Drie maandelijkse uitgave LMMI St. Elisabeth Ziekenhuis Tilburg juni 2014 Voorwoord In deze editie een bijdrage van de afdeling Immunologie over hun nieuwe aanwinsten. De redactie. Nieuwe aanwinsten op de immunologie Door Sabine Maes Binnen de medische microbiologie, is immunologie de afdeling waar de automatisering niet meer weg te denken is. Snellere resultaten, uitbreiding van het aanbod testen en de beste kwaliteitbewaking zorgen ervoor dat we steeds op zoek zijn naar verbetering van onze huidige apparatuur. De fluorescentie- en de blottechnieken ondergaan binnenkort een nieuwe vergevorderde automatisering, het betreft een heel pakket. Dit pakket bestaat uit een nieuwe blot-automaat (EUROBlotOne), een nieuwe fluorescentie automaat (IF-Sprinter) en een gehele nieuwe techniek van microscopisch aflezen, nl. automatisch evaluatie van de ANAfluorescentiebeelden met de EUROPattern microscoop. Heel het pakket wordt aangestuurd met de EUROLabOffice-software van de firma Euroimmuun. Het software pakket EUROLabOffice IF-Sprinter (ELO) is de online middleware verbinding Microscoop tussen GLIMS en de EUROPattern verschillende werkplekken auto-immuniteit EUROLabOffice GLIMS / infectieserologie. ELO Het ELO kan EUROBlotOne gekoppeld worden met de IF sprinter, de EUROBlotOne EUROLine Scan automaat, Eurolinescan en EUROPattern. ELO genereert de werklijsten voor de verschillende apparaten. De apparaten voeren de testen uit en de verkregen resultaten worden terug naar ELO gestuurd. ELO stuurt de resultaten weer terug naar GLIMS. ELO heeft ook een archiverende functie. Het bewaard naast de resultaten van alle patiënten ook de gemaakte foto’s van de blots en de fluorescentiebeelden van de EUROPattern. Op die manier kan op elk moment de historie van elke patiënt worden opgevraagd. Met EUROLabOffice kan volledig papierloos worden gewerkt. EUROBlotOne Zowel de Western- als de Lineblot werden tot op het heden uitgevoerd op de AutoLia van Innogenetics. Gezien het grote aantal monsters en toenemend aantal verschillende blots werd er gekozen voor een 2de blotapparaat; nl. de EUROBlotOne van de firma Euroimmuun. 2014 juni 1 EuroblotOne kan zowel de infectie als de auto-immuun blots door elkaar uitvoeren. In één run kunnen 44 blots worden ingezet. Dagelijks worden de volgende blots uitgevoerd: - EBV IgG/ IgM - Borrelia IgG/ IgM - Yersinia IgG/IgA - ENA. De EUROBlotOne is een blotautomaat dat het hele testproces van monsteridentificatie tot het aflezen van resultaten, zonder tussenkomst van de analist, uitvoert. Werklijsten worden aangemaakt in ELO en doorgestuurd naar de EUROBlotOne. Stapsgewijs geeft de software van de EUROBlotOne aan waar buffers en strips geplaatst moeten worden. Monsteridentificatie gebeurt met behulp van de barcodereader. Het apparaat begint met het maken van de monsterverdunningen. Na incubatie met het serum wast het apparaat alle strips met wasbuffer. Dan volgt de incubatie met het conjugaat. Na het wassen volgt de substraatstap. Na incubatie wordt het substraat weggewassen. Het apparaat gaat nu de strips drogen, dit duurt één uur. Na het drogen maakt het apparaat van alle strips een foto. Deze foto’s worden aangeboden aan de software Eurolinescan software. De foto’s worden ingescand. Per test en per strip worden de waargenomen bandjes gemeten en geëvalueerd. Borrelia IgM/IgG -, Yersinia IgA/IgG - , EBV IgM/ IgG - en ENA blots kunnen in één en dezelfde run worden uitgevoerd maar moeten per test worden beoordeeld. Na de evaluatie controleert de analist of de test goed verlopen is. Dit verloopt volgens afgesproken protocol waarbij er gelet wordt op o.a. controlebandjes, kleurstofvlekken, enz. Tenslotte worden de resultaten door Eurolinescan via ELO naar GLIMS doorgestuurd. IF-Sprinter De IF-Sprinter is een volautomatisch systeem voor de uitvoering van de indirecte fluorescentietest. Het apparaat is de opvolger van de DAS AP16 IF Plus. Het is ontworpen om IF-glaasjes te pipetteren, te incuberen en te wassen zonder tussenkomst van een analist. 