Ion 16S ™ Metagenomics Kit

Ion 16S™ Metagenomics Kit
簡易操作ガイド
2015.1 rev1.0
Ion PGM™ System
Ion PGM™ Sequencing 400 Kit
Ion PGM™ Template OT2 400 Kit
Ion Reporter™ 4.2.1
1
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Ion 16S™ Metagenomics Kit
Catalog Number A26216
Publication Number MAN0010799
Revision A.0
※ 本ガイドは上記の英文プロトコルを簡易的に紹介したものです
必ず英文プロトコルで詳細をご確認下さい
2
目次






Ion 16S™ Metagenomics Kit 概要
• Ion 16S™ Metagenomics Kit 構成品
p. 5
• 必要物品
p. 6
• ワークフロー
p. 7
16S rRNA 超可変領域の増幅
• 16S rRNA 超可変領域の増幅
p. 11
• 増幅産物の精製
p. 12
• ライブラリ作製に使用するPCR反応液の投入量の算出
p. 13
ライブラリ調製
• エンドリペア
p. 15
• アダプターライゲーション
p. 16
• ライブラリ精製
p. 17
ライブラリ定量
• リアルタイムPCRで定量する場合
p. 19
• Agilent® 2100 Bioanalyzer®で定量する場合
p. 21
シーケンスおよび Ion Reporter™ での解析
• テンプレート調製およびシーケンス
p. 25
• Ion Reporter™ での解析
p. 26
• Ion Reporter™ 解析結果の閲覧方法
p. 27
その他
• 関連資料とサポート
p. 29
• 安全情報
p. 30
3
Ion 16S™ Metagenomics Kit 概要
4
Ion 16S™ Metagenomics Kit 構成品
Ion 16S™ Metagenomics Kit （A26216）構成品
※ ライブラリ作製には別途 Ion Plus Fragment Library Kit （Cat. No. 4471252）が必要（参照：p.8）
2X Environmental Master Mix
16S Primer Set V2–4–8
E. coli DNA control
DNA Dilution Buffer
Negative Control
16S Primer Set V3–6, 7–9
5
必要物品
Ion 16S™ Metagenomics Kitでのライブラリ作製に必要な試薬
 アンプリコン作製
Ion 16S™ Metagenomics Kit (Cat. no. A26216)
 ライブラリ作製、テンプレート調製，シーケンス
( p.25 「半導体チップの選択」参照)
 ライブラリ定量（下記いずれか）
Agilent® High Sensitivity DNA Kit （5067-4626； Agilent Technologies社製品）
Ion Universal Library Quantitation Kit (Cat. no. A26217) ※ 下表は構成品
 その他試薬
6
Ion 16S™ Metagenomics Kit に必要な機器・器具・消耗品
7
ワークフロー
16S rRNA メタゲノム解析のワークフロー
※ 400bp Kit 対応製品のため、Ion Chef™は使用不可
16S rRNA超可
変領域の増幅
ライブラリ作製
テンプレート調製
シーケンス
データ解析
2.5 時間
4.0 時間
8.5 時間
3.7~7.3時間
数時間～
Ion 16S™
Metagenomics
Kit
Ion Plus
Fragment Library
Kit
Ion
OneTouch™ 2
System
Ion Xpress™
Barcode
Adapters
Ion PGM™
Template OT2
400 Kit
Ion PGM™
Sequencer
Ion 314™, 316™
or 318™ Chip
Kit
Ion Reporter™
Software 16S
Metagenomics
Workflow
Ion PGM™
Sequencing
400 Kit
16S™ Metagenomics Kit コスト概算例
使用キット
5サンプル時
25サンプル時
50サンプル時
(Ion 314™ Chip v2)
(Ion 316™ Chip v2)
(Ion 318™ Chip v2)
Ion 16S™ Metagenomics Kit, 100反応
¥ 5,000
¥ 25,000
¥ 50,000
¥ 16,250
¥ 81,250
¥ 162,500
¥ 4,500
¥ 22,500
¥ 45,000
Ion
Barcode Adaptors 1-16,
Ion PGM™ Template OT2 400 Kit, 10反応
（¥6,000）
¥ 15,000
―
¥ 15,000
―
¥ 15,000
Ion PGM™ Sequencing 400 Kit, 4反応（もしくはIon PGM™
Hi-Q™ Sequencing Kit ）
Ion 314™ Chip Kit v2, 8枚
¥ 12,000
¥ 12,000
¥ 12,000
¥ 20,000
―
―
Ion Plus Fragment Library Kit,
10ライブラリ*1
Ion Xpress™ Barcode Adaptors 1-96, 960反応
Xpress™
160反応*2
Ion
316™
Chip Kit v2, 4枚
―
¥ 40,000
―
Ion
318™
Chip Kit v2, 4枚
―
―
¥50,000
１ランのコスト
¥ 72,750～
¥ 195,750～
¥ 334,500～
検体あたりのコスト*3
¥14,550～
¥7,830～
¥6,690～
*1 : 本キット使用時は≦20ライブラリ
*2 : 同一ランでシーケンスする検体数が16以下であればIon Xpress™ Barcode Adaptors 1-16を使用可能
*3 : その他クオリティチェック用の試薬コストが加算される
8
ライブラリ作製フロー
gDNA上
16S 領域
V1
V2
V3
V4
V5
V6
V7
V8
V9
① V2-V4–V8 Primer Set
Ion16S™
Metagenomics Kit
ターゲット領域の増幅
② V3-V6・7-V9 Primer Set
精製・定量
エンドリペア
※ P：リン酸基
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
アダプター（どちらか選択）
A
Barcode
P1
P P
P P
P
P
P
アダプター付加
（バーコード付加）
P1
ライブラリ精製
ライブラリ増幅
Agilent® 2100 Bioanalyzer® 定量
リアルタイムPCR定量
9
16S rRNA 超可変領域の増幅
10
16S rRNA 超可変領域の増幅
準備

