azione c.3 sorveglianza sanitaria

Stato sanitario delle popolazioni
gambericole del Friuli Venezia Giulia.
Amedeo Manfrin e Tobia Pretto – IZSVe
Daniele Cassin e Francesco Acri - CNR ISMAR
Aggiornamento personale ETP
Udine/Pordenone 14-15 marzo 2014
• Il gambero rosso della Louisiana è in grado di sopportare forti
stress ambientali: prosciugamento, temperature estreme, bassi
livelli di ossigeno e alta concentrazione di agenti inquinanti.
• È anche capace di accumulare nel proprio organismo sostanze
inquinanti (metalli pesanti) e tossine prodotte da alghe
microscopiche, per cui i predatori di questo animale, uomo
compreso, possono assorbire i contaminanti eventualmente
presenti nei suoi tessuti.
• P. clarkii risulta spesso portatore di Aphanomyces astaci, un
fungo che causa la peste del gambero e a cui risulta molto
sensibile Austropotamobius pallipes.
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Patogeni per l’uomo (segnalazioni sporadiche)
associati agli organismi acquatici.
Salmonella spp.,Vibrio spp.,Aeromonas spp……per ingestione.
Francisella tularensis, Vibrio vulnificus, Micobatteri atipici…….per contatto.
Micobatteriosi
Vibriosi
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AZIONE C.3 SORVEGLIANZA SANITARIA
Identificazione dei patogeni Aphanomyces astaci e
White Spot Syndrome Virus in Procambarus clarkii
 5 siti testati:
 231 esemplari analizzati per A. astaci, 3 siti positivi con
prevalenza variabile (3,0-69,2%).
 58 esemplari analizzati per WSSV, tutti negativi.
AZIONE C.3 SORVEGLIANZA SANITARIA
Valutazione delle popolazioni autoctone di gambero di fiume
Austropotamobius pallipes per la presenza di Aphanomyces astaci.
Esemplari sofferenti o con lesioni melanizzate prelevati durante i
monitoraggi da 18 siti (65 soggetti testati):
 6 siti presentano esemplari positivi per peste del gambero in
real-time PCR.
 Non si rilevano fenomeni di mortalità massiva della popolazione.
 Probabile presenza di un ceppo di A.astaci a bassa patogenicità
Non è stata rilevata macroscopicamente la presenza di Thelohania
contejeani, agente della malattia della porcellana, nelle popolazioni
autoctone monitorate
real-time PCR
(screening)
PCR end-point
(confirmation)
CP 1
CP 2
Neg
Pos Marker
100 bp
Primer
BO42F :
Primer forward: AphAstITS-39F:
5’AAGGCTTGTGCTGGGATGTT3’
Primer reverse: AphAstITS-97R:
5’CTTCTTGCGAAACCTTCTGCTA3’
5’ GCTTGTGCTGAGGATGTTCT 3’
BO640R :
Probe: AphAstITS-60T
5’-6-FAM-TTCGGGACGACCCMG-BNF-Q-3’
5’ CTATCCGACTCCGCATTCTG 3’
Reference: Manual of Diagnostic Test for Aquatic Animals – OIE World
Organization for Animal Health; ed. 2012, chapter 2.2.1; pp: 101-118.
Diffusione di P. clarkii
7
Focolai di peste
8
BIG BANG……..
Segnalata in gennaio una mortalità ingravescente
nei riproduttori stabulati ad Amaro…….23 femmine
e 7 maschi su 513 soggetti morti al 31.12.2013.
Bloccata ogni movimentazione degli animali ed
intensificate le norme di biosicurezza.
