic
(EDTA)存
含 ん だheart
在 下 で のMICも
求めた。
位 相 差 顕 微 鏡 に よ る観 察
infusion
間培養後の
acid
infusion
こ れ ら を 含 ま な い 同 培 地(shocked)
剤 の 作 用 を 受 け た 菌 の4時
間 目の ス フ ェ ロ
フ ラ ス ト形 成 能 に つ い て 検 討 し た 。
ペ ニ シ リ ン結 合 蛋 白 質 に 対 す る 親 和 性
方 法Lに
従 い,膜
画 分 を 調 製 し.[14C]
の コ ン ベ テ ィシ ョ ン に よ り実 験 し た 。 ま た,薬
剤 の 作 用 を 受 け 形 態 変 化 を 起 こ し て い る 菌 の 膜 画 分 につ
親 和性を求め
た。
11.
緩 衝 液 中 で の 溶 菌 活性 に つ いて
対 数 期 の 菌 を 薬 剤 で25分
間 処 理 を 行 な い50mMリ
II.
1.
ン
に 懸 濁 させ た 菌 液 の
の 濁 度 の 減 少 を 測 定 した 。
Chequerboard
実
験
結
titration
果
method
に よ る 協力作
用 の検 討
種 々 の細 菌 に 対 す るCEXとMPCの
を 検 討 し たの がTable1で
併 用効 果の有無
あ る。106cell/mlを1白
金
耳 接 種 し た 成 績 で,表 中の 矢 印は 協 力作 用 を 示 した
fractional
配 合 比.*印
inhibitory
21株 中16株
に お い てmin.FIC
残 り5株 のmin.FIC
は そ の 場 合 に,minimum
concentration
index)12)を 示 すCEXとMPCの
外 膜 の 透 過 障 害 につ い て検 討 す る た め に, Escheri-
7.
sucrose,0.2%
broth(stabilized)と
CEXとMPCの
準 し薄 層 デ ィス ク法 に よ り行 な っ た 。
菌力
chia
用 い て 観 察 した っ
ス フュ ロ ブ ラ ス ト形 成 能 に つ い て
を 用 い て,薬
エ ン酸
遇 型 電 子 顕 微 鏡AKA-
20%
経 口投
腋 窩 動 静 脈 の 切 断に よ り採 血 し,血 清 を分 離 した 。CEX
と し,
色 所 を 行 な っ た 後,透
550nmで
雄 性 マ ウ スにCEXあ
ポ キ シ樹 脂 に
4801A(LKB,Sweden)を
酸 緩 衝 液(pH6.0,7.0,8.0)中
血 中濃 度
ddY系
過 型電 子顕微鏡の
よ り,エ
い て も 同 様 の 検 討 を 行 な い[14C]PCGの
のddY
よび 両 者 を経 口投 与 し,7日
方 法10)に
9.
PCGと
系 雄 性 マ ウスの 腹 腔 内 に接 種 した 。菌 接 種2時 間 後に,
CEX,PMPCお
鉛 で2rR染
B.G.SPRATTの
(Orthana-Kcmisk-Fabrik-A/
S)と 等 量 混 合 した Escherichia
水 後LEFTの
査型
使 用 して
用 い 切 片 を 作 製 した 。 こ か を 酢 酸 ウ ラ ニ ー ル,ク
10.
実 験 的 感 染症 に 対 す る治療 効 果
6% gastric
査 型 電 子 顕 微 鏡 の 場 合,
ー ボ ン と 金 で 蒸 着 し.走
寛 子顕 微 鏡JSM-35(JEOL,LTD.Japan)を
SHIS-500(Japan)を
菌 の 発 育 阻 止 効 果 で 判 定 した 。 次 い でCEXとMPCの
(MIC)を
行 な い,カ
包 押 し.Uhramicrotome
用 い たchequerboard
よ り行 な い,37℃18時
割 合 を8:1,32:1と
ル 系 列 で 脱 水 し た 。 そ の 後,走
場 合,脱
協 力 作 用 の 検 討 に は,ま
agar(ニ
tration
時的 に 菌 体 を 集
法8),て 固 定 後 エ タ ノー
菌 体 の 表 面 構 造 を 観 察 した 。 一 方,透
協 力作 用 の 検 討
CEXとMPCの
れ をKLLLENBEROER方
臨 界 点 乾 燥9)を
価 の 明 らか な 標 品 な 川」い た 。 [14C] benzylpcnicillin
3.
電 子顕 微 鏡 に よ る 観 察
対 数 増 殖 期 途 上 で 薬 剤 を 添 加 し,経
(CEX),
England)
で 観 察 した。
8,
を使 用 した。
Cephalexin
れ に 菌 液 を塗 抹 した カ パ ー ガ ラス をか ぶせ パラ
フ ィン で 封 じた 。 こ れ を 倒 立 位 相 差 顕 微 鏡(NIKON,
Japaの
Escherichia
使用抗生物質
linam (PMPC),
1982
ス ラ イ ドガ ラ ス 上 で 薬 剤 を 含 有 した フ ィ ル ム 寒 天 を 作
11株,
vulgaris
1株 を 使 用 した 。 また,血 中 濃 度の 測
rettgeri
定 に は Micrococcus
coli NIHJ
Proteus
11株,
marcescens
AUG.
index (min. FIC
割 合 を示 して いる。
indexが05以
indexは0.53∼0.75で
株 す べ てに お い てCEXとMPCに
下
あ り,21
よ る協 力作 用を認め
た 。 そ し て,菌 株 に よ り協 力 作 用 を 示 すCEXとMPC
の 配 合比 が 異 な り,し か も同 一 菌 株 で 協 力作用 を示す配
合比 の範 囲が 広 い こ とが わ か った 。 中 で もCEXとMPC
VOL.