gDNA投入量とサイクル数の確認
※ gDNA抽出方法は対象試料毎に異なるので、適切な方法を選択
※ 微生物ゲノムの含有量が少ないサンプルについては最大30サイクルに設定する

サーマルサイクラー（あらかじめ電源を入れ、プログラムの設定をしておく）

Ion 16S™ Metagenomics Kit の試薬をすべて氷上で解凍

0.2-mL PCR チューブもしくは 96ウェルプレート
16S rRNA 超可変領域の増幅
①
下表のようにgDNAおよび試薬を混合する
（1） V2-4-8 Primer Set もしくは V3-V6・7-V9 Primer Set （Primer Set毎に２本のチューブで増幅）
（2）：コントロールゲノム（Ion 16S™ Metagenomics Kit 同梱）は20倍希釈した1.5 ng/μLのものを2 μL使用
※ 各試薬は5秒ボルテックスミキサーで混合し、パルススピンをしてから使用
②
下記のプログラムをサーマルサイクラーに設定し、PCR増幅を行う
※ 微生物菌叢以外のDNAが混入している可能性のあるサンプルについては
PCR後にAgilent® 2100 Bioanalyzer® もしくは2% アガロースゲルでPCR産物の増幅を確認（任意）
11
増幅産物の精製
試薬，物品の準備

DNase/RNase-Free Water (Nuclease-Free Water)

