Kobe University Repository : Kernel

　Kobe
University Repository : Kernel
Title
麦芽アミラーゼに関する研究 : 大麦チモーゲン・アミラ
ーゼに就いて (I)
Author(s)
西躰, 雄二郎 / 麦林, 楢太郎 / 片瀬, 正之 / 吉岡, 邦明
Citation
兵庫農科大學研究報告. 農芸化学編 , 3(1): 40-42
Issue date
1957-12
Resource Type
Departmental Bulletin Paper / 紀要論文
Resource Version
publisher
URL
http://www.lib.kobe-u.ac.jp/handle_kernel/81008174
Create Date: 2015-02-01
麦芽アミラ
ぜに関ナる研究
大麦チモーゲン・アミラーゼに就いて(1)
酉排雄二郎・麦林楢太郎・片瀬正之・吉岡邦明
Studies on Malt Amylase .
Part1
. Barleyzymogenamylase. (
1)
Y
u
u
j
i
r
oNISHITAI，
NarataroMUGIBAYASHI，
MasayukiKATASEandKuniakiYOSHIOKA
実
休眠状態の毅突種子が発芽に併って著し〈酵素カを増
験
大する現象は古くから知られているが，中でも各種醸造
1
) 反覆拍出
食品原粧や医薬用として用途の広い大麦麦芽に就いては
先に大麦麦芽の71<抽出に於いて ~mylase は比鞠句
s
amylaseは稿々溶出され難<.
最も多くの研究が行われている.回してその酵素生成鴎
容易に抽出されるが
構に就いては現在詰の所次の二説に大別出来る.即ち大
数閲反覆抽出する必要がある事を認めたので，未発芽大
安の発芽中の代謝中間産物として新生されると云う合成
衰の zymogenamy
1
as
eの性買をしらべるに当り先ず
説 (
Luersl (
1
9
3
6
)等〉と未発芽大安中に存在する水不
水及び 5
9
も硫酸加恩溶液にだ反覆抽出を行れその挙動
溶，不活性の zymogena
mylaseが水可溶，活性の状態
を見た.
2(
に愛イじされると云う活性化説 (
Ford& G
u
t
h
r
i
e
1
9
0
8
)
試料大麦:カナダ六条種，愛知在来種，滋賀ゴールデ
等〉である. Ford及び G
u
t
h
r
i
eは大麦をパパイン等
ンメロン種大変を何れもウイレー衝撃式粉砕機l
ニより会
の蛋自分解酵素を含む溶液で抽出すると a
mylase収量
粒濁とした.
Amylase定量法 :2%可溶性誠治緩衝液*20ml，水
が増加する事を最初に指摘し，その後パパイン処理によ
って得られた a
mylase量は，その大麦が発芽する事に
0Cに保った後酵素液 l
9mlを 3
0
mlを加え Wi
1
ls
t
a
t
t
e
r
-
mylase量に賂々等しい事等より発芽
よって到達する a
0C 6
S
c
h
u
d
e
l
i
去により 3
0
0分間に生成された無水 m
a
l
0
t
o
s
e量を測定し，絶乾大麦 Igが 30C 60分間に生成
a
l
t
o
s
eの mg数に f
て表した.
する無水 m
本乾物量 10g の可溶性被粉〈武田〉の懸濁液を濁水中
に併う a
mylase の槌加は，休眠種子中に存在する水不
溶.不活性の zymogena
mylaseが同時に生じた蛋自分
解酵素の作用により活性の状態に密化された結果である
と結論された.然し1IS'怯化説には蛋自分解酵素によって
に徐々に注入し，冷後酢酸緩衝液紳 20ml 及び水を加
起ると云うものの他に a
mylokinase説 (
W
a
l
d
s
c
h
m
i
d
t
-
えて 500ml とし， t
o
l
u
e
n
e を飽和せしむ.