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
Table
1
Combination
Medium:heart
infusion
agar.
* Represents
the ratio of minimum
Horizontal
arrows
の 割 合 が8:1か
indicate
ら64:1の
the
effect
FIC
range
of CEX
index
of the
of CEX
付 近 に 協 力 作用 を示 す 株 が
MPC
配 合 比 を8:1,32:1と
固定 し
た場合 の種 々の細 菌 の 感 受 性
titration
れ た の でCEXとMPCの
on
to that
various
organisms
of MPC .
effect.
8:1,32:1の
2∼16倍
CEXとMPCの
Chequerboard
and
synergistic
多 く認 め られ た 。
2.
941
割 合 の と き に そ れ ぞ れ2∼32,あ
増 強 さ れ た 。FIC
認 め られ た の は108cclls/ml接
約50%,106cells/ml接
methodで
協 力 作用 が 認 め ら
配 合 比 を8:1,32:1と
固定
indexの
45%で
%で
あ り,相
種 て は8:1,32:1で
種 で は8:1で60%,32:1で
加 作 用 を 含 め る と い ず れ の 場 合 も約80
あ っ た 。CEX:MPC8:1を
例 に と る とE.coli,
して さ らに 多 く の 菌 株 で 協 力 作 用 が 認 め ら れ る か 否 か を
P.vulgaris,Enterobacter
検 討 した 。108cells/mlを
S.marcescens,P.mirabilis,P.morganiiで
で,106cells/mlを
接 種 した 場 合 の 成 績 がFig.1
接 種 し た 場 合 の 成 績 がFig2で
る。 い ず れ も上 段 はCEXとMPCの
場 合,下
段 は32:1の
moniae13株
あ
配 合 比 が8:1の
moniaeで
は108,106cells/ml接
3.
P.morgmii12株
E.coli
した もの で あ る 。MPCの
の 感 受 性 を累 積分 布 で 示
添 加 に よ りCEXの
は106cclls/ml,
は108
種 で ほ とん ど差は み
場 合 に もほ とん ど同 じ傾 向が み
られ た。
spp.11株Smarces-
cens11株,P.vulgaris11株P.mirabilis12株
の 合 計89株
spp.で
種 で 相 乗 効 果 を 示 す も の が 多 く,K.pneu-
ら れ な か っ た 。32:1の
場 合 でE.coli19株,K.pneu-
,Enterobacter
celle/ml接
る いは
値 か ら相 乗 作用 が
抗菌力が
mlの
併 用時 の溶 菌 お よび 殺 菌 作 用 の 検 討
ST-0198を
用 い て2.5×106,1.6×107cells/
菌 数 で薬 剤 を 作 用 させ た 場 合 の培 地 中 で の溶 菌 と
942
CHEMOTHERAPY
AUG.
1982
VOL.
Fig. 3
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
Combination
effect of CEX and
the viability
of E. coli ST-0198
殺菌効 果を検 討 した の がFig3,4で
量にお いて もMPC添
MFC
943
Fig. 5
on
Combination
effect of CEX
the viability
of K. pneumoniae
and MPC
KC-1
on
あ る。 い ず れ の 菌
加 時 に は 濁度 の減 少や 殺 菌 作 用 は
認め られ な い。CEX作
用 後 の 濁 度 は上 昇す るか 少 し増
殖 した後,一 定 の濁 度 を 保 って い た。 しか し,生 菌 数 の
変化で は徐 々に 減 少す るか 再 増殖 の傾 向が み られ た 。併
garis,P.mirabilisに
用時に は薬剤 作 用後 濁 度 と生 菌 数 の著 しい 減 少 が み ら
niaeと
れ,両 薬剤 間に 協 力作 用 を 認 め た。 図に は 示 して い な い
がE.coli
NIH
JC-2,E.coli
K-12に
併 用 す る薬 剤 の添 加時 期 と殺 菌 作用 との関 係 をE.coli
お い て も同 様 な
結果が 得 られ た 。Fig.5はK.pneumoniaeに
お い て もE.coli,K.pneumo-
同 様 の協 力作 用 を 認 め た。
ST-0198に
両薬を作
つ い て 検 討 した の がFig.6で
あ る。CEXと
MPCを
同時 に 作 用 させ た 場 合,CEX作
用 させ た場合 の 殺菌 作 用 を 検 討 した 成 績 で あ る 。CEX
MPCを
作 用 させ た 場 合,逆 にMPC作
あ るいはMPCが
CEXを
作 用 させ た 場 合 の生 菌 数 の 変 化 を示 し た が,い
静菌 的 に 作 用す る濃 度 を併 用 した 場 合,
用1時 間後 に
用1時
間 後に
生菌数 の減 少が み られ,両 剤 の 併用 に よ り協 力作 用 を 認
ず れ の 組 み 合 わ せに お いて も生 菌 数 の減 少が み られた 。
めた。 図に は示 して い な い がS.marceScens,P.vul-
K.pneumoniaeに
Fig.4
(A)
shows
106 cells/ml.
of
1.6•~101
Combination
the
(B)
effect
changes
shows
of
the
of
viable
changes
CEX
cells
of
and
MPC
on
when
the
drug
viable
cells
the
added
the
cells/ml.