AMPure® XP
30分以上前に室温に戻し、よく懸濁してから使用

1.5-mL Non-Stick RNase-free Microfuge Tubes （P/N AM12450）

70% エタノール（用時調製）
※ 70%以下のエタノールを使用するとサンプルをロスする可能性がある

1.5-mL用マグネットスタンド
増幅産物の精製
①
AMPure® XPの原液をボルテックスミキサーでよく撹拌し、下表を参考に新しい1.5 mLチューブ内で
PCR反応溶液と混合する
サンプル毎の細菌種数
混合量
例
V2-4-8 Primer Set PCR反応溶液
X μL
20 μL
X μL
※ V2-4-8 Primer Set
PCR反応溶液と等量
V3-V6・7-V9 Primer Set PCR反応溶液
X ×2×1.8 μL
Agencourt® AMPure® XP Reagent
20 μL
72 μL
②
①の混合液を数秒ボルテックスミキサーで混合し、軽くスピンダウン
③
5分間インキュベート（室温）し、マグネットスタンドにセット
④
約3分静置し、混合液が透明になったら上清を除去
⑤
70% エタノール 300 µL を加え水平にチューブを回転させ洗浄（30秒）
⑥
上清を除去（静置し、透明になってから除去）
⑦
⑤，⑥のステップを繰返す
⑧
軽くスピンダウン後、再度マグネットスタンドにセットし、20-μLのピペッターでエタノールを完全に除去
⑨
チューブのふたをあけ、マグネットスタンドに立てたまま室温で4分間風乾
※ 乾かしすぎないように注意（5分以上置かないこと）
⑩
Nuclease-Free Water 15 µL を添加し、ボルテックスミキサーで10～15秒間混合
⑪ 1分間室温にてインキュベート
⑫ 2秒間遠心後、マグネットスタンドにセット（約1分静置、透明になるまで）
⑬ 上清を新しい 1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
※ 上清を捨てないこと
STOPPING POINT（任意）： ‐30℃～ ‐10℃で保存
12
ライブラリ作製に使用するPCR反応液の投入量の算出
次のライブラリ作製のステップで使用する増幅産物の投入量は10～100 ng
下記の1，2のどちらかの方法で精製済みのPCR反応液を定量し、投入量を算出する
1. Agilent® 2100 Bioanalyzer® での定量
① 2 μLの精製済みPCR反応液をLow TEで10倍希釈する
② Agilent® 2100 Bioanalyzer® のHigh Sensitivity DNA Kit を使用してPCR反応液を定量
③ ライブラリ作製に投入するPCR反応液の量を算出
【計算式】
・PCR反応液濃度 (ng/μL)
Bioanalyzer®算出濃度(pg/μL)×希釈倍率
＝
1000
・ライブラリ作製に使用するPCR反応液の投入量(μL) ＝DNA投入量（ng） ÷ PCR反応液濃度 (ng/μL)
（例）
50 (ng) ÷20.18 (ng/μL) = 2.5 μL
2. Quant-iT™ dsDNA Assay Kit もしくはQubit® dsDNA HS Assay Kit での定量
①
Qubit® 2.0 Fluorometer を使用して、精製済みのPCR反応液2 μLを定量
②
ライブラリ作製に投入するPCR反応液の量を算出
【計算式】
・ライブラリ作製に使用するPCR反応液の量(μL) ＝DNA投入量（ng） ÷ PCR反応液濃度 (ng/μL)
13
ライブラリ調製
14
エンドリペア
試薬，物品の準備

精製済みPCR反応液
凍結している場合は、氷上で解凍してから使用

5X End Repair Buffer
氷上で解凍してから使用

1.5-mL Non-Stick RNase-free Microfuge Tubes （P/N AM12450）

AMPure® XP
30分以上前に室温に戻し、よく懸濁してから使用

70% エタノール（用時調製）
※ 70%以下のエタノールを使用するとサンプルをロスする可能性がある

1.5-mL用もしくは 96ウェルプレート用マグネットスタンド
PCR増幅産物のエンドリペア
①
下表を参考に反応溶液を1.5 mL DNA低吸着チューブ内で混合する
②
泡立てないようにピペッティングでよく混合し、20分間インキュベート（室温）
③
AMPure® XP 180 μL （反応液の1.8倍量）を添加し、数秒間ボルテックスミキサーでよく混合
④
軽くスピンダウンして、5分間インキュベート（室温）
⑤
マグネットスタンドに立て、約3分静置し、混合液が透明になったら上清を除去
⑥
70% エタノール 500 µL を加えマグネットスタンドに立てたまま水平にチューブを回転させて洗浄（30秒）
⑦
上清を除去（静置し、透明になってから除去）
⑧
⑦，⑧のステップを繰返す
⑨
軽くスピンダウン後、再度マグネットスタンドにセットし、20-μLのピペッターでエタノールを完全に除去
⑩ チューブのふたをあけ、マグネットスタンドに立てたまま室温で4分間風乾
※ 乾かしすぎないように注意（5分以上置かないこと）
⑪ Low TE 25 µL を添加し、ボルテックスミキサーで5～10秒間混合し、軽くスピンダウン
⑫ 1分間インキュベート（室温）し、マグネットスタンドに立てる
⑬
上清が透明になるまで静置（約1分）し、上清を新しい1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
※ 上清を捨てない
STOPPING POINT （任意）： ‐30℃ ～ ‐10℃で保存
15
アダプターライゲーション
試薬，物品の準備