2014 juni 2 De IF-Sprinter kan 96 monsters per run testen met een maximum capaciteit van 15 IF-glaasjes. Dagelijks wordt er met de IF-Sprinter de volgende auto-immuun antistoffen bepaald: - ANA en titer bepaling - ANCA en titer bepaling - Endomycium As - Mitochondrien As. - LKM As. - Parietale Cellen As. - Gladde Spier As. - Reticuline As. - Hart as. De werklijst, met het aanbod aan monsters, wordt aangemaakt in EurolabOffice en doorgestuurd naar de IF-Sprinter. Na het binnenhalen van de werklijst, worden de benodigde materialen op de aangegeven posities op de werktafel geplaatst. Monsteridentificatie gebeurt met behulp van de barcodereader. De IF-Sprinter biedt de mogelijkheid om van verschillende testen meerdere verdunningen tegelijk in te zetten. De IF-Sprinter zal de serumverdunningen maken en deze volgens (interne) werklijst op de IF-glaasjes pipetteren. Na incubatie worden de glaasjes gewassen en de verschillende conjugaten gepipetteerd. Na incubatie volgt weer een wasstap, waarna na de laatste wasstap, de glaasjes in de wasbuffer blijven staan zodat deze niet kunnen indrogen. De analist kan nu de preparaten insluiten. EUROPattern Microscoop Deze automatische microscoop wordt aangestuurd door Euroimmun-software en is in staat fluorescentiebeelden te identificeren. De glaasjes worden geladen in het magazijn van de microscoop. Het scherp stellen van de beelden gebeurt door gebruik te maken van propidiumiodide. Deze kleurstof is gebonden aan het FITC-gelabeld conjugaat. Propidiumiodide kleurt de cellen rood. In tegenstelling tot fluorescentie (dooft uit) vermindert intensiteitsterkte niet, tijdens het scherpstellen van de beelden. De plaats op het glaasje waar wordt gemeten, wordt mathematisch bepaald. Er moeten voldoende cellen en mitotische cellen (=cellen in deling) aanwezig zijn. 2014 juni 3 Het herkennen van de cellen gebeurt door het beeld te screenen aan de hand van een 150 kenmerken. Aan de hand van fluorescentiesterkte, berekent de software een titer. De computer geeft uiteindelijk een resultaat weer in percentages, bv. Pos Patern granular 1:320 61.5% Patern homogen 1:320 96.1% Er worden twee foto’s gemaakt. Deze foto’s worden opgeslagen in het archief van EUROLabOffice. De analist kijkt de beelden na, valideert de resultaten van de computer. ELO stuurt de resultaten door naar GLIMS. Voorlopig wordt enkel ANA op deze wijze bepaald. Ook de ANCA zal op korte termijn op deze wijze bepaald gaan worden. Gebruikte afkortingen: IF: immunoflurorescentie ANA: anti-nucleaire antistoffen ELO: Eurolaboffice GLIMS: General Laboratory Information Management System EBV: Epstein Barr virus ENA: extraheerbare nucleaire antigenen ANCA: anti-neutrofiele cytoplasmatische antistoffen LKM: liver/kidney microsomal antigens FITC: fluoresceïne isothiocianaat Kopij voor onze nieuwsbrief!!! Heb je ideeën voor een artikel voor de inhoudelijke nieuwsbrief, wij ontvangen ze graag. Deadline kwartaaleditie: 28 augustus 2014 Graag mailen naar [email protected] 2014 juni 4