(A)
viability
was
when
(B)
つ い て も検 討 した が 同様 な 成 績 を 得
drug
of
to
was
E.
coli
the
added
ST-0198
culture
to
of
the
2.5•~
culture
CHEMOTHERAPY
944
Fig. 6
Combination
the
effect
viability
of
CEX
and
MPC
on
AUG,
実 験に 用 いた100%マ
な わ ちE.coli
of E. coLi ST-0198
1982
ウス が 生 存 す る 最 低 の投 与量,す
ST-0198の
場 合CEX0.125mg/mouse
とPMPC0,0156mg/mouse,K.pneumoniae
KC-1
の 場 合,CEX0.5mg/mouseとPMPC0.125mg/mouse
とい う投 与 量 で 得 られ るCEXとMPCの
は そ れ ぞ れ6.7:1か
か ら10:1で
ら27.5:1で
平均7.3:1と
血中 濃度の比
平均17.4:1,38:1
いず れ の 場 合 もin vitroで
協 力 作 用 が 認 め られ る 範 囲 内に あ った 。 この よ う にin
vitroお よびin vivoでCEXとMPCの
併 用に よる協
力作 用 を認 め た の で 併 用時 の 形態 変化 お よび 抗菌作用機
作 に つ い て の 検 討 を 加 え た。
6.
Ethylenediaminetetraacelic
acid存
在 下での抗
菌力
EDTA存
ST-0198の
在 下での 抗 菌 力 の 変 動 に よ り薬剤 のE.coli
外膜 透 過 性 を検 討 し たの がTable3で
CIEX,MPCお
量 を添 加 して もEDTA添
た。
4.マ
MICの1∼2倍
ウス 実験 的 感 染症 に 対 す る 治療 効 果
マ ウス にE.coliST-0198あ
KC-1を
がTable2で
あ る 。E.coli
ST-0198の
示 した の
場 合,併
用時
は4:1で
あ る。 こ の 配合 比 は 単 独 治療 時 に お
け る 各 薬 剤 のED50値
独 治 療 時 のED50値
Chequerboard
の 比 か ら 決 定 し た 。 両 菌 株 と も単
に 比 ベ 併 用 時 のED50値
titration
値 を 用 い てfrtional
dexを
算 出 す る とB.coli
methodの
ED5。
は 小 さ く,
項 で示 した と同 様 に
effective
dose(FED)in-
た結 果 をFig.9に
とMPCO.05μg/mlの
薬剤 作 用1,2,4時
と もにCEX作
測 定 し,15,30,60,90,120,180分
与 時 の 血 中濃 度を
るいは
口投 与 時 の 血 中 濃 度 の 推 移 を 示 し て い る 。 い
後 に ピ ー クを 示 し,dose
が み ら れ た 。 こ れ ら の 血 中 濃 度 か ら,併
2
a)
用 で は 伸 長 化 菌,MPC作
用 では卵形細
KC-
response
用時の感染治療
Combination
effect
with E. coli ST-0198
The combination
電 子顕 微鏡 に よ る形 態 変 化 の 観 察
位 相 差 顕 微 鏡 に よる 形態 観 察 を さ らに 詳 しく検討する
た め に 電 子 顕 微 鏡 に よる観 察 を行 な った 。 走 査型 電子顕
目 のCEXとMPC
の 割 合 を 算 出 し た 。Fig.7とFig.8はCEXあ
Table
それ ぞれ 単 独 作 用 時 と併用時の
間 目の 変化 で あ るが,時 間の経過と
胞 を 観 察 す る こ とが で き,両 者 の併 用 では 菌 体の中央部
8.
血中濃度
ず れ の 場 合 も15分
形 態 変 化を観察し
示 した 。 す なわ ちCEX3.13μg/ml
1に お い て も認 め られ た 。
マ ゥ ス に お け るCEXとPMPC投
PMPC経
位 相 差顕 微 鏡 に よ る形 態 変 化 の 観察
た。 同 様な 変 化はE.coliK-12,K.pneumoniae
い う値 が 得 られ,CEXとPMPC
間 に 協 力 作 用 を認 めた 。
5.
7.
が 非 常 に 膨 化 して い るス ピ ン ドル細 胞 の形 成 を観察でき
ST-0198で0.55,K.pneu-
moniae KC-1で0.33と
無 添 加 時の
い とい う結 果 を 得 た 。
位 相 差顕 微 鏡 でE.coliST-0198の
の 配 合 比 はCEX:PMPCが8:1,K.pneumonae
KC-1で
加時 のMICは
程 度 しか 良 くな らず,E.coliST-0198
株に お い ては これ らの 薬 網は 透 過 障 害 をほ とん ど受けな
る い はK.pneumoniae
感 染 させ た 場 合 の 治 療 効 果 をED50で
あ る。
よび そ れ らの 併 用 にEDTAの1/2MIC
微 鏡 に よる 観 察 結 果がFig10で
ST-0198の
あ る。 正 常 なE.coli
走査 型 電 子 顕 微 鏡 像 で は 分 裂時 に 相 当す ると
思 わ れ る細 胞 もみ られ,表 面 構 造 は な め らか な形状を示
して いた 。CEX3.13μg/ml作
of CEX and PMPC
on
and K. pneumoniae
KC-1
ratio of CEX to PMPC.
experimental
in mice
用 で は 伸 長化 菌の 形 成
infections
VOL.
