Kobe University Repository : Kernel Title 麦芽アミラーゼに関する研究 (IV) : 電解還元法による大 麦チモーゲン・アミラーゼの活性化について Author(s) 西躰, 雄二郎 / 麦林, 楢太郎 Citation 兵庫農科大學研究報告. 農芸化学編 , 4(1): 36-38 Issue date 1959-12 Resource Type Departmental Bulletin Paper / 紀要論文 Resource Version publisher URL http://www.lib.kobe-u.ac.jp/handle_kernel/81008202 Create Date: 2015-02-01 麦芽アミラ ゼに関する研究 ( I V ) 電解還元法による大麦チモーゲン・アミラーぞの活性化について 西鉢雄二郎・麦林楢太郎 Studies on Malt Amylase ( I V) Activationo fbarleyzymogen amylasebye l e c t r o l y t i c reduction method Y u u j i r oNISHlT A IandN a r a t a r oMUGIBAYASHI 吾々は先にパパイン,チオグリコール般その他による 径 6mmの枝管を用し電解槽と枝管とは封入した白金線 大麦チモーゲン・アミラーゼ(以下 Z .A . ) の活性化機 で電気的に接続している.電解槽の底には充分精製した 構について研究し, Z .A.の活性化は蛋白分解作用によ 水銀を人れ,電解還元中は担持器で常に撹持する.水銀 るよりも還元作用によって行われる事を報告したがり, 上に試料混液を置きその表而を流動パラフィン又はトル この事は オールで覆う.陽極側は硝子管に封入した白金線を O .1 SANDEGREN2) ,POLLOCK3) 等も同様の結論を . A .の活性化は・S s -型よ 出している.此より吾々は Z 規定塩酸中に浸し,試料混液と酸j 液とは内径 6mmの塩 り SH 型への変化によって起るのであろうと推論し 化カリ飽和寒天橋で結合する. はシスチンの還元に有効であった I I )実験方法:試料大麦粉末 I gを緩衝液50m!と共に 電解還元法をパパインに応用してパパインの可逆的再活 乳鉢で充分磨砕し,提持しつつ3 0分,叉はトルオールを 性化が行われる事を報告している.吾々は大麦 Z.A.の 加えて 3 0 ' Cに一夜静置する.綬街液は O.IMクエン酸ソ 活性化機構を研究するに当り此処に電解還元法の応用を . 8 ),0.2Mトリスアミノメタン ーダ背性ソーダ (pH5 た.又一方秦氏等 4)~) ー塩酸 (pH6 .0-7.2), ベロナールソーダー酢酸ー瑚酸ー 試みた. 燐酸ーカリ (pH8 . 6 ) を用いた.上の様に充分磨砕, 実験及び考察 抽出した試料混液を内容が均一になる様に良く担持しつ I)装置:直流電源及び電解槽の大要は F i g .1 に示 0m!を電解槽の水銀上に入れ直ちに間持を始め電 つ約 2 した.直流電源、はセレン整流器を用い摺動抵抗器にて電 m!宛採 流を通じ電解電流を 5mAに調節する.各時間後 1 自 7 f l 電流を調百円した . EE解槽は内径 27mmX高さ 60mmで 取し,蒸溜水で 5-10倍に稀釈し静素力を測定した.又 @ 門誌 e D . C .S o u r c e F i g .1Apparatusf o rE ! e c t r o ! y t i cR e d u c t i o n 3 6 X I I .1 9 5 9 イ h づ Z ' ζ " 炭 ?J:編 回 向 ; 17 ?去 90 ' 5 120 r l e y Free F i g .3E l e c t r o l y t i cR e d u c t i o no f Ba ・. Amylase 1 2 0 ∞ 雪卯 0 則 ot 1 5 0 1 5 0 1 8 0 m 1 n . , - 1 8 0 m i n . Amylase .pH S h i n 陥a n o XC i t r a t e T r i s V e r o n a lb u f f e r A . . . . . . . . . . _ . -4 - 1 9 l A......4 .~ , . . . . . . .. , _ . . . . . . .ー ・ . . ・ ・ ・ ・ ・4 ・ ・ ・ ・ ・ ・ z P h 4 何削 5 0 ∞ 0 1 . . 日 . . . . 一 . . . . 昔 一 一 一 . 戸 . 占 世 ← . 一 … … . 一 一 → . .. . . ・ ・ ・ ・ . . ー 自 , . . . . F - a e 6 U ︽ , 6 4﹃ : / 5 0 0 7 ・ bR AUAunu AUAU RdAue2 。, ~ 3000l 7 日 y -e h 朝刊﹄F刊品Fea---Hh I. . . . . 同 1 53 0 6 0 9 0 120 1 5 0 1 8 0 m i n . 1 5' 0 ' ・ F i g .2E l e c t r o l y t i cR e d u c t i o no fB a r l e y 一 一 A my l a s e .pH X A 6 0 9 0 1 2 0 1 5 0 ・ 1 8 伽 i n . F i g .4E l e c t r o l y t i cR e d u c t i o no fMalt - -Amy1ase .pH C t r a t e , T r i s V e r o n a 1B u f f e r Q 90&. Totalamylasebypapaintreatment T r i sb u f f e r A V e r o n a lb u f f e r 目的の為には不適当と思われる.何れの場合でもパパイ 試料混液¢残部より lmlを採り電解還元 0時間のものと ンによる T . A .は電解還元によって得られた値より約 2 .