SPE Technical Note 2 穀類中のフモニシンの分析 GL Sciences Inc. フモニシンB1、B2は、穀類に見られるマイコトキシンの一種で、その分析についてはHPLC-FLまたはLC/MS（ /MS）での測定が一般的です。試料の前処理に関しては、フモニシンが複数のカルボン酸を構造式中に有していることから、陰イオン交換相のSAXを用いる方法が一般的です。しかし、脂質の多い試料やビール類のように複雑な組成の試料など、場合によってはSAXによる抽出だけでは低回収率を招くことがあります。このような試料では、脂質やその他の夾雑成分を事前に無極性相のC18などで除いた後、SAXへ負荷することも必要となります。ここでは、SAXのみによる抽出法と、C18+SAXタンデムでの固相抽出法を併せて紹介します。 1. 固相前処理のフロー図【フモニシンの構造】 Fumonisin B1 Fumonisin B2 Structures are created using Chemistry 4-D Draw which is provided by ChemInnovation Software, Inc. 【脂質の少ないトウモロコシなどの試料の前処理例】均一化試料 10 g メタノール / 水（3：1）60 mLを加えてホモジナイズ遠心分離（10,000×g, 10 min）コンディショニング上澄液残留物はさらにメタノール / 水（3：1）30 mLを加えてホモジナイズ後、遠心分離 SAX (500 mg/6 mL) 上澄液を合せる ①メタノール 8 mL ②メタノール / 水（3：1） 8 mL InertSep SAXなど 100 mL 定容洗浄 20 mL ① メタノール / 水（3：1）8 mL ② メタノール 8 mL アダプターを介し20 mLリザーバーを付ける溶出 1 %酢酸含有メタノール 14 mL 濃縮乾固窒素気流下、40 ℃ 参考資料 : AOAC 995.15 法農林水産消費安全技術センター飼料分析基準食衛誌 Vol.45, No.5,pp. 255-258（2004）バックナンバーやアプリケーション検索はこちらから・・・残留物にアセトニトリル / 水（1：1）1 mLを加えて溶かし、遠心分離（3000 rpm, 5 min） LC/MS/MS http://www.gls.co.jp/sp.html GL Sciences SPE Technical Note 【夾雑成分の多い麦芽、ビールおよび脂質の多い穀類の前処理例】均一化試料 10 g 水15 mLを加えて15分間放置メタノール45 mLを加えてホモジナイズ（ビールは5 分脱気後、 0.2 %アンモニア水0.5 mLおよび水10 mLを加えて混和した後、ミニカラムへ）遠心分離（10,000×g, 10 min）上澄液残留物はさらにメタノール / 水（3：1）30 mLを加えてホモジナイズ後、遠心分離上澄液を合せる 100 mL 定容 20 mL アダプターを介し20 mLリザーバーを付ける C18 (500 mg) InertSep LSC C18など連結して使用 SAX (500 mg) InertSep SAXなど洗浄 ① 水 10 mL ② メタノール / 0.2 %アンモニア水（3：1）10 mL C18を取り除き、SAXの上端に 6 mLリザーバーを付ける SAX 洗浄 ① メタノール / 水（3：1）5 mL ② メタノール 5 mL 溶出 1 %酢酸含有メタノール 14 mL 濃縮乾固（窒素気流下、40 ℃）残留物にアセトニトリル / 水（1：1）1 mLを加えて溶かし、遠心分離（3000 rpm, 5 min） LC/MS/MS 参考資料 : AOAC 995.15 法農林水産消費安全技術センター飼料分析基準食衛誌 Vol.45, No.5,pp. 255-258（ 2004） GL Sciences SPE Technical Note 2. 固相抽出関連製品【InertSep® SAX】 Si-(CH2)3-N+-(CH3)3 InertSep SAX は、トリメチルアミノプロピル基をシリカゲルに結合した固相です。一次相互作用は強い陰イオン交換作用を有し、二次相互作用として、弱い無極性相互作用を併せ持ちます。