pSINsi-DK I DNA Set Code No. 3663 Size : 30 reactions Shipping at － 20℃ Store at － 20℃ ＊2 years from date of receipt under proper storage conditions. Restriction enzyme map : Lot No. HCMV IE promoter MLV R MLV U5 Regarding protocol, please refer to the product manual supplied with this product. Description : pSINsi-DK vector series is a vector for simultaneous expression of two kinds of short hairpin RNAs (shRNAs) using two kinds of RNA polymerase III (pol III) promoters. This vector series is based on self-inactive retrovirus vector and contains neomycin-resistant gene as a selectable marker. pSINsi-DK I has hH1 promoter and hU6 promoter. Since two kinds of shRNA are expressed simultaneously, this vector is useful for simultaneous knockdown of two target genes or increment of knockdown effect on one target gene. This product is composed of linearized vector and promoter cassette. By performing 4 fragments ligation with linearized vector, promoter cassette, and two kinds of double-stranded synthetic oligonucleotides for expression of shRNAs, it is possible to construct the expected plasmid all at once. It is recommended to use DNA Ligation Kit <Mighty Mix> (Cat. #6023) for this 4 fragments ligation. Components : pSINsi-DK (linearized) DK I Promoter Cassette d III Ψ d III pSINsi-DK linearized Ori RI 8387 I I I MLV U5 MLV R Deleted U3 I SV40 promoter NeoR pSINsi-DK I Promoter Cassette hH1 3 μg (0.1 μg/μl) 2.1 μg (35 ng/μl) I AmpR I hU6 HI Form : Dissolved in sterile distilled water Preparation : After purification by ion exchange column and digestion with restriction enzymes, each fragment was purified by agarose gel electrophoresis. Chain length : pSINsi DK (linearized) DK I Promoter Cassette 5,361 bp 380 bp Purity : 1. Confirmed that 4 fragments ligation was performed properly by ligation with synthesized control oligonucleotides and DNA Ligation Kit <Mighty Mix>, plasmid preparation from transformants, and digestion with Cla I and Sse 8387 I. 2. Confirmed that the control oligonucleotides were inserted properly into the above plasmid by sequencing. Usage : Retrovirus-mediated siRNA expression in mammalian cells. NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE [L21] pDON Vecter This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 6,190,907, 6,451,595 and their foreign counterpart patent claims. Note This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc. Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC. If you require licenses for other use, please contact us by phone at +81 77 543 7247 or from our website at www.takara-bio.com. Your use of this product is also subject to compliance with any applicable licensing requirements described on the product web page. It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements. v201105Da pSINsi-DK I DNA Set Code No. 3663 Size : 30 reactions Shipping at － 20℃ Store at － 20℃ ＊適切に保存し、受取り後 2 年を目途にご使用ください。 Lot No. （英文面をご覧ください。）本製品の使用方法については、製品添付の取扱説明書をご確認ください。 ● pSINsi-DK の制限酵素地図 ●製品説明 pSINsi-DK ベクターシリーズは、自己不活型レトロウイルスベクタープラスミドを基本骨格とし、2 つの RNA polymerase III（pol III）系のプロモーターにより 2 つのヘアピン型 RNA を同時に発現させるベクターである。 pSINsi-DK I は 2 つの shRNA をそれぞれ hU6 プロモーターと hH1 プロモーターから発現させることができる。同等に 2 つの shRNA を発現し、2 つの遺伝子の同時ノックダウンや一つの遺伝子に対するノックダウン効果の増強に利用できる。本製品はすでにカット済みであり、ベクター本体とプロモーターカセットで構成されている。shRNA を発現させるための 2 種類の 2 本鎖合成オリゴ DNA とベクター本体、プロモーターカセットの合計 4 つのフラグメントを同時にライゲーションすることによって一気にベクターを構築することが可能であり、この 4 - フラグメントライゲーションには DNA Ligation Kit ＜ Mighty Mix ＞（製品コード 6023）が有効である。 ●内容 pSINsi-DK（linearized） DK I Promoter Cassette MLV R MLV U5 d III I AmpR Ψ linearized Ori RI 3 μg（0.1 μg/μl） 2.1 μg（35 ng/μl） 5,361 bp 380 bp MLV U5 ●用途レトロウイルスベクターを介した動物細胞での siRNA 発現製品についての技術的なお問い合わせ先 I I SV40 promoter NeoR pSINsi-DK I Promoter Cassette hH1 hU6 I ●純度 1． 4 - フラグメントライゲーションが正しく行われることを、コントロール合成オリゴ DNA と DNA Ligation Kit <Mighty Mix> を用いたライゲーション、得られた形質転換体からのプラスミド DNA の調製、制限酵素 Cla I および Sse 8387 I での切断を行い確認している。 2．上記で得たプラスミド DNA について、コントロールオリゴ DNA が正しく挿入されていることをシーケンスにより確認している。 8387 I I MLV R Deleted U3 ●調製イオン交換カラムにより精製した後、制限酵素切断処理し、アガロ－スゲル電気泳動により各 DNA 断片を精製。 d III pSINsi-DK ●形状　水溶液 ●鎖長 pSINsi DK（linearized） DK I Promoter Cassette HCMV IE promoter HI ● 注意本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。本データシートに記載されている商品名などは、特に記載がなくても各社の商標または登録商標です。ライセンスなどに関する最新の情報は弊社ウェブカタログをご覧ください。 TaKaRa テクニカルサポートライン v201105Da Tel 077-543-6116 Fax 077-543-1977