Data Sheet Taq Pol Thermostable DNA polymerase Thermus aquaticus, recombinant, E. coli Taq Pol 【本酵素の特徴】 本試薬は Routine PCR 用に最適化されており、合成効率に優れております。付属のバッファーは、プレートベース の PCR に適しており、界面活性剤が含まれておりませんので、自動分注装置にもご利用いただけます。 【内容】 ● Taq Pol (red cap) 50μl 5 units/μl Taq DNA Polymerase in 20mM Tris-HCl, 100mM KCl, 0.1 EDTA, 1mM DTT, 0.5％ Tween-20, 0.5％ Nonidet P-40, 50％(v/v) Glycerol, pH 8.0(25℃) ● 10×Taq reaction buffer complete (green cap) 1000μl 200mM Tris-HCl, 500mMKCl, 15mM MgCl 2, pH 8.5(25℃) ● 10×Taq reaction buffer without MgCl2 (blue cap) 1000μl 200mM Tris-HCl, 500mMKCl, 15mM MgCl 2, pH 8.5(25℃) ● MgCl2 Stock Solution (yellow cap) 1000μl 25mM MgCl2 ● GC Enhancer (white cap) ● Taq Stabilizer 2000μl 1000μl 【PCR プロトコール】 ● 反応溶液の調製 50 μl PCR Assay 5 μl 10×Taq reaction buffer green cap complete 200 μM each dNTP 0.2-1 μM forward Primer 0.2-1 μM reverse Primer 2-50 ng Template DNA 0.2-0.5 μM(1-2.5 units) Taq Pol1) Fill up to 50 μM PCR grade H2O ※dNTP は 10mM を 1μl 使用で 200μM ※Primer は 10μM を 1μl 使用で 0.2μM red cap ● PCR 反応 Initial denaturation 94℃ 2 min Denaturation 94℃ 30 sec 45-68℃ 30 sec Elongation 72℃ 30 sec – 4 min Final Elongation 72℃ 2 min Annealing2) 3) 1× 30× 1× Taq Pol Data Sheet Taq Pol 1) ポリメラーゼは反応試薬中、必ず最後に添加して下さい。 2) アニーリング温度は使用する Primer の Tm 値に依存します。 3) 伸長時間は、増幅したいターゲット DNA の長さに依存します(1min/1kb)。 【活性の定義】 70℃で 30 分間に 10nmol のデオキシヌクレオチドを不溶性沈殿に取り込む酵素量を 1unit とする。 【MgCl2 Stock Solution】 本試薬には、MgCl2 Stock Solutionが標準添付されておりますので、実験に応じてMgCl2濃度を変えることが可能で す。Mg2+の反応溶液中の濃度は通常 1.5ｍＭが適量とされており、10×Taq reaction buffer completeは、反応溶液中 での終濃度が 1.5mMとなるようにMgCl2が混合されておりますが、条件検討を行う場合は、バッファーとして 10× Taq reaction buffer without MgCl2をご使用下さい。 50 μl PCR Assay MgCl2 Stock. 2μl 3μl 4μl 6μl Final MgCl2 Conc. 1mM 1.5mM 2mM 3mM 【GC Enhancer】 本試薬には GC Enhancer が標準添付されております。GC Enhancer は、GC 含有率の高いターゲットを増幅する際 に有効な試薬です。ご使用の際は、反応溶液中、終濃度が 10 - 20％となるように添加することを推奨しております。 （原液：100％） 【Taq Stabilizer】 本試薬には、Taq Stabilizer が標準添付されております。Taq polymerase の安定性を高め、またターゲットの二次 構造化を減少させます。ご使用の際には、反応溶液中、終濃度が 5-10％となるように添加することを推奨しており ます。（原液：100％） 【保存】 -20℃ ※本試薬は研究目的の場合にのみご使用いただけます。診断・臨床用試薬として使用しないで下さい。本製品の使 用にあたり、安全性の確保に十分留意して下さい。 Taq Pol Data Sheet 販売元 株式会社グライナージャパン 東京都港区赤坂 2-17-44 福吉坂ビル 2 階 TEL：03-3505-8875 FAX：03-3505-8945 http://www.greiner-bio-one.co.jp/ テクニカルサポート 株式会社ファスマック DNA 合成事業部 神奈川県厚木市緑ヶ丘 5-1-3 TEL：046-222-6962 FAX：046-222-8444 Mail：[email protected]
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