微量検体を用いた事前検査にも応用可能な迅速アレルギー検査方法福岡大学　医学部講師　芝口　浩智重篤な薬剤アレルギー •  スティーブンス・ジョンソン症候群（SJS） •  中毒性表皮壊死症（TEN） •  薬剤性過敏症症候群（DIHS） •  臓器障害 •  アナフィラキシーショック現行のin vivo（生体での）検査 •  皮膚テスト（スクラッチテスト、パッチテストなど）　•  負荷誘発テスト（皮内テスト、食物負荷試験など）　 In vivo検査の問題点患者への負担が大きいアナフィラキシーショックなど、危険を伴う危険な割に検査精度が低い現行のin vitro（生体外）検査 •  リンパ球幼弱化試験（LTT/DLST）（主に原因薬剤同定方法） •  末梢血白血球ヒスタミン遊離テスト •  抗原特異的IgE抗体検査（CAP, RAST, EXiLE法など）（診断方法） •  HLA遺伝子検査　（SJS, TENの事前検査法）  In vitro検査の問題点結果判明までに時間がかかる必ずしも精度が良いとは言えない対象（となる薬剤など）が限定されている新規迅速アレルギー検査方法とは・・・ •  •  •  •  •  •  迅速簡便 In vitro検査であり、安全検体量が微量（患者への負担が少ない）診断法であり，同定／事前検査法でもある普遍性が期待できる（抗原を限定しない）薬剤アレルギーの発現機序 $ Th1 STAT-1&2/T-bet IL-12 INF-γ IL-4 Naive T Th2 STAT-6/GATA-3 IL-10 TGF-β IL-6 TGF-β IL-4 TGF-β Cellular immunity Autoimmunity Clearance of intracellular pathogens Humoral immunity Allergy Clearance of certain extracellular pathogens RUNX/FOXP-3 Tolerance immune suppression Th17 STAT-3/RORγT Tissue inflammation Autoimmunity Clearance of intracellular pathogens Th9 STAT-6/IRF4 & PU1 Tissue inflammation Allergy Clearance of parasites Treg IL-6 TNF-α Th22 ? Tissue inflammation Antimicrobiaal defenses パーフォリングランザイム Th1 Th2 Th17 IgG IgE B Cell DC ヒスタミン等化学メディエーター開発した迅速アレルギー検査方法の概略 ! + ! B ! ! Th ! T ! 対照群（血清） ! 陽性群（PHA）迅速アレルギー診断法　として・・・ A Velocity (µm/min) %"of"control ++ + 患者 a +/– – b B c d <( (120 120 150 150 200 >(200 Judgment e Distance (µm) ++ %"of"control 患者 a Criterion( (%(of(Control) b c d e + +/– Pa;ent a b c d e Velocity( – – – ++ +/– – Distance( – – – ++ + 原因薬剤同定法　として・・・ Velocity (µm/min) %*of*control ++ 被疑薬 a + +/– – b c d Criterion( (%(of(Control) <( (80 80 90 90 120 >(120 Judgment e Distance (µm) %*of*control ++ 被疑薬 a b c d e Drug a b c d e + +/– Velocity( + ++ +/– + – – Distance( + ++ +/– +/– − 事前検査方法　として・・・ Velocity (µm/min) %.of.control ++ + +/– 抗原濃度 0 – 0.5 5.0 Criterion( (%(of(Control) <( (120 120 140 140 160 >(160 0.5 5.0 50 Judgment 50 (µg/ml) Distance (µm) %.of.control ++ 抗原濃度 0 0.5 5.0 50 (µg/ml) Conc.((µg/ml) 0 + +/– Velocity( +/– +/– ++ – Distance( ++ ++ ++ 典型例(SJS)における原因薬剤同定検査の結果被疑薬同成分薬（一回目）　（二回目）（一回目）　（二回目） DLST （SI 値） 100 100 151 LMT （MI 値） N.D. 110.7 N.D. 本法（% of control） 202.5 ± 51.4 陽性対照陰性対照 90 + N.D. 135.5 293.9 N.D. 194.6 ± 30.5 124.3 ± 45.7 182.9 ± 36.0 各種アレルギー検査とその対象・範囲 IgE( ! HLA( + B ! ! DLST/LTT T ! Th ! ! ! 従来の細胞解析法との比較既存（既知）の一度に一種類を適用被験者の（1）あるいは（2）リンパ球と薬剤等のアレルギーあり（患者）従来法濃健常人A 細胞動態の解析走化性の解析濃度勾配薄健常人のアレルギー等患者Xの好酸球好酸球健常人Bの白血球本法検査試料の対象と作製方法の比較従来の細胞解析法対象外【アレルギー検査】被験者から採血 →被験者の好酸球分離 →既知の走化性因子に対する被験者の細胞走化性を解析／健常人の細胞走化性との比較アレルギー発現の確認患者本法アレルギー症状発現前アレルギー症状発現後【事前検査】被験者から採血 →リンパ球分離 →使用予定薬剤（／PHA）と反応 →反応液（検査試料／対照） →健常人の白血球に対する細胞動態を解析アレルギーの危険性予測【原因薬剤同定検査】被験者から採血 →リンパ球分離 →被疑薬剤（／PHA）と反応 →反応液（検査試料／対照） →健常人の白血球に対する細胞動態を解析アレルギーの原因薬剤同定【迅速アレルギー検査】被験者から採血 →血清分離（検査試料／健常の対照） →健常人の白血球に対する細胞動態を解析アレルギー発現の確認新規アレルギー検査の流れ → " → 想定される用途 •  アレルギー検査の第一選択肢現在汎用されているアレルギー検査に先立って行うことで迅速にアレルギーか否かの判断が行える •  事前検査・個別化医療各種疾患の薬物治療時に大きな問題となる予期せぬ重篤な薬剤アレルギーの事前回避と安全な薬剤の選択を可能にする •  新規創薬システム新規のアレルギー治療薬の開発に応用することが可能実用化に向けた課題 •  症例数が少ない（特に，皮膚症状を伴う典型例） →さらに典型例で従来のDLSTなどとの比較が必要 •  ヒト白血球と同等の反応性を示す細胞株の探索 →民間検査機関等での広範な普及のためには取扱いの容易な細胞株での検査が望ましい企業への期待 •  検査に最適な細胞株の探索・作製に関して，共同研究を希望 •  本検査方法の技術移転を希望本法に関する知的財産権 •  発明の名称：迅速アレルギー検査方法 •  出願番号：特願2013-‐025991 PCT/JP2014/053259 •  出願人：福岡大学 •  発明者：芝口浩智，安高勇気，二神幸次郎お問い合わせ先福岡大学産学官連携センター産学官連携コーディネーター　客員教授　芳賀　慶一郎 TEL: 092-‐871-‐6631 FAX: 092-‐866-‐2308 E-‐mail: [email protected]‐u.ac.jp