カイネティック・クロマトグラフィーライカート7500DC シンプルでユーザーフレンドリー HPLCで分子間相互作用を解析ポンプインジェクターバイオセンサー SPR検出器 52㎝各モジュールをHPLC用の PEEKチューブで接続 33㎝ 65㎝ 7.7kg 驚きの省スペース軽量モジュール 1 据付・操作・保守がとても容易で、維持コスト削減に大いに貢献 ★チップの取付・交換が非常に簡単 ★フローセルは取り外せるため洗浄やメンテナンスが容易で、目詰まりなどは発生しない。センサーチップを載せフローセルを上からセットで準備完了 ★配管はＰＥＥＫチューブで簡単・自由・柔軟 ★ウォーターズやアジレント社でも採用されている、HPLC用のオートサンプラー ★DMSO100％の有機溶媒も問題なく使用可能 ★入手が容易で、リーゼナブルな価格 ★バイアルなどの消耗品や部品も、安価で入手がとても容易７５００DCの特徴１．世界最高感度２．細胞・脂質など、アプリケーションが豊富３．小さく、簡単操作そして保守費用も最低限４．システム及びチップが経済的な価格５．100％のDMSO使用可能 2 高感度ベースラインノイズをビアコアの半分以下に低減ノイズレベル（0.05μRIU) ベースラインドリフト（0.01μRIU/min）いつでも安定した分析・測定結果をお約束します。高感度 7500DCでビアコアでは限界となる分子量200の場合リガンド: 炭酸脱水酵素 CA II （MW 約３０K）アナライト: 4-Carboxybenzene Sulfonamide (200 Da) 酵素阻害剤 Dextran デキストラン・チップにＣＡⅡをアミノカップリングで固定化 3 高感度ビアコアに比べて５～20倍の高感度測定を実現５RU以下の低濃度でも確実に検出可能分子量 200Ｄａ 0.16μM ビアコアでは不可能な分子量９５Ｄａを検出高感度２RU以下でも検出可能な高感度を実現 4 細胞をリガンドにして低分子化合物細胞リガンド:A431ヒト上皮様細胞癌由来細胞株アナライト: エピガロカテキン MW４５８Da カテキンは細胞のアポトーシスを誘導したり、がん細胞の増殖抑制効果を有する。細胞細胞の固定抗EGFR（上皮成長因子受容体）抗体を固定化 EGFR高発現のA431細胞（PBS浮遊液、1x106細胞/mL をリガンドとして固定 175µL）細胞が固定されたことが確認できます 5 固定されたA431細胞と 500Da以下の化合物のインタラクション細胞 50µM、100µM、250µMの順にカテキンを175µLをインジェクト結合速度定数（Ka）：17.38（1/Ms）解離速度定数（Kd）：8.8x10-4（1/s）解離定数（KD）： 50.785（µM）最大結合量（Rmax） 67.6（µRIU）解離速度定数が低いことから、カテキンはA431細胞と親和性が高いことが示唆されました。ノイズ、ドリフトの無いセンサグラムに御注目細胞 HEK細胞を固定してフィブリノーゲン（200nM)を注入 HEK細胞の固定化 HEK細胞とフィブリノーゲンの解析結果 6 HEK細胞には2か所のバイディングサイトがあることが判明細胞 ka1 = 2.40 e3 M-1s-1 kd1 = 8.51 e-3 s-1 ka2 = 9.74 e3 M-1s-1 KD1 = 3.54 mM kd2 = 2.57 e-4 s-1 KD2 = 26.4 nM Surface Heterogeneity Model 脂質リボソームを固定しリン酸化タンパクを注入 PS Vesicles Capture on Phytosphingosine Surface リン酸化タンパク質：アナライト 15000 Sample Channel 14500 Reference Channel 14000 二重膜構造のリポゾーム Response (uRIU) 13500 13000 3260 uRIU of PS Vesicles on surface 12500 12000 11500 11000 10500 10000 10550 アルキル基修飾された疎水性チップ 11550 12550 13550 14550 15550 Time (sec) リポゾームが固定された事が分かる 7 脂質リポゾームとタンパク質との親和力を解析リン酸化されたタンパク質 KD = 3.92 nM KD = 467 pM リン酸化されていないタンパク質の方が高い親和力を有する Gタンパク質サブユニットを固定して化合物とのインタラクション解析タンパク質アナライトリガンドで固定 8 タンパク質 • • Gタンパク質と化合物の解析結果 Galleinと372は解離速度が遅いために、リジェネレーション無しで続けてアナライトを注入。この場合、自動で補正する機能が7500DCの解析ソフトにある。 M201は他に比べて10倍も解離速度が速いので、阻害剤としては不適当と判断された。 A.M.P.B. Seneviratne; Michael Burroughs; Ernest Giralt; Alan V. Smrcka. Proteins and Proteomics 2011,1814,1210-1218. リーゼナブルな価格のバイオセンサーがラインナップ Planar SAM 低キャパシティアミノカップリング Hydrophobic Dextran Streptavidin 500K Da カルボキシデキストラン 1個入り ¥15,000 500K Da カルボキシデキストラン 5個入り ¥65,000 金コーティング 1個入り ¥6,000 1個入り ¥13,000 スライドガラス His-tag 用ニッケル Protein A Ni(NTA) 高キャパシティアミノカップリング良く使われるセンサーチップの価格例プロテインＡ￥20,000 9 Scrubber解析ソフトが標準付属 Scrubberはユタ大学のＤｒ．ムシカによって開発された世界で最もポピュラーなカイネティック解析ソフトウェアです経済的な価格も高性能の一つです ★室温－10℃～70℃の温調 ★解析ソフトウェアー ★バックグラウンド補正すべての機能が標準装備 SR7500DC 価格リサーチ・パフォーマンス・モデル；オートサンプラー無 11,800,000円ハイスループット・モデル；オートサンプラー付 13,600,000円 10