No.211V2 2014.8.1 6k スピンカラムを用いた核酸抽出キット ISOSPIN シリーズ 本シリーズは、カオトロピックイオン存在下で DNA がシリカに吸着する原理を応用した核酸抽出・精製キットです。 フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。また、スピンカラムの使用により操作が簡単で 迅速に行うことができ、安定した収量で高純度な DNA を得ることができます。 本シリーズに採用されているスピンカラムは、自社開発により従来品よりもカラム容量を拡大しており、O- リング の内側に傾斜を設けているため試料液がカラムに残ることもありません。 また、こだわった設計により、カラムが大きく持ちやすく、さらにカラム上部を持ってもコレクションチューブが 落ち難くなっています。 自社開発のスピンカラム：4 つのこだわり キャップ カラム ① キャップ付きカラムによりコンタミネーション防止 ② カラム容量を拡大 ( 最大 900 μl) ③ O - リング内側の傾斜で液残りしない ④ カラムが持ちやすくコレクションチューブも落ちにくい O - リング シリカメンブレン コレクションチューブ 750 µl 添加しても余裕の 容積 カラムが大きくて持ちやすい コレクションチューブが 落ちにくい ISOSPIN シリーズ基本性能 製品名 用途 DNA 吸着量 最低 溶出量 DNA 回収率 備考 - Plasmid サイズ : 20 kbp 以下 ISOSPIN Plasmid 大腸菌からの Plasmid DNA 抽出 20 μg 50 μl ISOSPIN Agarose Gel アガロースゲルから の核酸抽出 20 μg 10 μl 40 - 80% (100 bp - 20 kbp) 高濃度アガロースゲル対応 ISOSPIN PCR Product PCR 産物の精製 20 μg 10 μl 60 - 95% (100 bp - 20 kbp) Primer 除去 : 40 mer 以下 http://www.nippongene.com/ 大腸菌からのプラスミド抽出 ISOSPIN Plasmid Code No. 製品名 318-07991 容量 ISOSPIN Plasmid 100 回用 希望納入価格 18,000 円 ISOSPIN Plasmid は、スピンカラムを用いて簡単に大腸菌から高純度なプラスミド DNA を 抽出できるキットです。本キットを使用して得られたプラスミド DNA は、制限酵素反応、 形質転換、シークエンスなどの分子生物学実験に使用することができます。 プロトコール 特長 ・自社開発のスピンカラムを採用 ・毒性有機溶媒を使用しない ・大腸菌から高純度なプラスミドを抽出精製可能 ・低い価格設定（180 円 / 回 ） キット内容 IS1 Buffer IS2 Buffer IS3 Buffer ISPW Buffer ISW Buffer ISE Buffer RNase A（100 mg/ml） Spin Column 保存条件： 冷蔵 室温 30 ml 30 ml 40 ml 60 ml 100 ml 10 ml 60μl ×1 本 ×1 本 ×1 本 ×1 本 ×1 本 ×1 本 ×1 本 100 本 大腸菌培養液 【続き】 ろ液を除去 ISPW Buffer 500 μl 遠心 沈殿（大腸菌） 12,000×g, 1 min. ろ液を除去 IS1 Buffer 250 μl ISW Buffer 750 μl 懸濁 遠心 IS2 Buffer 250 μl 12,000×g, 1 min. 転倒混和 ろ液を除去 IS3 Buffer 350 μl 遠心 転倒混和 12,000×g, 1 min. 遠心 12,000×g, 10 min. カラムを 1.5 ml tube の上にのせる。 上清 遠心 10,000×g, 5 min. カラムに上清を 全量添加 ISE Buffer 50 μl 静置 Spin Column RNase A（長期間保存の場合） 上記以外 遠心 12,000×g, 1 min. 【続く】 遠心 12,000×g, 1 min. Plasmid DNA 【実験例】 DNA サイズ別抽出比較（一晩培養した大腸菌培養液 3 ml から抽出した） pUC19 (2,686 bp) 5.0 4.0 6.0 5.0 収 量 (µg) 収 量 (μg) 45.0 20 kbp Plasmid 40.0 7.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 pBR322 (4,361 bp) ISOSPIN A社製品 B社製品 35.0 30.0 3.0 収 量 (µg) 8.0 2.0 25.0 20.0 15.0 1.0 10.0 0.0 5.0 0.0 ISOSPIN A社製品 B社製品 吸光度での定量結果を基に、各サンプル 200 ng をアガロースゲルにアプライした。 10 kbp 10 kbp 4 kbp 2 kbp 1 kbp 4 kbp 2 kbp 1 kbp 10 kbp 4 kbp 2 kbp 1 kbp ISOSPIN A社製品 B社製品 http://www.nippongene.com/ アガロースゲルからの DNA 精製 ISOSPIN Agarose Gel Code No. 