Fig. 7
30
NO.
Serum
oral dose
CHEMOTHERAPY
8
levels
of
to mice
cephalexin
after
945
Fig. 8
single
Serum
oral
levels
dose
ol
meorllmenm after single-
of pivmecillinam to muce
80
を,MPC0.05μg/ml作
E.coli
用 で は卵 形細 胞 の 形 成 を 観 察
できた。CEX3.13μg/mlとMPC0.05μg/mlの
ST-0198株
で の ス フ ェ ロ プ ラ ス ト形 成 能 に つ
い て 検 討 し た 結 果 がFig.12で
併用
culturcに
culture
時には 作用後1時 間 目で 菌 体 はや や 伸 長 化 し,中 央 部が
とosmotic
膨化 した 像が 観 察 され た 。2時 間 目で は 膨 化 部 位 か らの
る と,コ
スフェ ロプラス ト様 構 造 物 の突 出が 観 察 で き,4時
両 者 間 に ほ と ん ど 差 は 認 め ら れ な か っ た 。 し か し,併
間目
shocked
あ る 。stabilized
お け る生 菌 数 を比 較す
ン ト ロ ー ル お よ びCEX,MPC単
独 作 用時 に は
では溶菌 した と思 わ れ る 像 を 捉 え る こ とが で きた。 併
時 に は 両 者 間 に 大 き な 差 が1認 め られ,ス
用時の菌体 内部 の変 化 を観 察 した 透 過 型 電 子 顕 微 鏡 が
形 成 能 が 増 強 され て い る こ とが わ か っ た
Fig.11で あ る。 い ず れ もCEX3.13μg/mlとMPC
は 形 態 変 化 の 観 察 結 果 と 非 常 に よ く一 致 し て い た 。
0.05μg/mlの
併 用1時 間 目の パ ル ジ部 分 の強 拡 大 像 で
10.ペ
ある。両剤 の併 用 に よ りパ ル ジが 形成 され る(写 真A,
B)が,細
K-12の
た もの で あ る 。CEX作
壁が裂 け,細 胞 質 内容 物(写 真Cの 矢 印)が 流 出 し,溶
へ の 親 和 性 が,MPC作
菌,死 滅(写 真D)し
認 め ら れ た 。 ま た,併
て い く もの と考 え られ る。 この よ
で きた。
9.ス
Table
3
Effect
of EDTA
pan)を
on the
minimum
combination
MIC
(ƒÊg/ml)
*:
**:
MIC
Treated
LENGTH
(ƒÊmol/ml)
with
1/2
MIC
inhibitory
TLC
用 時 に はPBP2へ
の親 和性 が
用 時 に はPBP2,1a,3,1bs,
れ ら の 結 果 をDUAL-WA-
SCANNERS-90(Shimadzu,Ja-
用 い て 読 み と り,コ
concentrations
の 親 和 性 を 検討 し
用 時 に はPBP1a,3,1bs,4
4へ の 親 和 性 が 認 め られ,こ
VE
フ ェ ロプ ラス ト形 成 能
膜 画 分 を 用 い て[14C]PCG
と の コ ン ヘ テ ィ シ ョ ンに よ りPBPsへ
た。抗 菌作 用が さ らに進 行 して パ ル ジ部 分 の 一 部 の 細 胞
うに電 子顕微 鏡 観察 の 結 果か らも両 剤 の 協 力 作 用 が 確認
これ らの結 果
ニ シ リ ン結 合 蛋 白 質 に 対 す る 親 和 性
Fig.13はE.coli
胞質 内部 には 大 きな 変 化 は 認 め ら れ な か っ
用
フェロフラス ト
ン ト ロ ー ル を100%と
of CEX,
MPC
and the
して
CHEMOTHERAPY
946
Fig. 9 Phase
0
contrast
hour
micrographs
of E. coli ST-0198
1 hour
AUG.
exposed
2
to CEX,
hours
MPC
and
1982
the combination
4 hours
VOL.
Fig.10
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
Scanning
1 hour
electron
micrographs
of E. coli ST-0198
2 hours
947
exposed
to CEX,
MPC
4
and the coanbinanon
hours
948
CHEMOTHERAPY
AUG.
1982
VOL.30
Fig. 12
CHEMOTHERAPY
NO.8
Comparison
lized
and
of
the
osmotically
viable
shocked
counts
of
stabi-
949
Fig. 14
cultures
Affinity
proteins
of antibiotics
in E. coli
示 し た も の がFig14の
Fig. 13
Gel electrophoretic
illin
G-binding
proteins
patterns
of [14C]
in E. coli
penic-
K-12
常 細 胞 を 各 薬 剤 で1時
for penicillin
binding
K-12
左 で,右
はE.coli
間 処 理 を 行 な い,形
K-12の
正
態 変化 を 起 こ
し て い る 細 胞 か ら調 製 し た 膜 画 分 を 用 い,[14C]PCGの
親 和 性 を 検 討 し た 結 果 を 示 し て い る 。 い ず れ もCEXは
3.13μ9/ml,
MPCは0.1μg/mlで,併
3.13μ9/mlとMPC
値 はCEX,MPC単
用 時 はCEX
0.1μg/mlの
作用 で あ
独 作 用 時 の1/4MICに
度 で あ る 。 併 用 時 に はPBP2と3に
り,こ
の
相 当す る濃
おいてそれぞれ単
独 作用 に 近 い 親 和 性 を 示 す こ とを 認め た 。
11.リ
ン酸 緩 衝 液 中 で の 溶菌
薬 剤 処 現 に よ り誘 発 さ れ る 溶 菌 活 性 を 測 定 し た 結 果 を
Fig.15に
示 し た 。 薬 剤 を 含 ん だ 培 地 中 で37℃25分
理 を 行 な っ たE.coli
菌 はCEX,MPC単
ST-0198の
独 では ほ とん ど溶 菌 が 起 こ らない 濃
度 を 併 用 し た と き に5分
Fig. 15
Effect
of CEX,
MPC
and
the combination
on lysis
処
リン酸緩 衝 液 中で の 溶
後 よ り急 速 に 溶 菌 が 認 め られ,
of E. coli ST-0198
in phosphate
buffer
CHEMOTHERAPY
950
Fig.16
AUG.
