plus TM CloverDirect RYTS Kit アンバーストップコドン(UAG)を用いて蛍光およびビオチンなどをタンパク質へピンポイント導入!! 大腸菌無細胞翻訳試薬 (RYTSTM Kit)がセットになりました!! tRNA Reagents for Site‐Directed Protein Functionalization O O O N O H N N H O O O HN O O O O O O HOPOH O O H N S O - O O HN NH O H2N H 2N O O H2N O O O O H 2N O + N AUC AUC AUC 翻訳語修飾ビオチン標識蛍光標識 AUC 機能性アミノ酸導入 O 相互作用解析蛍光イメージング N 翻訳後修飾タンパク質合成 O O N H - O HN O HN O N+ S 非天然アミノ酸が結合したアンバーサプレッサーtRNA (非天然アミノ酸-tRNA) 配向固定 S NH HN O O O O O O Met Ribosome Ala Ser O Met Ala Thr Xaa His Ser Xaa Arg UCG AUC AGC UAG CGU AAU Asn Gln Gly Ser Tyr Lys mRNA 非天然アミノ酸の導入部位に UAGコドンを組み込んだmRNA O P OH O NH HN His Xaa OH 機能性タンパク質合成 [特徴] 定量的 : 導入部位の指定はUAGコドン(アンバーコド Thr AUC + UAG O O NH H N O O O 非天然アミノ酸-tRNAが UAGコドンを読み取る。指定した部位に非天然アミノ酸が導入されたタンパク質 [原理] 非天然アミノ酸-tRNAがUAGを読み取り、指定した位置に非天然アミノ酸が導入されます。この際、UAGコドンを終結因子が読み取った場合には、その時点でタンパク質合成が停止します。したがって、完全長タンパク質として合成されたものは、100%の効率で非天然アミノ酸が導入されていることになります。CGGGコドン(4塩基コドン)においてもほぼ同様の原理により非天然アミノ酸がタンパク質に導入されます。 ※ 非天然アミノ酸の種類によっては、導入部位によりその導入効率が大きく異なるものがありますので、使用の際は、HPやカタログの詳細にてご確認下さい。ン)もしくはCGGGコドン(4塩基コドン)で行います。無細胞タンパク質合成中に非天然アミノ酸-tRNAがアンバーコドンもしくは4塩基コドンを読み取り、指定された位置に非天然アミノ酸が導入されます。また、アンバーコドンと4塩基コドンを同時に使うことで、2種類の非天然アミノ酸をタンパク質に同時に導入することも可能ですので、 FRET(蛍光共鳴エネルギー移動)を用いる実験などに利用できます。迅速、簡便: 無細胞翻訳系へCloverDirectTMとUAG コドンを持つDNAやmRNAを加えるだけで、非天然アミノ酸導入タンパク質が合成されます。精製された非天然アミノ酸導入タンパク質を2時間程度で得ることができます。豊富な種類: 蛍光基、ビオチン、PEG鎖、架橋剤を側鎖に持つ非天然アミノ酸や、翻訳後修飾アミノ酸などが用意されています。受託により新規非天然アミノ酸も対応しています。 [製品構成] ・非天然アミノ酸-tRNA ・tRNA buffer ・RYTS Kit (大腸菌無細胞翻訳システム) 1本 1本 1セット ※ 1本につき300μLの翻訳反応が行えます。 [RYTSTM Kit] www.proteinexpress.co.jp RYTS (Remarkable Yield Translation System)に含まれる大腸菌抽出液は、独立行政法人理化学研究所にて開発され、広範囲な種類のタンパク質を非常に効率よく合成することが可能です。RYTSTM Kitは、転写・翻訳反応に必要な成分を全て含んでいるため、発現遺伝子(環状DNA、直鎖状DNA、mRNA)を反応液に加えるだけで、迅速、簡便にタンパク質合成を行うことができます。RYTSTM Kitは、X線構造解析やNMR構造解析に利用できるほか、CloverDirect TM試薬と組み合わせることで非天然アミノ酸の部位特異的導入に利用することができます。 [特徴] ・・・・ CloverDirect TM試薬を用いた非天然アミノ酸導入タンパク質合成 300μLの当たり、最大150μgのタンパク質が合成可能高分子量タンパク質の合成透析膜を利用することで、長時間の合成反応が可能 [参考文献] 1) Analytical Biochemistry, 377, 156-161 (2008) 2) European Journal of Biochemistry, 239, 881 -886 (1996) 3) Journal of Structural and Functional Genomics, 5, 63–68 (2004) 4) Protein Expression and Purification, 68, 128-136 (2009) [製品リスト] CloverDirect TM plus RYTS Kit 製品名認識コドン容量製品コード定価 Site-Directed Fluorescence Labeling CR110-X-AF plus RYTS kit [5-CR110-X : Abs/Em = 498/521nm] Amber CGGG HiLyte Fluor 488-AF plus RYTS kit [HiLyte FluorTM 488 : Abs/Em = 497/525nm] 300 µL RYT1001 ￥48,500- 5 X 300 µL RYT2001 ￥166,500- 5 X 300 µL RYT2002 ￥166,500- 300 µL RYT01 ￥48,500- 5 X 300 µL RYT05 ￥166,500- 5 X 300 µL RYT2004 ￥166,500- TM Amber CGGG TAMRA-X-AF plus RYTS kit [5(6)-TAMRA-X : Abs/Em = 546/575nm] Amber ATTO 633-AF plus RYTS kit [ATTO633 : Abs/Em = 629/657nm] Amber CGGG ATTO 655-X-AF plus RYTS kit [ATTO655-X : Abs/Em = 633/684nm] Amber CGGG 300 µL RYT02 ￥48,500- 5 X 300 µL RYT06 ￥166,500- 300 µL RYT03 ￥60,000- 5 X 300 µL RYT07 ￥218,000- 5 X 300 µL RYT2008 ￥218,000- 300 µL RYT1009 ￥60,000- 5 X 300 µL RYT2009 ￥218,000- 300 µL RYT1010 ￥60,000- 5 X 300 µL RYT2010 ￥218,000- Site-Directed Biotin Labeling Biotin-XX-AF plus RYTS kit [Biotin-XX] Amber CGGG 300 µL RYT04 ￥40,000- 5 X 300 µL RYT08 ￥128,000- 5 X 300 µL RYT2106 ￥128,000- ※ その他非天然アミノ酸-tRNAについては、ホームページまたはCloverDirect カスタム合成サービスもございますので、ご利用ください。 TM カタログで紹介しております。 (製造元) 株式会社プロテイン・エクスプレス URL : http://www.proteinexpress.co.jp TEL : 043-202-5755 FAX : 043-202-5756 〒288-0045 千葉県千葉市中央区亥鼻1-8-15 (販売元) (代理店) 〒113-0033 東京都文京区本郷2丁目9番7号 http://www.funakoshi.co.jp/ e-mail : info＠funakoshi.co.jp 試薬に関して : Tel.03-5684-1620 Fax 03-5684-1775 e-mail : reagent＠funakoshi.co.jp 受託に関して : Tel.03-5684-1645 Fax 03-5684-6539 e-mail : jutaku＠funakoshi.co.jp E-mail : [email protected]