製品名 311-07981 容量 ISOSPIN Agarose Gel 100 回用 希望納入価格 19,000 円 ISOSPIN Agarose Gel は、スピンカラムを用いてアガロースゲルから DNA 断片を抽出・精製する ためのキットです。本キットでは、高濃度のアガロースゲル（5％以下）でも使用でき、約 30 分 間で簡単に DNA を回収できます。得られた DNA は、制限酵素反応、シークエンス、クローニング などの分子生物学実験に使用することができます。 特長 キット内容 ISAE Buffer ISW Buffer ISE Buffer Spin Column 75 ml 100 ml 10 ml ×2 本 ×1 本 ×1 本 100 本 保存条件： 冷蔵 Spin Column 室温 上記以外 プロトコール ・自社開発のスピンカラムを採用 ・毒性有機溶媒を使用しない ・高濃度アガロースゲル（ 5% 以下）にも使用可能 ・低い価格設定（190 円 / 回 ） 【実験例 2】 【実験例 1】 アガロースゲル断片 3倍量 ISAE Buffer 0.20 保温（55℃, 10 min.） ゲルを完全溶解 鎖長 ISOSPIN A社製品 0.15 abs 1/4倍量 isopropanol DNA サイズに対する DNA 回収率 得られた DNA 溶液の吸光度測定 0.10 転倒混和 0.05 遠心 12,000×g, 1 min. ろ液を除去 ろ液を除去 ISAE Buffer 500 μl 遠心 12,000×g, 1 min. ISW Buffer 750 μl 遠心 12,000×g, 1 min. 220 240 260 280 Wavelength [ nm ] 300 320 ISOSPIN Agarose Gel により、塩類残留物（230 nm） を含まない高純度な DNA を精製することができた。 100 bp 78 % 500 bp 800 bp 65 % 78 % 3,000 bp 5,000 bp 10,000 bp 20,000 bp 70 % 73 % 63 % 43 % 【実験例 3】回収 DNA のダイレクトシークエンス λDNA カラムに混合液を 全量添加 0.00 回収率 遠心 12,000×g, 5 min. カラムを 1.5 ml tube の上にのせる。 I S OSPIN ろ液を除去 ISE Buffer 50 μl ISOSPIN Agarose Gel により得られた DNA は、ダイレクトシークエンスに問題なく使用することができた。 静置 遠心 12,000×g, 1 min. DNA 溶液 http://www.nippongene.com/ PCR 反応液から PCR 産物を精製 ISOSPIN PCR Product Code No. 315-08001 製品名 ISOSPIN PCR Product 容量 希望納入価格 18,000 円 100 回用 ISOSPIN PCR Product は、PCR 反応液中の PCR 産物を精製するためのキットです。 本キットでは、約 20 分間という短い時間で PCR 反応液から DNA ポリメラーゼ、塩、プライマー、 dNTPs などを取り除き、PCR 産物のみを回収することができます。本キットによって精製された PCR 産物は、各種分子生物学実験に使用することができます。 キット内容 特長 ・自社開発のスピンカラムを採用 ・毒性有機溶媒を使用しない ・低い価格設定（180 円 / 回 ） 【実験例１】 ISB Buffer ISW Buffer ISE Buffer Spin Column 100 ml 100 ml 10 ml Spin Column 上記以外 保存条件： 冷蔵 室温 プロトコール DNA サイズに対する DNA 回収率 鎖長 回収率 ×1 本 ×1 本 ×1 本 100 本 PCR 反応液 5倍量 ISB Buffer 91 % 500 bp 800 bp 88 % 88 % 3,000 bp 5,000 bp 10,000 bp 20,000 bp 85 % 86 % 69 % 58 % 遠心 12,000×g, 1 min. DNA回収率 （%） カラムに全量添加 ろ液を除去 静置 遠心 12,000×g, 1 min. 100 300 250 80 200 60 150 40 100 50 0 0 10 15 30 50 溶出量 ( µl ) 75 100 ＊濃度比率は、50 μl 溶出時の濃度を 100％とした相対比率を示した。 回収率 濃度比率 【実験例３】 PCR 産物 (1.5 kbp) の精製前と精製後 M 遠心 12,000×g, 5 min. カラムを 1.5 ml tube の上にのせる。 ISE Buffer 50 μl 350 20 ろ液を除去 ISW Buffer 750 μl 遠心 12,000×g, 1 min. 120 濃度比率 （%） 【実験例２】 溶出量による DNA 回収率と濃度変動 転倒混和 PCR産物 100 bp C P 2 kbp M : Gene Ladder 100 C : 精製前 P : 精製後 1 kbp 500 bp 400 bp 300 bp 200 bp 100 bp Primer dimer 等の除去が可能である。 2 % Agarose S
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