09/11/2014 Paroi d’une bactérie à Gram-négatif 1 09/11/2014 milieu extra-cellulaire Sécrétion membrane externe Insertion Export Insertion périplasme membrane interne cytoplasme Bicouche lipidique 2 09/11/2014 milieu extra-cellulaire Sécrétion mb externe périplasme mb interne cytoplasme ABC transporteurs (voie de sécrétion de type I) ARNm ribosome Protéine en cours de traduction ADRESSAGE cytoplasme mb interne insertion exportation 3 09/11/2014 Peptide Signal (PhoE) Cinétique de maturation 4 09/11/2014 Export et énergie Azide de sodium (ou CCCP) Expérience de translocation in vitro 5 09/11/2014 Expérience de translocation in vitro Translocation Transcription Traduction - 15’ Plasmide O Lysat 5’ Vésicules 25’ Protéinase K 40’ PMSF Vésicule inversée PK Expérience de translocation in vitro 6 09/11/2014 Peptide signal et localisation ß-lactamase : périplasmique PhoE : mb externe psPhoE-mBla Périplasme psBla-mPhoE Membrane externe Sélection de mutants n’exportant plus la fusion malE-lacZ Périplasme Membrane plasmique Cytoplasme +/- Activité -galactosidase +++ Mutants sec 7 09/11/2014 Sélection de mutants n’exportant plus la fusion malE-lacZ Sélection de mutants supprimant le défaut d’export de LamB Milieu Maltose Membrane externe Périplasme Membrane cytoplasmique Cytoplasme LamB MalE MalF MalG MalK Mutants prl 8 09/11/2014 Sélection de mutants supprimant le défaut d’export de LamB Suppression d’un défaut du peptide signal PS PhoE WT PS PhoE muté 9 09/11/2014 10 09/11/2014 Initiation translocation Cycle SecA 11 09/11/2014 Exportation sec-indépendante TorA est une molybdoenzyme soluble et périplasmique d’E. coli Pulse-chase / Fractions périplasmiques (Long-Fei WU) Peptides Signal C : peptide signal pour la voie Tat (motif spécial Twin-arginine) 12 09/11/2014 Les composants de la voie Tat Différentes classes du complexe TatA 13 09/11/2014 L’architecture 3D du complexe TatA Size variation in TatA → remarkable flexibility in its structural organization Supports the possibility that the Tat channel forms a close seal around the substrate protein during the transport process by adjusting the number of TatA protomers in the channel complex 14 09/11/2014 Cotranslocation de la grande sous-unité de la NiFe-hydrogenase avec la petite sous-unité Long-Fei WU, LCB, Marseille Une deuxième voie d’exportation 15 09/11/2014 Représentations schématiques de différentes SRP chez : a) l’homme b) les archae c) les eubactéries Interaction SRP - ribosome en cours de traduction ARNm ribosome peptide hydrophobe 3’ 5’ M NG 3’ 5’ M NG Complexe SRP-ribosomeARNm-peptide SRP 16 09/11/2014 Représentation en roue hélicoïdale d’une séquence du domaine M de SRP Zone d’interaction du domaine M avec le peptide hydrophobe V M A M E M A M A H Q A Q N L K 1 17 MHLEMAAAAQVMKAMNQ A 2 GTP GTP GTP 17 09/11/2014 GDP 2 Pi GTP GTP GTP GTP GDP 18 09/11/2014 Lumen du RE 19 09/11/2014 Cytoplasme Lumen du RE Albumine MKWVTFLLLLFISGSaFs IgG MDMRAPAQIFGFLLLLFPGtRc Lysozyme MRSLLILVLCFLPLAaLg Prolactine MNSQVSARKAGTLLLLMMsNl Insuline MALWM R F LPLLALLV LW E PKPa Qa Protéine G MKCLLYLAFIHvDc 20 09/11/2014 Mb plasmique Vésicule de sécrétion Trans-Golgi Golgi médian Cis-Golgi RE SRP 14 SRP19 SRP68 5’ 3’ M SRP 9 SRP72 NG SRP54 21 09/11/2014 GDP GDP Pi GTP GTP + Insertion directe Insertion par boucle dans la bicouche 22 09/11/2014 Le canal protéique de translocation canal ouvert canal fermé canal bouché Les différentes topologies des protéines membranaires C Cytoplasme C N N N C N Lumen du RE C Type I Type II Type III Polytopique 23 09/11/2014 Protéine à 1 segment TM - 1 SS clivable 1 extrémité N-ter extracytoplasmique (type I) Cytoplasme N SS N S.S.T. Lumen du RE N Protéine à 1 segment TM - 1 SS clivable 1 extrémité N-ter extracytoplasmique (type I) Cytoplasme C S.S.T. N N N 24 09/11/2014 Protéine à 1 segment TM - 1 séquence d’ancrage (S.A.) 1 extrémité N-ter cytoplasmique (type II) Cytoplasme N N S.A. N C Lumen du RE Protéine à 1 segment TM - 1 S.A. 1 extrémité N-ter extracytoplasmique (type III) Cytoplasme S.A. N ++ ++ N Lumen du RE 25 09/11/2014 Protéine à 1 segment TM - 1 S.A. 1 extrémité N-ter extracytoplasmique (type III) Cytoplasme ++ ++ C N N Lumen du RE Protéine à plusieurs segments TM Cytoplasme N S.A. N S.S.T. Lumen du RE 26 09/11/2014 Protéine à plusieurs segments TM S.A. N N N Lumen du RE C Voie de sécrétion des protéines membranaires Mb plasmique Vésicule de sécrétion Trans-Golgi Golgi médian Cis-Golgi RE 27
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