L
e
i
t
z &.Pur
r
3(
1
9
3
1
)
)，s
i
s
t
o
e
l
e
u
t
os
u
b
s
t
a
n
c
e説
，首位竣ソーダ 272g に水を加えて
'紳氷面撤 120ml
4(
(
C
h
r
z
a
s
z
c
z&J
a
n
i
c
k
i
1
9
3
3
)
)，還元作用説 (
S
a
n
d
e
g
r
e
n
1000ml とする. pH4
.
7
.
& Klan
g
5(
1
9
5
0
)
)等種々あるが.何れも疑点無しとせず
i
) 蒸溜水反覆拍出:大麦粉末 2gを 50ml容遠>D-
未だ確証を得るに到っていない. 最近池宮氏6 は雄気状
管に採り，蒸潟水 40ml 及び t
o
l
u
e
n
e lml を加え，
態に於ける大安の自己消化により水溶性 f
r
e
eamylase
0
30
C 定温器中に時々振握しつつ 20時開始出後， 4
0
0
0
が不能性の zymogena
mylaseに移行し，その際 s
i
s
t
o
r
.
p
.
m
.にて 1
0分間違沈，上澄液を漉過し，第 1回目の
f
r
e
eamylase の定量に供する.第 2回目以後は各々前
s
u
b
s
t
a
n
c
e様物質が生成する事等を認めている.この様
r
e
eamylase の
に未発芽大麦中には水可溶，活性の f
ymogen.amylase が在在する
他に水不溶，不活性の z
後蒸溜水 37.5ml (大麦濁末 2gに約 2.5mlの水が段
事はも平疑問の余地が無いが，その本体並びに賦活機構
0
収される〉を加え，同様に 3
0
C，2
0時間抽出後遠沈，
に就いては，その単離，精裂が行われて居らぬ許りでな
上澄液を得る.以下同様にして 3.4
，5回反覆する.上
し真に水不溶，不活性なるか難溶又は可溶，不活性な
Merk
述の処理中，蒸溜水の代りに 0.5% パパイン (
るかも極めて莫然として居り，更に検討を加うべき諮問
1
:3
5
0
) 溶液で 3
00C， 20 時間抽出した滴液を
題を含んでいる.苦々は種子発芽に併う酵素の賦活現象
回の遠詑残溢を 10ml の蒸溜水にて軽く速詑洗糠し
t
o
t
a
l
，2
，
3
，
4
amylase の測定に供し J第 2回目以後は各々 1
を研宛するに当り先ず zymogena
mylaseの性質に就
回水抽出した残溢を軽く遠洗洗樵後， 0
.
5
9
るパパイン溶
いて検討した.
0
液で 30
C
.20時間抽出し，各々 2.3.4.5国自の t
o
t
a
l
40
X
I
I
.1
9
5
7
全~
=可
農
化学踊
ω。
o
.t~
・
C.n.
d
.
&
刷
i
叶¥¥
¥ ~，
1000
(natlv
511&
・
(
，oldlnm lon)
，
.
1
¥
¥守、.
。
事
Alehl
1
6・r'owed)
at11
¥
'
.
:
.
.
こL 一一一
~
¥
1
.
.
.
.
¥ ' L
¥¥・-_-4-ー-'...I 、
'
.
.
.
‘・a・
E皐t
r
a
m
F
i
g
.1
. ，RepeatedE
x
t
r
a
c
t
i
o
no
fB
a
r
l
e
yAmylasesw
i
t
hDis
ti
1
1edWater
oC
(Amylasea
c
t
i
v
i
t
y
:.
mgs.o
fs
t
a
r
c
hc
o
n
v
e
r
t
e
dt
oma1
to
s
eby1
9
.o
fbar
1
eyi
n60ma
t3
0
)
ー
・
・
-
.
x
.
.
.
.
.・…
・ .x
.
.
.
.
.t
o
t
a
l
.
a
m
y
l
a
s
e
zymogen.amylase
"000.