一般にカルボン酸のような弱い陰イオン性物質の抽出に使われます。シリンジバレル型カートリッジ平均粒子径炭素量表面積細孔容積細孔径イオン交換容量 pKa pH使用範囲備考：：：：：：：：： 45 µm 10 % 450 ㎡/g 0.7 mL/g 60 Å 0.7 meq/g (-) 2～8 OH-イオン対品名今回のおすすめ InertSep SAX カラムサイズ入数 Cat.No. 200 mg / 3 mL 50本 5010-61642 500 mg / 3 mL 50本 5010-61643 500 mg / 6 mL 30本 5010-61644 1 g / 6 mL 30本 5010-61645 12 g / 12 mL 20本 5010-61646 カラムサイズ入数 Cat.No. 500 mg 50本 5010-65640 1000 mg 50本 5010-64641 ルアーデバイス型カートリッジ品名今回のおすすめ InertSep SlimJ SAX 【InertSep® C18】 Si-(CH2)17CH3 平均粒子径炭素量エンドキャップ表面積細孔容積細孔径 pH使用範囲：：：：：：： 60 µm 19 % ◎ 450 ㎡/g 0.7 mL/g 60 Å 2～8 InertSep C18 は、オクタデシル基をシリカゲルに化学結合した無極性相互作用を持つ固相です。高度なエンドキャッピング処理により、シラノール基による陽イオン交換相互作用が抑えられているため、塩基性化合物の吸着が少なくなります。残留農薬一斉試験法における脱脂用クリーンアップ固相として適しています。ラージサイズカートリッジ LSC 品名カラムサイズ入数 Cat.No. 100 mg 50本 5010-63001 200 mg 50本 5010-63002 500 mg 50本 5010-63003 仕様入数 Cat.No. 20本 5010-60104 InertSep LSC C18 今回のおすすめ【エンプティリザーバー】品名エンプティリザーバー(PP製) フリットなし今回のおすすめ品名固相抽出カートリッジ接続アダプター(PP製) 20 mL 60 mL 10本 5010-60105 150 mL 10本 5010-60106 入数 Cat.No. 12個 5010-60004 仕様今回のおすすめ LSCリザーバー用ジーエルサイエンスでは、分析ノウハウときめこまやかなフォローもお付けしたシステム提案を行っております。お近くの営業所やカスタマーサポートセンターまでお気軽にお問い合わせください。ホームページはこちらから・・・ http://www.gls.co.jp/sp.html 〒163-1130 東京都新宿区西新宿6丁目22番1号新宿スクエアタワー30F TEL.03(5323)6611 FAX.03(5323)6622 TEL.03(5323)6611 TEL.06(6357)5060 TEL.045(985)7900 TEL.024(534)2191 TEL.029(858)3700 TEL.043(248)2441 TEL.048(667)1611 TEL.052(931)1761 TEL.082(233)1101 TEL.092(738)6633 F A X. 0 3 ( 5 3 2 3 ) 6 6 2 2 F A X. 0 6 ( 6 3 5 7 ) 4 5 8 0 F A X. 0 4 5 ( 9 8 5 ) 7 9 0 1 F A X. 0 2 4 ( 5 3 6 ) 1 5 1 8 F A X. 0 2 9 ( 8 5 8 ) 3 7 8 0 F A X. 0 4 3 ( 2 4 8 ) 2 4 8 5 F A X. 0 4 8 ( 6 6 7 ) 1 6 5 6 F A X. 0 5 2 ( 9 3 1 ) 1 8 1 4 F A X. 0 8 2 ( 2 3 3 ) 1 1 1 0 F A X. 0 9 2 ( 7 3 8 ) 6 6 3 6 ｶｽﾀﾏｰｻﾎﾟｰﾄｾﾝﾀｰ T E L . 0 4 ( 2 9 3 4 ) 1 1 0 0 F A X. 0 4 ( 2 9 3 4 ) 3 3 6 1 東大横東筑千北名広九京営業阪支浜支北営業波営業葉営業関東営業古屋営業島営業州営業部店店所所所所所所所ジーエルサイエンス SPE テクニカルノート