エンドリペア済み反応液
凍結している場合は、氷上で解凍してから使用

10X Ligase Buffer, Adapter（もしくはIon P1 Adapter）, dNTP Mix
氷上で解凍してから使用

（任意）Ion Xpress™ Barcode Adapter X

0.2-mL PCR チューブもしくは 96ウェルプレート

サーマルサイクラー（電源を入れておく）

1.5-mL Non-Stick RNase-free Microfuge Tubes （P/N AM12450）

AMPure® XP
30分以上前に室温に戻し、よく懸濁してから使用

70% エタノール（用時調製）
※ 70%以下のエタノールを使用するとサンプルをロスする可能性がある

1.5-mL用マグネットスタンド
アダプターライゲーションとニックリペア
①
下表を参考に反応溶液を0.2-mL PCR チューブもしくは 96ウェルプレート内でサンプル毎に混合する
①
サーマルサイクラーを用い、下表の条件で反応溶液をニックリペアおよびライゲーション反応をさせる
③
反応液を新しい1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
※ 速やかに次の「ライブラリ精製」のステップを行う
16
ライブラリ精製
アダプターライゲーション反応液の精製
①
AMPure® XP 140 μL （反応液の1.4倍量）を添加し、数秒間ボルテックスミキサーでよく混合
②
軽くスピンダウンして、5分間インキュベート（室温）
③
マグネットスタンドに立て、約3分静置し、混合液が透明になったら上清を除去
④
70% エタノール 500 µL を加えマグネットスタンドに立てたまま水平にチューブを回転させ洗浄（30秒）
⑤
上清を除去（静置し、透明になってから除去）
⑥
④，⑤のステップを繰返す
⑦
軽くスピンダウン後、再度マグネットスタンドにセットし、20-μLのピペッターでエタノールを完全に除去
⑧
チューブのふたをあけ、マグネットスタンドに立てたまま室温で4分間風乾
※ 乾かしすぎないように注意（5分以上置かないこと）
⑨
Low TE 20 µL を添加し、ボルテックスミキサーで5～10秒間混合し、軽くスピンダウン
⑩
1分間インキュベート（室温）し、マグネットスタンドに立てる
⑪ 上清が透明になるまで静置（約1分）する
⑫ 上清を新しい1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
※ 上清を捨てない
STOPPING POINT （任意）： ‐30℃～ ‐10℃で保存
ライブラリ定量の方法選択
定量方法
参照ページ
リアルタイムPCR
本ガイド p. 19～
Agilent® 2100 Bioanalyzer®
本ガイド p. 21～
※ チューブへの吸着などによる、シーケンス時の定量値のズレを低減するため、
定量はシーケンスを行う直前に実施
17
ライブラリの定量
18
リアルタイムPCRで定量する場合
試薬，物品の準備

ライブラリ
凍結している場合は、氷上で解凍してから使用

Ion Universal Library Quantitation Kit (Cat. no. A26217)
氷上で解凍してから使用
（Ion Library Quantitation Kit (Cat. no. 4468802) は使用不可）

96ウェルプレート

リアルタイムPCR （電源を入れておく）
希釈系列の作製
①
E. coli DH10B Ion Control Library を氷上で解凍し、ボルテックスミキサーでよく混合する
②
下表を参考にControl Libraryの希釈系列を氷上で作製する
※ 1つの希釈列毎にボルテックスミキサーでよく混合し、スピンダウンしてから次の希釈列を作製
③
下表を参考にライブラリ（サンプル由来）を氷上で作製する
※ 定量精度の向上のために、トリプリケイトで実施するとよい
19
リアルタイムPCRで定量する場合
リアルタイムPCR反応液の作製
①
以下の組成でqPCR 反応液プレミックスを調製（ピペッティングロスを加味し、必要量より1本分多く調製）
組成
1 ウェル分
TaqMan® Fast Universal PCR Master Mix
10 μL
Ion Library TaqMan® Quantitation Assay, 20X
1 μL
Nuclease-free Water
4 μL
＿＿ウェル分
②
①をボルテックスミキサーで5秒混合し、スピンダウン
③
②の混合液を反応数分の各Wellに 15 μLずつ添加
④
希釈したライブラリ、スタンダードサンプル、ネガティブコントロール(Nuclease‐Free Water) を
5 μL ずつ96ウェルプレートに分注し、よく混合（トータル20 μL）
⑤
プレートにシールをし、スピンダウン
※ 反応液がWellの底に落ちていること、Wellに泡がないことを確認
リアルタイムPCRランスタート
①
以下の条件でプログラムを設定し、リアルタイムPCR をスタート
• Passive reference dye: ROX™ Reference Dye
• TaqMan® probe reporter/quencher: FAM™ dye/MGB
• Reaction volume: 20 μL
②
希釈倍率を考慮してライブラリ原液の濃度を算出
③
ライブラリの希釈倍率（Dilution factor ）を算出
Dilution factor = ( 定量したライブラリ濃度 pM ) / 10 pM
20
Agilent® 2100 Bioanalyzer®で定量する場合
試薬，物品の準備

