28pmB134 ダイオ キシン誘導体 に特異 的な一 本鎖抗体 とス トレプ トア ビジン との機能性 融合 分子 の調製 と評価 ○ 山本 珠 実 1,二階堂 里那 1, 諏訪 喜昭 1,片岡 千和2 ,津 田石 一之 2, 森岡 弘志 1(l 熊本大 院薬 ,2 cBST) 【目的】ダイオキシン類 は,環境 中に広 く汚染 が確認 され る内分泌撹乱物質であ る.その毒性 は異性体 ごとに異なるため,特定のダイオキシン類 のみ を測定す る ことが重要である.そ こで,抗原抗体反応 を利用 した平衡 除外免疫測定法 ( Ki nEx A) が開発 され,従来の測定法 よ り高感度 に特定のダイオキシン類 を測定す ることに 成功 した. しか し,測定 に利用 されてい るモ ノクローナル抗体 は,調製 に費用 と 時間がかか り,また蛍光標識物質が試料 中の混在物 の影響 を受 けやすい といった 問題 点がある.そ こで本研 究では, よ り簡便 に大量調製 ができ,蛍光標識物質 と の結合 を強化 した測定用抗体の作製 を 目的に,ダイオキシン類 を抗原 とす る一本 s c Fv) と, ビオチ ンと高い親和性 を有す るス トレプ トア ビジン ( SA) と 鎖抗体 ( の機能性融合分子の調製 を行 った.【 方法】遺伝子工学的手法 を用いて,ダイオキ PCB を抗 原 とす る PCB4s c Fv と SA とを連 結 した シ ン類 の一 種 で あ る CoPCB4s c Fv -SA を作製 し,大腸菌発現系 による調製 を行 った. さらに,収量の向上 を 目的に,本研究室で作製 された pCB4s c Fvの高収率変異体 Lト43 と SA 変異体 SAmlによる改良を行い,L1 43 _SAmlを得た. この融合分子の抗原お よび ビオ SPR)解析 で評価 した.また,ダイオキシン チ ン結合活性 を表面プラズモ ン共鳴 ( 0を用いて ,Ki nExA での実用化 の検討 を行 った.【 結果 ･考察】 バイオセ ンサ spD60 SPR 解析 によ り,L1 43 _SAmlが抗原 とビオチ ンの両方 に対す る結合活性 を保持 43 -SAmlは SA とビオチ ン化蛍光物 してい ることを確認 した.この結果か ら,L1 質 との高い親和性 によ り,蛍光標識 の強化 を可能 にす るこ とが示唆 され た. さら に,SPD600による PCB4測定用検量線 を作成 した結果,従来の測定用抗体 と比較 し検 出下限値 が低下 した ことか ら,測定感度の向上 に成功 した ことが示唆 された.
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