た めに併用時
Elleet of CEX,
MPC and the combunntion
oo E. coli ST 0198 in phosphare buffer
の 殺 菌 作 用に つ い て の 検 討 を 行 な っ た。
Escherichia coli, Klebsilla
pneumoniae,
marcescens, Proteus vulgaris,
そ れそれ
1982
東 独は
Proteus
Serratia
mirabilisで
殺 菌 さ れ な い 濃 度 を 併 用 す る こ とに よ
り 宮 しい 秒 菌 作 用 の 増 強 が み ら れ た り ま た, Cephalexin
とMccillinamの作用時
間 を ず らせ そ の 殺 菌 効 果 を みた
がCEXとMPCの2剤
が 同 時 に 存 在 した時,い
場 合に も 協力作用
験 的 感染症
現われた
に 対してもこれ
する か と う力を調べた
pncumoniae感
ら の薬 剤 間 で 協 力 作 用 が 発現
。Escherichia coli,Klebsiella
染 ざせ たマウ
対 寸 る 冶 療 効果を
cillinanの
スの 敗 血 症 に よ ろ 死 亡に
の 此 率 のCcphalexinと
組 ん 合せ で 検 認 しED50を
ぞ れID55 0.33と
い うFED
た 。 そ し て,こ
ずれ の
。 そ こ で マ ゥ ス を 用 い た実
Pivme-
求 め た 結果,そ
mdexい
れ
を 得 る こ とが で き
の 実験 で 使 川 した 書
袋与量 て の ノ ウ ス体 内
膿 度 の 比 が ど のよ う なも の で あ る か を 血 中 濃 度 を 測 定す
30ウ ブ後 に は 約60%の
mMリ
溶 菌 活 性 を 小 し た,
ン酸 緩 衝 液 のpHを
な た も の で,い
50
変 化 させ た場 合の 溶 菌速 度 を
ず ね の 場 合 も ア ル カ リ側 で 溶 菌 活 性 が 増
加 し て い た 。 主 た,正
常 菌 で け酸 性 側 で 溶 菌 が ほ とん ど
認 め ら れ な か っ た が,CEXとMPCを
はCEX、MPC単
併 用 した場 合に
独 に 比 べ よ り活性 化 ざれ て い た 。
III.
現 在,抗
Fig.16は
作 川 の 軽 減,相
菌力 の 増 強,耐
性 菌
乗 作用 な ど を 期 待 し て,
penicillinあ
る い け
る い は7.3:1と
協 力 作 用 が 多 く認 め られ る 比 率 の 範 囲 内 にあ
り,in vitro併
川 物 果 の 発 現 を 裏 付 け る こ とが で きた 。
こ れ ら の 実 験 でCcphalexinとMecilhnamが
の2剤
抗 生 物 質や 化学 療 法 剤 間の 併 用 が 行 なわ わ て い る。
Mecillinamと
in vitroで
比'1、は17.4:1あ
種 々の
細 菌 に 対 し て 協 力 作 用 を 示 す こ と を 確 認 で きた の て。 こ
総 括 お よび 考察
菌 ス ベ ク トル の 拡 大,抗
の 出 現 防 止,副
る こ とに よ り推 定 し た。 冶療に 用 い た 投 方量 で 得 られ る
CEXとMPCの
ccphalosporin
問 の 協 力 作 用 の メ カ ニ ズ ム に つ い て Escherichica
coliを
川 い て 検 討 を 加 え た。
現 在,β-lactam
剤 が 抗 菌 力 を 示 す 要 因 とし て,抗 生
物 質 の 外 膜 透 過 性,β
β lactam剤
ラ ク タ マ ー セ に 対 す る 安 定 性,
の 標 的細菌
で あ ろ ベ ニ/リ
剤 との 併 用に よ り協 力作用 が 得 らわ る とい う 報 告 け 多
(PBPs)へ
い13∼16)。 しか し,協
な ど が 考 え られ て い る 。Escherichia coli
力 作 川 発現 の 機 作に つ い て の 報 告
は 認 め られ な い.,
す る 抗 菌 わがEDTA存(1三
わ れ わ れ はEscherichia coliに
対 して形 態 的 に 相 異
な る 作 用 を 示 すCephalexinと
Mecilhnam間
果 に つ い て 検 討 し た,.ま ず,種
querboard
titration
検 討 し た 結 果,使
の併用効
々 の 細 菌 を 川 い て Chc-
methodに
よ り協 力 作 用 の 有 無 を
用 し た す べ て の 菌 机 て 協 力作 川 が 現 わ
れ る こ と を 確 認 し,FIC
indexか
ら も両 薬 剤 問 の 作 用 が
協 力 作 用 て あ る こ とが わ か っ た 。 しか し,協
わ れ るCEXとMPCの
力作 用 が 現
配 合 比 は一 定 せ ず,菌
種に よ っ
っ た こ と か ら,併
され ず,ま
hia coli
ST- 0193や
Escheric-.