ライブラリ
凍結している場合は、氷上で解凍してから使用

Platinum® PCR SuperMix High Fidelity, Library Amplification Primer Mix
氷上で解凍してから使用

0.2-mL PCR チューブもしくは 96ウェルプレート

Agilent® 2100 Bioanalyzer® （電源を入れておく）

Agilent® High Sensitivity DNA Kit

サーマルサイクラー（電源を入れておく）

1.5-mL Non-Stick RNase-free Microfuge Tubes （P/N AM12450）

AMPure® XP
30分以上前に室温に戻し、よく懸濁してから使用

70% エタノール（用時調製）
※ 70%以下のエタノールを使用するとサンプルをロスする可能性がある

1.5-mL用マグネットスタンド
ライブラリ増幅
①
下表のように反応液を調製する（ライブラリはLow TEで5倍希釈して使用）
②
①を65 μLずつ2本の0.2 mLチューブに分注する
③
下表の条件にサーマルサイクラーを設定し、PCR反応を行う
④
反応液を全量新しい1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
21
Agilent® 2100 Bioanalyzer®で定量する場合
PCR増幅したライブラリの精製
①
AMPure® XP 195 μL （反応液の1.5倍量）を添加し、数秒間ボルテックスミキサーでよく混合
②
軽くスピンダウンして、5分間インキュベート（室温）
③
マグネットスタンドに立て、約3分静置し、混合液が透明になったら上清を除去
④
70% エタノール 500 µL を加え、マグネットスタンドに立てたままチューブを水平に回転させて洗浄（30秒）
⑤
上清を除去（静置し、透明になってから除去）
⑥
④，⑤のステップを繰返す
⑦
軽くスピンダウン後、再度マグネットスタンドにセットし、20-μLのピペッターでエタノールを完全に除去
⑧
チューブのふたをあけ、マグネットスタンドに立てたまま室温で4分間風乾
※ 乾かしすぎないように注意（5分以上置かないこと）
①
Low TE 20 µL を添加し、ボルテックスミキサーで5～10秒間混合し、軽くスピンダウン
②
1分間インキュベート（室温）し、マグネットスタンドに立てる
⑪ 上清が透明になるまで静置（約1分）する
⑫ 上清を新しい1.5 mL DNA低吸着チューブに回収
※ 上清を捨てない
STOPPING POINT（任意）： ‐30℃～ ‐10℃で保存
※ ライブラリは使用前に氷上で解凍
※ 凍結融解の回数を減らすために小分けに分注
⑬ ライブラリを10倍希釈する
⑭ ⑬1 μLをAgilent® BioAnalyzer® のAgilent High SensitivityDNA Kit (Cat. no. 5067-4626)で測定
※170～330bp のRegion Tableで測定
⑬ テンプレート調製での希釈倍率（Dilution factor ）を算出
Dilution factor = 定量したライブラリ濃度(pM) ÷26 (pM)
22
23
シーケンスおよびIon Reporter™での解析
24
テンプレート調製およびシーケンス
テンプレート調製
機器： Ion OneTouch™ 2 System (Cat. no.4474779 )
使用するキット： Ion PGM™ Template OT2 400 Kit (Cat. no. 4479878 )
プロトコル： Ion PGM™ Template OT2 400 Kit User Guide (Pub. no. MAN0007218)
もしくはIon PGM / 400bp Kit 日本語補足資料（IonPGM_400bp補足資料v2.1.pdf ）
定量方法
テンプレート調製への投入量
リアルタイムPCR
10 pM
Agilent® 2100 Bioanalyzer®
26 pM
※ 上記濃度への希釈は、テンプレート調製直前に行う
シーケンス
機器： Ion PGM™ System (Cat. no. 4462921 )
半導体チップ： Ion 314™ Chip v2 (Cat. no. 4482261)
Ion 316™ Chip v2 (Cat. no. 4483324)
Ion 318™ Chip v2 (Cat. no. 4484355)
使用するキット： Ion PGM™ Sequencing 400 Kit (Cat. no.4482002 )
もしくは Ion PGM™ Hi-Q Sequencing Kit (Cat. no. A25592)
プロトコル：
Ion PGM™ Sequencing 400 Kit User Guide (Pub. no. MAN0007242)
Ion PGM™ Hi-Q™ Sequencing Kit (Pub. no. MAN0009816)