残都に約 O .5~~ ~割合にパパインを加え 2 し,更にそ r 倍大であり Z . A .の活性化は何不充分の様に思われる. -3時間静置し,此よりパパインによる全アミラーゼ ( T . A . )を測定じた.酵素の測定法は前報1) と同様沃度 法を用い, pH は東洋涯紙試験紙にて測定した. 此の際処理時聞を長くしても又緩衝液濃度を増減しても 何れも帯素の失活を来し,電解還元法ではパパイシの T . A .イ I I (に到達する mは出来なかった. イ芯試料大麦の品 穂聞では顕著な差異は認められなかった. M)実感結果:長野小紋大麦高原及び信濃一号につい ての結果は Fig.2に示す様に還元の進むに従って pH 次に電解還元処理によって示された酵素力の増加は, は上昇し,醇索力の榊加する事が認められた. トリス緩 Z.A. の活性化によるものか既に溶出された遊離アミラ いた場合は何れも大差無 衝液及びベロナール緩衝液を丹i ーゼ ( F . A . )が更に活性化されたものであるかを確認す いた場合は処理後半に於ける いが,クエン酸緩衝液を月i る為に上と同様に試料大麦粉末をトルオールの存在のも pHの上昇が急激で 1 5 0 分後 pHI0 以上に達しその為醇 0 ' C,一夜抽出後沼過した液について電解 とに緩衝液で 3 索は失沼ーした.又 O.lM 燐酸緩衝液. 0.1M酢酸緩衝液を 還元処理を行った.その結果は Fig.3 に示す様に 3時 ) ll いた場合 pHの上昇は更に激しく此等の緩衝液は此の 間処理ー後も殆んど醇素力の噌加は見られなかった.又此 3 7 兵 w農 科 大 学 研 究 報 告 の際還元処理の初期に見られる酵素力の減少は此の実験 以外の場合でも屡々起ったが,此は恐らく用いた水銀の 精製が何不充分であった為と思われる. (水銀は蒸溜水 第 4巻 ) 1 i1号 得られた値の約半分であった. 3 )F .A .に対する電解還元の効果は認められなかっ た. 硝酸及ひ.蒸溜水で各々 と共に数日開通気を行った後 3% (醸造学講座,昭 3 4 .8 .3 1受理) 数回洗糠し鴻過したものを用いた〕 文 献 又愛知在来種大麦麦芽について Fig.2 の実験と同様 に行った結果は Fig.4に示す様に此の場合も電解還元 の効果は認められなかった. この様に電解還元処理は F . A .に厄影響せず,比の処理によって見られる酵素力 . A .の活性化により生じたものであると推論 の増加は Z 1 ) 西林,麦林,片瀬,吉田:兵庫農大研報, 3 (良化 編 ) , 1 2 3( 19 5 8 ) . 2 )E .SANDEGRENandN .LANG: J .I n s t .B r e w .,56, 3 1 3( 19 5 0 ) . . R .A.POLLOCK andA.A.P o o L : i b i d .,64, 1 5 1 3 )J 出来る. 以上の様に大麦 Z . A .は電解解元によって活性化され ( 1 9 5 8 ) . る事から Z . A .の F . A .への変化は還元作用によって行 4 )秦忠夫:京大食研報, 3,6 3( 19 5 0 ) . われると云う推論に一つの証明を提示した.叉此の処理. 5 )T .HATAandS .MATUSHITA: Memo.R e s . l n s t . によって得られた偵はパパインによる T . A .の値の約半 FoodS c i . J(y o t oU n i v .,5,6 5( 19 5 3 ) . 分にしか到達しなかったが,此の事は秦氏も電解還元に Summary よるパパインの活性化は育政庖等の活性剤を用いた場合 の約半分であったと報告している.叉以上の実験は総て 7 8 乙よる Z . A .の A p p l i c a t i o no ft h ee l e c t r o l y t i cr e d u c t i o nmethod 粗製試料について行ったものであり,選 t ot h ea c t i v a t i o no fb a r l e yzymogen amylase was 活性化が直接行われたものであるか或 L、は二次的に行わ l J owingr e s u l t swereo b t a i n e d . s t u d i e dandt h ef o . A .のI i i隣精製が成功して照らぬ れたものであるかは Z 1 ) A c t i v a t i o no fb a r l e yzymogen amylase by ,u s i n gc i t r a t e, e l e c t r o l y t i cr e d u c t i o nwas e f f e c t i v e 現在.伺残された問題である. t r i so rv e r o n a lb u f f e r s . 要 約 2 ) Thea c t i v i t yv a l u e so b t a i n e dbye l e 氾t r o l y t i c 大麦 Z . A .の活性化に電解還元法の応用を試み次の結 r e d u c t i o nmethodwereabouth a l fo ft o t a lamylase v a l u ebyp a p a i nt r e a t m e n t . 果を得た 1 ) クエン酸、ノーダ, 3 ) F r e eamylasewasn o ta f f e c t e d bye l e c t r o . トリス或はベロナール緩衝液を 用い 8V ,5mA,3時間処理する事により Z.A.の活性 l y t i cr e d u c t i o n . ( L a b o r a t o r yo fF e r m e n t a t i o nT e c h r i o l o g y ) 化が行われた 2 ) 電解還元法によって得られた仰はパパイン処E 唱で 3 8
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