30E16-am12S MDCK細胞におけるタイトジャンクション機能への Sec61β 遺伝子の影響 ◯鷲山　真紀子 1 ，小泉　直也 1 ，佐々木　杏沙 1 ，松本　有未 1 ，藤井　まき子 1 ， 1 1 昭和薬大，2 阪大院薬）近藤　昌夫 2 ，八木　清仁 2 ，渡辺　善照（【目的】タイトジャンクション（TJ）は、上皮細胞層に存在するバリア機能の本体である。我々はこれまでにウエルシュ菌毒素の C 末断片(C-CPE)が TJ を一過性に開口させることを見出し、C-CPE 添加前後での発現量変動のある遺伝子をサブトラクション法にて検出した。その結果、小胞体から細胞質への輸送に関わる translocon である Sec61βを同定した。今回は、Sec61β遺伝子を過剰発現させた MDCK 細胞を作製し、TJ の形成、C-CPE 添加による開口時、及び TJ 再形成時における TJ の挙動を上皮電気抵抗(TER)により検討した。【実験方法】Sec61β発現プラスミドを MDCK 細胞に導入した。コントロールは Sec61βを組込まないプラスミドを導入した MDCK 細胞とした。作製した MDCK 細胞を 24-well intercell に播種(4.0×104 cells/well)し、TER 値が飽和するまで培養した。その後、C-CPE を 0.01 mg/mL 作用させ、24 時間後に C-CPE を除去し培養を継続した。各段階とも経時的に TER 値を測定し、TJ の形成、開口、再形成能力はそれぞれ TER が一定値に上昇するまでの 1/2 になる時間(T1/2)を指標とした。【結果・考察】Sec61βを過剰発現させた MDCK 細胞は、コントロールに対して TJ 形成時、開口時、及び再形成時の T1/2 は何れも有意に短くなった。したがって Sec61β は、TJ 形成・開口・再形成時における TJ 関連タンパク質に関与しているのではないかと考えられる。なお、TER の最大値においては、Sec61β発現プラスミド導入の有無による有意差は観られなかった。