ほ と ん ど β-ラ クタ マ ー ゼ を 産 生 しな
い こ と か ら こ の 協 力 作 用 は β-lactam剤
の 作 用 部 位 にお
い て 現 わ れ た もの で あ る と考 え ら ね,PBPsに
対する親
和 性 とオ ー ト シ リ ン 活 性 の 誘 発 に 興 味 が もた れ た 。そ こ
でCephalexinと
Mecillinam併
用 時 の 形 態 変 化につ
い て検 討 を 行な った 。 位 相 差顕 微 鏡
型 電 子顕 微 鏡 観 察 か ら,
る 割 合 の 中 か らCEX:MPC8:1と32
作 用 で,そ
選 び この
下 で 導.ほ と ん ど 増 強 され なか
た,Escherichia coli
K-12は
ST- 0198に 対
用 時 に 外 膜 透 過 性 が 元 進 し た と も推測
て か な り の 幅 が み ら れ た 。 そ こ で 協 力 作 用 が 多 く現 わ れ
:1を
ン 結 合蛋 白質
の 親 和 性,れ細菌の 自 己 融 解 酵 素 の 活 性 化 の 誘 発
Cephalexinお
走 査 型 お よ び透過
よ び Mecillinam
れ ぞ れ 伸 長 化 菌 お よ び 卵 形 細 胞 を,併
用時 に
固 定 した配 合 比 で どの 程 度 の 協 力作 用が 現 わ れ る か を
は 伸 艮 化 し た 細 胞 の 中 央 部 に パ ル ジ が 現 わ れ,パ
ル ジ部
89菌
分 か ら の ス ファ ロ フ ラ ス ト様 構 造 物 の 突 出,溶
株 を 用 い て 検 討 し た 。CEXにMPCが
添 加 され る
一 連 の過 程 を確 認 で きた
こ と に よ り抗 菌 力 が 増 強 す る こ と を 認 め た が,CEXと
MPCの
併 用 に よ り Enterobacter,
陽 性 のProteusに
Sermtia,
indole
対 し て も 抗 菌 力 が 増 強 す る こ とは 興
味 探 く思 わ れ た 。 そ こ で2剤
間 の 協 力 作 用 を再 確 認 す る
。GREENWOODら17)は
子 顕 微 鏡 を 用 い てEscherichia
の 作 用 部 位 は2箇
形 成 す る が,
所 あ り,伸
coliに
Cephalexin,
菌 に到 る
走 査型 電
お い て penicilli"
長 化 し た 細 胞 に bulgeを
Mecillinamは
作 用 部 位 を1
VOL.
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
つ しか もた な いた め伸 長 化 菌 あ る い は 卵形 菌 を形 成 す る
現 在,β-lactam剤
の細胞分裂,細 胞 伸 長,細 胞 形 態 に 対す る β-lactem剤
ら3の 存在 に よ る
ことを示 し,こ れ らの べ ニ シ リン結 合 蛋 白 質が 細 菌 の 形
態 と密接 に関 係 して い る こ とが 確 認 され,そ の機 能 が 群
細に検討 され てい る。 ペ ニ シ リン結 合 蛋 白 質2,3の
べニ シ リン結 合蛋 白質 の 機 能 あ る い は 溶 菌の メ カ ー ズム
が 検 討 され て い る23,24)が,ベニ シ リン結 合蛋 白質2と3
の 阻 害が 溶菌 とい う過 程 に どの よ うなか か わ りあ い を も
って い るの か 興 味 が もた れ る。
文
機
能につい ての 詳 しい 報 告 は ない が,松 橋 ら16,19)によ りベ
1)
SPRATT,
and
併用 時 に 殺
親和性が 増 大す る とい う可 能性 も考 え られ,コ
3)
of
NISHINO,
T.
changes
in
受 け や す くな って
&
GREENWOOD,
perties.
4)
H.;
BIRCH-ANDERSEN:
Section
B.
処理を受
5)
けた細胞 で,直 ちに 溶菌 が 開 始 し,そ の活 性 も単 独 処 理
of
a
LICHFIELD,
J.
6)
側に存在 してい た 。― 方,併 用 時 に誘 発 され る活 性 は い
81:
L. TYBRING
&
of
acid
1973
Ther.
番野
ドル細胞は 形態 維 持 能力 が 弱 く,バ ル ジ部 分 の細 胞 壁 成
剛,
99•`413,
弘,
1949
土 肥 正 善,
栩
動 物 に お け る吸 収
(S-7):
105∼
土 屋 皖 司.
109∼114,
E.;
plasms.
II.
as
Pivmecilhnam
1977
A.
RYTER
study
in
J. SECHAUD:
DNA-contain-
and
with
mature
phage
normal
different
Biophys.
&
of
Vegetative
compared
nucreoids
J.
simplifield
experiments.
96:
中清水
microscopy
DNA
害 される結 果,ス ピン ドル 細 胞 が 形成 され,こ の ス ピ ン
A
排 泄 お よ び 体 内 分 布 に つ い て 。Chemo-
KELLENBERGER,
ing
阻
(FL
Second.