・
・
Cana
d
.a
(6r w d)
・
‘
- A -- A -"
fr
e
e
.
a
m
y
l
a
s
e
-0---0-solublezymogen.amylase
Alch1
(
n
a
U
.
.
.
.】
Slg&
f
酔 1
.
岨圃1
・叫
t
'2~00 ~ぜ 1
咽￨、
¥
、
20
32500~
~
¥
弘
¥
、
¥¥
~、~
1000
ヤ七九
5
0
0
L-ー ← ー『
.
.
ぅ
F
i
g
.2. RepeatedE
x
t
r
a
c
t
i
o
no
fB
a
r
l
e
yAmylasesw
i
t
h5%K2S04 S
o
l
u
t
i
o
n
oC
t
o
s
eby1
9
.o
fbar
1eyi
n60ma
t3
0
)
(Amylasea
c
t
i
v
i
t
y
:r
n
g
s
.o
fs
t
a
r
c
hc
o
n
v
e
r
t
e
dt
oma1
ー
・
・
-
_
.
.
.
x
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
・
.
.
.
.
.
・
×
一
.t
o
t
a
l
.
a
m
y
l
a
s
e
一企一一ー- A -free.amylase
zymogen.amylase
4
1
兵E
ぎ豊科大学研究‘報告
Table 1
. PyridineExtractiono
fB
a
r
l
e
y
s
.
及び zymogen amylase を測定した.叉対照として
ピリジン処理を行わない試料についても同様に行った・
Pyridine
e
x
t
r
a
c
t
e
d
ZyZyF
r
e
e
Free mo
gen
mogen
ControI
Barleys
Siga(
n
a
t
i
v
e
)
3
2
7
2
2467
Aichi (
n
a
t
i
v
e
)
2943
2
1
6
0
Osaka(
n
a
t
i
v
e
)
2
7
7
0
2338
Saitama (golden~
melon)
S
i
g
a
1
(
0
g
Io
l
d
e
n
melon)
2898
1
9
7
4
2
5
0
6
2187
Canada(
6・rowed) 2
4
0
4
3
5
4
8
America
0
7
1
(
2・rowed) 3
amylase 測定に供する
2554
。
。
。
。
。
。
。
第 3巻第 1号
その結果は Table1に示す様にピリジン処理によって
f
r
e
eamylaseは完全に洗滅されも早寝存していないが，
zymogenamylaseは依然溶出されず存在し，且つ対照
2
9
8
1
よりも大きな値を示した.唯カナダ六条種のみは対照の
3247
ものより少なし此の事は前実験に於て認められた可溶
3124
性 zymogenamylase の多い事と関連していると思わ
2187
れる.
2
5
0
6
要約
3249
1
. カナダ六条，愛知在来，滋賀ゴールデンメ
p ン種の
未発芽大麦粉末を反覆水抽出し，各段階に於ける f
r
e
e
2947
及び zymogenamylaseを測定し， zymogenamylase
中には水不溶，不活性のものの他に水可溶，不活性のも
zymogenamylase は各々
のが存在する事を見た.
t
o
t
a
I より f
r
e巴を蹴じて算出する.又可溶性 zymo・
2
. 未発芽大麦i
7種に就いてピリジン拍出を行い，売
gen amylase は各々水拍出液に 0.5% 呈のパパイン
全に f
r
e
e amylase を含まない試粧を調製し，各々の
及び t
o
l
u
e
n
eを加え， 3
0oC，20時開放置後躍過し酵素
zymogenamylase量を比較した.
液を得，上述の如くして算出する.命酵素液は何れも
(醸造学講座，昭 3
2
.
8
.
3
1受理〉
5-10倍に稀釈して用いた.以上の方法で反覆抽出した
結果は F
i
g
.1に示す様に f
r
e
eamylase は拍出 2回
支献
により陥々自了し， zymogen amylase は大変品種に
1
. LUERS: C
e
r
e
a
lC
h
e
m
. 13，
1
5
3(
1
9
3
6
)
.
