詳しくは Web で Web ページ番号 63436 NEW シングルセルから全ゲノム増幅を行うキット TruePrime Single Cell WGA Kit Version 2 合成ランダムプライマーを用いず，シングルセルから全ゲノム増幅（WGA）を行えるキットです。得られた DNA 産 物は，次世代シークエンスに使用できます（Illumina や Ion Torrent でのワークフローで試験済み） 。 遺伝子工学／機能解析 フナコシニュース 2017 年 1 月合併号（No.626） funakoshi news 本製品は，従来キットの溶解プロトコルの一部を変更し，より広い範囲の細胞種に使用できます。また，ポジティ ブコントロールとして，human genomic DNA が含まれています。 Memo TruePrime テクノロジーとは Phi29 DNA polymerase を用いた DNA 増幅方法は Multiple strand Displacement Amplification（MDA）法と呼ばれ，シングルセルからの 均一な DNA 増幅が可能な方法として注目されています。しかし，合成ランダムプライマーを使用することから，プライマー由来のバイアスが生じる ことが知られています。 SYGNIS 社は，Phi29 DNA polymeras と新規の DNA プライマーゼ TthPrimPol を組み合わせ，ランダムプライマーによるアーティファクトや， 外部 DNA 汚染の影響を低減したキットを開発しました。 1. 1. TthPrimPol プライマーゼ（赤四角）が変 性 DNA の 異 な る 部 位 に 結 合 し， 短 い DNA プライマーを合成する。 2. 2. Phi29 DNA ポ リ メ ラ ー ゼ（ 青 丸） が TthPrimPol と置き換わり合成を開始する。 3. 3. Phi29 DNA ポリメラーゼが，鎖置換を起 こす。 Unknown 0,62％ Invertebrates 0,04％ Invertebrates 4,11％ Synthetic 0,10％ Unknown 19,92％ Human 99,34％ Human 75,84％ 15 プライマー由来のアーティファクト産生 4. 4. TthPrimPol が新生 DNA に結合し，新し い DNA プライマーを合成する。 5. 5. Phi29 DNA ポリメラーゼが TthPrimPol と置き換わり，DNA プライマーと結合し， 合成を開始する。 1 pg の ヒ ト ゲ ノ ム DNA（ ヒ ト／ 哺 乳 動 物 細 胞 1 個 の 含 有 量 の 1/6 に 相 当） を， TruePrime 法（左図）または従来のランダムプライマーを用いた MDA 反応法（右図） で増幅した。塩基配列を確認したところ，従来法で得られた DNA の 20％ 弱は，デー タベース上のいかなる生物にもマッチしないもの（Unkown）であり，無視できない量 の人工産物が生成された。一方，TruePrime 法では，こうしたアーティファクトの影 響は非常に小さいことが示された。 特 長 ● TthPrimPol がプライマーを合成するため，プライマーの添 加は不要です。 ● 単一哺乳動物細胞から，3 時間の反応で 3～4 μg/50 μl 以上 の DNA 増幅が可能です。 ● アルカリ性条件下のインキュベーションにより，細胞溶解と DNA 変性を行うため，断片化を抑え，サイズの大きい高精 度のゲノム DNA が得られます。 非変性 DNA は TruePrime の系に影響しないため，変性処 理後の DNA への外部 DNA 汚染の影響は最小限に抑えられ ます。 ● 試料量：1～50 cells，0.4～20 cells/μl 品 名 メーカー 商品コード TruePrime Single Cell WGA Kit Version 2 NEW SYN 351025 25 reactions SYN 351100 100 reactions 包装 / 価格（￥） 1 kit / 84,000 1 kit / 263,000 キット内容：Lysis buffer，Neutralization buffer，Reaction buffer，TthPrimPol， Phi29 DNA pol，DTT，dNTPs，H2O，human genomic DNA お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ● HEK293，K562 または HeLa 細胞 1 個から全ゲノム増幅を行い，PicoGreen®（左図） または Qubit®（右図）を用いて DNA 量を測定した。 NTC：No Template Control
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