Sopraluogo il 29.01.2014 (Manfrin,
Pretto, De Luise, Zanetti, Cossa)
9
10
Situazione al 10.02.2014
V1
V2
V3
V4
V5
V6
V6
V7
V7
V8
V9
V9
V10
V10
V12
V12
VX
TOTALE
PALAR/GORGONS
GORGONS/PALAR
CHIARZO'
GORGONS/PALAR
RIO GAMBERI/INGLAGNA
VALLI DEL NATISONE
VALLI DEL NATISONE
CHIARZO'
CHIARZO'
RIO GAMBERI/INGLAGNA/CHIARZO'
INGLAGNA/RIO GAMBERI
INGLAGNA/RIO GAMBERI
GORGONS/GRIVO'
GORGONS/GRIVO'
GORGONS/GRIVO'
GORGONS/GRIVO'
VALCALDA
11
8
2
4
1
2
4
5
1
6
1
7
5
11
3
1
7
80
11F
8F
1F-1M
1F-3M
1M
2F
4F
1F-4M
1M
6F
1F
7M
3F
9F-2M
2F-1M
1F
6F-1ESUVIA
56 F / 24 M
Totale: 80 morti su 513 riproduttori = 15,6 %
11
Focolaio peste ad Amaro
Segnalato focolaio ad ASL e servizi veterinari
regionali per notifica OIE.
Alcuni soggetti positivi anche per Aeromonas
bestiarium e A. hydrophila dall’emolinfa.
Iniziati dal 30.01.2014 trattamenti con flumequina
50 % per bagno ( 5 ml in 10 litri pari a 250 ppm
per 15 minuti).
Discreti risultati, ma persiste una mortalità cronica
(fino al 10 marzo circa 200 soggetti = 38.9 %)
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Focolaio peste ad Amaro
Pettinate le femmine per far schiudere le uova in
bottiglie di Mac Donald dopo disinfezione con
formalina.
Isolati in purezza su RGY agar (River water Glucose
Yeast extract Agar) ceppi di Aphanomyces astaci da
soggetti con lesioni e presenza di ife microscopicamente apprezzabili.
Missione del dr. Pretto presso l’orto botanico di
Madrid dal Prof. Irubeondo per coltivazione, purificazione e tipizzazione genetica del ceppo italiano (o
friulano??).
13
Working in progress
Continuare la terapia con flumequina per ridurre le infezioni
secondarie.
Arrivare alla tipizzazione genetica anche dei precedenti
campioni positivi (monitoraggio 2011-13).
Messa a punto di una tecnica di screening non invasiva
(tamponi cutanei o biopsie mirate) per identificare i portatori
prima di introdurli in impianto per la riproduzione o di
spostarli da un corso d’acqua all’altro.
Testare i giovanili per essere sicuri che siano negativi prima
del rilascio.
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AZIONE C.3 SORVEGLIANZA SANITARIA
Esami batteriologici in P.clarkii sulla parte edibile
(25 g di muscolo addominale e intestino)
4 siti testati:
 Ricerca Salmonella spp.
Tutti negativi
 Ricerca Vibrio spp.
1 sito positivo per Vibrio parahaemolyticus
AZIONE C.3 SORVEGLIANZA SANITARIA
Ricerca metalli pesanti (IZSVe):
Cadmio Cd
Mercurio Hg
Piombo Pb
Matrici:
Addome (muscolo + intestino)
Epatopancreas
4 siti analizzati
Pool di circa 30
esemplari ≅ 50 g
.
Ricerca metalli pesanti CNR-ISMAR
P. clarkii
20
Stazioni di campionamento
20
20 pool (muscolo + intestino) da 5 individui per sesso
Cd
Ad Alberoni e Campomolle i livelli di
cadmio e piombo sono
significativamente più elevati che a
Casette e Villutta, evidenziando un
possibile arricchimento di questi due
metalli nei sedimenti di queste
località.; le concentrazioni rilevate
sono tuttavia decisamente inferiori ai
limiti fissati dalle norme europee*.
*regolamento CE N. 1881/2006
Pb
Hg
Plausibilmente gli animali catturati in questo sito hanno
accumulato l’elemento dai sedimenti naturalmente ricchi
dell’Isonzo. Infatti, una delle principali cause di tali concentrazioni, oltre alla indubbia forte pressione antropica,
sono i giacimenti minerari situati nell’entroterra. Anche
nel caso del mercurio, tuttavia, le concentrazioni rilevate
sono decisamente inferiori ai limiti fissati dalle norme
europee succitate.
Partecipazione a
CrayCro 2013,
Rovinj
26-29.09.13
Mai abbassare la guardia!!!!
Grazie per l’attenzione
06.03.2014
23

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