1979
山 崎 俊 幸,
Electron
協力
A.
micro-
Escherichia
dose-effect
Exp.
therapy25:
8)
&
electron
F. WILCOXON:
木 村 靖 雄,
pro1973
Microbiol.
evaluating
正,
の 吸 収,
ている と考 え られ る。
1•`6,
response
393•`407,
Pharmacol.
115,
7)
より1種 あるい は そ れ以 上 の 溶 菌 系 の 活性 化 が 誘 発 され
作用が認 め られ る の はペ ニ シ リン結合 蛋 白 質3と2が
26:
J. BLON,
and
A
novel
Phathol.
Path.
J. T.
J.
FL-1060:
with
野 義 博, 大 坪
龍: Cefaclorの
・排 泄 ・代 謝 。Chemothempy27
独 作 用 に よ り誘 発 され る 活性 は 逆 に 酸 性
併用 に よ りEscherichia coliで
F. O'GRADY:
early
EscherJapan
6 p-amidinopenicillanic
of
吉 田
and
1972
Light
the
to
method
時の細胞に 比ベ 大 きか った 。 正 常 な菌 の場 合,溶 菌 系 を
とMecillinamの
&
Clin.
N.
Acta.
以上の結 果を 総合 的 に 考 え,わ れ わ れ はCephalexin
Proc.
2999•`3003,
Morphological
antibiotic
J.
MELCHIOR,
1060).
で も同程 度 に 認 め られ る ことか ら,併 用 に
K-12.
72:
cephalexin.
83•`94,
D.
示唆 された 。 リン酸 緩 衝 液 中 で の 溶菌 活性 につ い て の 検
ずれのpH域
A.
aureus
to
beta-lactam
coli
Mecillinam単
S.
S. NAKAZAWA:
16;
scopy
ア ル カ リ側 に 存 在 し,Cephalexin,
elongation
«Vi
U.
exposed
溶菌に対 して何 らか の か か わ りあ い を有 して い る こ とが
活性化す るpHは
,
binding
division,
Staphylococcus
いる ことか ら,併 用 時 に 生 じる ス ピ ン ドル とい う形 態 が
討で も,短 時 間CephalexinとMecillinamの
penicillin
the
Escherichia
Sci
coil
new
ことが わか った 。 そ して,併 用時 に ス フ ェ ロブ ラス ト形
shockを
in
Acad.
Microbiol.
対 し相 加的 な親 和 性 しか 示 さ な い
成能が増強 さ れ,oSmotic
shape
ichia
ションや薬 剤処理 を行 な い 形態 変化 を 起 こ さ せ たEsc-
結合蛋白質2と3に
Distinct
1975
2)
ンベ テ ィ
herichia coliの 膜 画 分 を 用 い て検 討 した が ペ ニ シ リン
献
G.:
involved
Natl.
菌,溶 菌 作用 が増 強 され る ことか ら.併 用 時 に は それ ぞ
れ単独 で親和 性 を示 す 以 外 の べ ニ シ リン結 合 蛋 白 質 への
13.
proteins
ニシ リン結合 蛋 白質 と細胞 分 裂 との か か わ りあ いが 示唆
されて いる。CephalexinとMecillinamの
に ト レラ ン トなEscherichia coli
の 変 異株 や ベニ シ リン結 合蛋 白 質 欠 損 株 を用 い て 種 々 の
と考えてい た。 しか し,SPRATT1)はEscharichia coli
の効果は べニ シ リン結 合 蛋 白質 の1か
951
bacterial
physiological
Biochem.
states.
Cytol.
4:
671•`678,
1958
分が こわれ やす くな って い るた め,バ ル ジ部 分 に ス フ
ロプラス トが形 成 されや す くな り,osmotic
shockを
9)
受
HORIDGE,
けやす くな って い る こ と,さ らに 細胞 の溶 菌 活 性 が 非 常
study
に強 く誘発 され る ことが この 協 力 作 用 の発 現 を もた ら し
818,
10)
ている と考 えて い る。
G.
drying
A.
for
of
最近,TOMASZら20∼22)はEscherichia coliで
ベ ニシ
LUFT,
ciliary
J. H.:
Cytol.
11)
討を加えて いる 。 ペ ニ シ リン結 合 蛋 白 質1で は 死 に つ な
がる3種 の仮 説 をあ げ て い るが,ベ
明であ る としてい る。
motion.
Critical
point
microscopic
Science
Improvements
9:
163:
E. S.:
high
as
pH
in
J.
409•`414,
REYNOLDS,
212,
12)
L. YAMM:
electron
methods.
electron
ニ シ リ ン結 合 蛋 白質
2あ るいは3と 細 胞 の 死 とい うもの の 関係 に つ い て は不
S.
817•`
1969
embedding
リン結 合蛋 白質 と溶 菌,細 胞 の 死 とい うも のに つ い て 検
&
scanning
resin
Biochem.
1961
The
an
epoxy
Biophys.
use
of
lead
electron-opaque
microscopy.
J.
Cell.
citrate
at
stain
Biol.
17:
in
208•`
1963
ELION,
Antagonists
G.
B.;
S. SINGER
of
nucleic
&
acid
G.
H.
derivatives.
HITCI4INGS:
VIII.
CHEMOTHERAPY
952
Synergism
in
related
477•`488,
13)
(FL
L.
&
N.
a
vitro.
Antimicr.
C..
with
of
SCHELD,
E.;
R.