もしくはIon PGM / 400bp Kit 日本語補足資料（IonPGM_400bp補足資料v2.1.pdf ）
【参考：半導体チップの選択】
半導体チップ毎の
サンプル数
リード数
～10
10～30
30～
100k
reads/sample
200k
reads/sample
400k
reads/sample
Ion 314™ Chip
100K～600K
4
2
1
Ion 316™ Chip
1M ～ 3M
20
10
2
Ion 318™ Chip
3M ～ 5M
40
20
4
※ 上記はあくまで目安。研究の目的や細菌叢の複雑性により、各半導体チップの処理能力および感度は変わる。
（Ion 314 Chip™ v2 で1サンプル360k リード取得した際の感度はおよそ1：100）
25
Ion Reporter™での解析
※Torrent Suite™ Software 4.0以上に対応
転送用プラグインIon Reporter™ Uploader の設定
①
Torrent Browserより歯車タブの「Plugins」を選択
②
「IonReporterUploader」の歯車ボタンより
①
「Configure 」をクリック
③
ボタンをクリックし、
最新バージョンのIon Reporter Cloudを選択
②
③
④
Display Name、Username、Passwoｒｄを入力し
で設定登録を実行
※事前に Ion ReporterへのID登録が必要
Ion Reporter™へのアップロードおよび解析のスタート
※既存ワークフローから解析を実施する場合
①
Torrent Browserのレポート画面下部の「Select Plugins to Run」より、「IonReporterUploader」を選択
②
Uploaderより該当のIon Reporter account を選択して、
Launch ボタンをクリック
※ BAMファイルをアップロード
③
Ion Reporter™にログインし、Sample タブから②のアップロードが完了していることを確認する
※ アップロードにかかる時間はデータ量や通信速度に応じてかわる
④
AnalysesタブのLaunchメニューから『Metagenomics 16S beta』のVer. 4.2 以上を選択し、
⑤
該当のSample名に☑し、
⑥
Analysis Nameを入力し、
⑦
解析がスタートしたらAnalysesタブのOverviewメニューからStatusを確認
ボタンをクリック
ボタンをクリックして解析をスタートする
（解析が完了すると『 Successful』と表示される）
26
Ion Reporter™ 解析結果の閲覧方法
解析結果の確認とデータのダウンロード
① 解析が終了したらAnalysesタブのOverviewメニューから結果を確認
サンプルの選択
結果のダウンロード
コンセンサスのパイチャート表示
プライマー毎の
パイチャート表示
解析結果のサマリー
例）ファイル名、リード数など
超可変領域ごとの
リード数、カバレッジなど
分類結果を「プライマー毎」、「コンセンサス」、
「プライマー毎（Slash calls含む）」のどれで表示するか選択
細菌叢の解析結果
検出された細菌種の割合、
リード数などを表で記載
② パイチャートの閲覧・保存
表示する階層を選択
パイチャートのデザイン編集
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関連資料とサポート
関連資料
※最新の製品およびサポート情報は下記をご覧ください。
www.lifetechnologies.com/support
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安全データシート
安全データシート（SDS）はwww.lifetechnologies.com/support より取得してください。
他社製品に関するSDSは各製造業者へお問い合わせください。
分析証明書
分析証明書は、各製品の詳細な品質管理と製品認定情報を記載しています。分析の証明書は、当社
のウェブサイト（ www.lifetechnologies.com/support ）からご覧ください。製品の箱に記載されている製
品のロット番号ごとに分析証明書を検索できます。
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安全情報
一般的安全性
化学的安全性
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安全情報
生物学的安全性
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弊社テクニカルサポートまで
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