2
. FORD & GUTHRIE: ]
.I
n
s
t
.B
r
e
w
i
n
g
. 14
，
6
1(
1
9
0
8
)
.
.P
h
y
s
i
o
l
.
3
. WALDSCHMIDT-LEITZ & PURR: Z
1
1
7(
1
9
3
1
)
.
C
h
e
m
.203，
& ]ANICKI: B
i
o
c
h
e
m
.Z
. 265，
4
. CHRZASZCZ，
260(
1
9
3
1
)
.
5
. SANDEGREN & KLANG: ]
.I
n
s
t
.B
r
e
w
i
・
n
g
.
56，
3
1
3(
1
9
5
0
)
.
3
1，1
3
5，1
3
8(
1
9
5
6
)
.
6
. 池宮: 日;長佑. 30.1
よって多少の差呉は有るが，第 2回目には急に蹴少し
〈この傾向はカナダ六条種に顕著である〉以後一定の価を
示す.又拍出液中の可溶性 zymogenamylase はカナ
ダ六条種に最も多く，概して第 1回目の拍出液のみに存
在する.
i
i
) 5%硫酸加盟溶液拍出:i)の蒸溜水の代りに 5%
硫酸加旦溶液をもって同様に突験した結果は F
i
g
.2こ
，
示す様に袷々 zymogenamylaseの溶出は良くなるが，
大体水抽出の場合と類似の傾向を示じた.
Summary
2) ピリジン拍出
未発芽大麦中の zymogenamylase をそのままの形
で溶出し様とする試みは従来からも行われて来たが，何
れも不成功l
こ終っている.苔々も最初その目的でもって
ピリジンによる拍出を試みた.
50ml 容遠沈管に大安全粒粉 Ig を採り， lN疏肢で
pH5
.
0 とした 5% ピリジン溶液(ピリジン 5g当り
lN H2S04 40m
l
) 50ml を加え，室温にて時々撹持し
1
. Free-and zymogen.amylase i
nt
h
et
h
r
e
e
6
v
a
r
i
e
t
i
e
so
f u昭 erminated barley， Canada (
rowed)，Aichi(
n
a
t
i
v
e
) and Shiga (Goldenmelon)，
weree
x
t
r
a
c
t
e
drepeatedly; a
teach s
t
a
g
eo
fe
x
t
r
a
c
t
i
o
n both f
r
e
e
a
n
d zymogen-amylase were
巴d
. Consequent
1y we found t
h
a
tt
h
e
r
e
estimat
weretwo types o
f zymogen-amylases; on巴 was，
as had been reported，w
a
t
e
r
i
n
s
o
l
u
b
l
e，i
n
a
c
t
i
v
e，
n
a
c
t
i
v
e
.
andanotherw
a
t
e
r
s
o
l
u
b
l
e buti
2
. Preparing t
h
e samples completely f
r
e
e
from free-amylase by theextraction'o
ft
h
e 5%
p
y
r
i
d
i
n
es
o
I
u
t
i
o
n(
P
I
I5
.
0
)fromt
h
esevenv
a
r
i
e
t
i
e
s
h
e
i
r amounts o
fz
y
.
o
f barley，we compared t
mogen-amylaser
e
s
p
e
c
t
i
v
e
l
y
.
更
つつ 6
0，分拍出後， 4
0
0
0r
.
p
.
m
. 10-15分間遠比する.
上澄部を棄て残澄を更に一回同様に処理し，後蒸溜水に
て 3回遠比洗副長する.かくして得たピリジン処理大麦
，
試粧に蒸溜水叉は 0.5%パパイン溶液を各々 48ml
t
o
J
u
e
n
el
ml を加え， 30oC，， 20時間抽出し，各 free
42
(Laboratoryo
fFermentationTechnology)

Download Report