Technical Sheet HPLC Technical Sheet Nr 006 CLAS GLOBAL NETWORK CLAS Quality Control Frankfurt-Höchst HPLC steht für High Performance oder auch High Pressure Liquid Chromatography. Die HPLC ist eine analytische Methode mit der man Substanzgemische trennen und diese über Standards identifizieren und quantifizieren kann. Industriepark Höchst D78 THOMAS PAUL Telefon +49-69-305-12431 [email protected] Anwendungen der HPLC ■ Trennung von Substanzgemischen ■ Bestimmung von Haupt- / Nebenprodukten ■ Nachweis von Verunreinigungen ■ Reinheitsbestimmungen in den Bereichen: ■ Prüfung von Rohstoffen ■ Qualitätskontrolle / Produktfreigaben ■ In-Prozess-Messungen ■ F&E Analytik www.clas.clariant.com CLARIANT INTERNATIONAL LTD www.clariant.com Rothausstrasse 61 4132 Muttenz Switzerland Abb.: Chromatogramm eines Esters auf C18-Reversed Phase C18 mit Wasser / Acetonitril als Eluent Beispielhafter Aufbau einer HPLCAnlage Prinzip Die Trennung von Substanzgemischen erfolgt auf Reversed Phase (RP) oder Normal Phase (NP) Trennmaterialien. Wechselwirkt ein Bestandteil der zu untersuchenden Substanz stark mit der stationären Phase, verbleibt er relativ lange in der Säule. Sind die Wechselwirkungen mit der stationären Phase hingegen schwach, verlässt er die Säule früher. Je nach Stärke dieser Wechselwirkungen erscheinen die Bestandteile der Substanz zu verschiedenen Zeiten (den "Retentionszeiten") am Ende der Trennsäule, wo sie dann mit einem geeigneten Detektor nachgewiesen werden können. Seite 1 von 2 HPLC A = Eluent B = Mischventile C = Überdruckventil D = Druckkompensation E = Mischkammer F = Einspritzventil G = Trennsäule H = Pumpeneinheit I = Detektor J = Interface K = PC L = Drucker BUSINESS UNIT PIGMENTS MARKETING AND SALES PLASTICS AND SPECIAL APPLICATIONS Fon +41-61-469-7945 Fax +41-61-469-7540 www.pigments.clariant.com www.clariant.com Die nebenstehende Abbildung zeigt schematisch den Ablauf einer HPLCAnalyse. Das Substanzgemisch A/B wird mit zunehmender Elution an der stationären Phase aufgetrennt. Diese Art der Chromatographie wird wesentlich beeinflusst durch: ■ Säulenlänge und -durchmesser ■ Teilchengröße und -form ■ Porenstruktur ■ Art der chemischen Modifizierung ■ Art der mobilen Phase ■ pH-Wert der mobilen Phase Stationäre Phasen Bei den Säulenmaterialien, die als stationäre Phase Verwendung finden, handelt es sich im wesentlichen um modifizierte Kieselgele. Gezielte Substitution der Si-OH-Gruppen erlaubt die Generierung spezifischer Trennbedingungen. ■ Beispiel für Normalphase Chemisch: Wirkung: Aktiv: ■ Kieselgel Adsorption SiOH Beispiel für Reversed-Phase (=Umkehrphasen) Chemisch: Wirkung: Aktiv: Octadecyl Verteilung C18 ■ Beispiel für polare gebundene Phasen Chemisch: Wirkung: Aktiv: ■ Amino-Phase Kombination mehrerer Effekte C4H8NH2 Beispiel für Oberflächenoptimierung Chemisch: Wirkung: Aktiv: Endcapping Abdeckung von Endsilanolgruppen Si(CH3)3 CLAS GLOBAL NETWORK CLAS Quality Control Frankfurt-Höchst Daneben gibt es viele spezielle Säulenmaterialien, die häufig nur für eine Verbindungsklasse oder bestimmte Analyten selektiv sind. Auch chirale Trennungen sind somit möglich. Industriepark Höchst D78 THOMAS PAUL Telefon +49-69-305-12431 [email protected] www.clas.clariant.com www.clariant.com Seite 2 von 2