Chemoth.
8:
vivo
Antimicr.
271•`276,
G.
&
W.
between
derivatives
Agents
&
F.
6ƒÀ-
and
M.;
F. N.
FINK,
D.
D.
Agents
&
&
action
Dis.
22)
synergism
meningi-
&
Chemoth.
128:
J.;
penicillin
coli
F.
O'GRADY:
in
The
16:
Escherichia
791•`494,
S. TAMAKI
binding
membrane
two
M.
coli.
J.
MATSUHASHI:
lbs
showing
activities
&
M.
in
and
in
in
U.
coli
penicillin-
enzyme
synthesis
Sci.,
MATSUHASHI:
Escherichia
defects
Bs
TOMASZ,
A.:
From
to
lysis
and
the
Dis.
from
1:
in
S. A.
activity
vitro.
74:
Proc.
5472•`5476,
K.
&
autolytic
cell
wall
by
A.
hydrolase
tolerant
mutants
16:
K.
tolerant
Bacteriol.
&
T.;
of
lysis
induced
Chem.
43:
coli.
Escherichia
beta-lactam
955•`963,
by
2639•`2640,
coli
antibiotics.
1979
TOMIOKA
Escherichia
FEMS
1980
TOMASZ:
to
TOMASZ:
beta-lactam
Escherichia
A.
S.
1979
A.
the
7:133•`136
140:
NIKAIDO,
Antimicr.
&
in
of
Escherichia
838•`848,
deflect
of
mutants
Triggering
in
WILLIAMSON
Lett.
KITANO,
Rev.
1979
antibiotics.
R.
Murein
proteins
bacteria.
TOMASZ:
Chemoth.
K.;
of
degradation
beta-lactam
&
KITANO,
Mutant
penicillin-binding
death
434•`467,
KITANO,
J.
24)
proteins
NAKAJIMA
causing
Microbiol.
sites
1973
&
Biol.
1979
mutant
Acad.
coli
23)
D.
penicillin
NAKAGAWA,
21)
other
FLETCHER
Enterobacteriaceae
S.
protein-1
Infect.
Chemoth.
Mecillinam-ampicillin
S.
pepti-
Agric.
1977
20)
1976
BESKID
1379•`4380,
1982
and
enzyme.
peptidoglycan
Natl.
1979
GREENWOOD,
TAMAKI,
Agents
Antimicr.
Escherichia
beta-
1976
experimental
Purified
535•`542,
43:
binding
combined
synergy
acid
SANDE:
Infect.
a
polymerase
crosslinking
simultaneously
Antimicr.
CLEELAND,
In
W.
peptidoglycan
Thermosensitive
synergy
derivative,
10:
Chemoth.
589•`594,
tidis.
18)
and
mecillinam,
&
antibiotics.
of
19)
acid
&
antibiotics.
amidinopenicillanic
17)
Mecillinam
action
acid
DELORENZO:
both
doglycan
for
Synergy
GRUNBERG,
in
MELCHIOR:
beta-lactam
Agents
M. A.
H.
Agents
amidinopenicillanic
16)
208:
1975
NEU, H.
9:
of
Chem.
6 ƒÀ-amidinopenicillanic
Bactericidal
271•`276,
15)
biochemically
Biol.
Chem.
1060),
derivative:
14)
of
J.
1954
TYBRING,
in
combinations
antimetabolites.
AUG.
&
coli
cephalexin.
1979
M.
MATSUHASIII:
tolerant
Agric.
to
the
Biol.
VOL.
30
NO.
CHEMOTHERAPY
8
SYNERGISTIC
EFFECT
953
OF CEPHALEXIN
WITH
MECILLINAM
MASAKOOTSUK1,TORU OKU, TAKESHINisiiiNu and TERtio TANINo
Department of Microbiology, Kyoto College of Pharmacy
SACHIKOGOTO
Department of Microbiology, Toho University, School of Medicine
In vitro
synergistic
effects
of cephalexin
nzoniae, Enterobacter
spp., Serratia
board titration
and fixed combination
mechanism
of action
The growth
curve
were
after
and mecillinam
against
Escherichia
coli,
Klebsiclla
pneu-
marcescens
and Proteus
spp. were demonstrated
by the chequermethod, and the in vito effect of these two antibiotics and
their
also discussed.
the exposure
of cephalexin
and mecillinam
at the
these antibiotics
had no effects when given alone showed
a decrease
of the
of a bactericidal
effect. In experimental
infection
in mice, the combination
synergistic
effect and excellent
therapeutic
effect.
The blood concentration
mecillinam
was coincident
with the concentration
ratio
effect was observed
in vitro. Phase-contrast
and scanning
of these
electron
concentrations
at
which
turbidity
and the presence
of both drugs
showed a
ratio of cephalexin
to
antibiotics
micrographs
to the combination
of cephalexin
and mecillinam
showed somewhat
elongated
of spindle cells with swelling
in the central
part; cephalexin
caused
formation
at which
the synergistic
of bacterial
cells exposed
bacteria
and formation
of filamentous
cells,
while mecillinam
caused formation
of ovoid cells. Cephalexin
showed an affinity
for PBP-1 a and 3,
and mecillinam
showed
an affinity for PBP-2.
When these
antibiotics
were used concurrently,
they
exerted an additive effect to increase
the affinity for PBPs.
The lytic
activity
was increased
much
more after
the
combination
of two
antibiotics
than
after
a single
exposure.

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