きのこ種菌の純粋分離 ①培地作成 ・基礎培地 →「Potato Dextrose Agar」 ⇒PDA （ジャガイモ寒天培地） ※オートクレーブ（120℃・15分）で滅菌 ・添加物 → ペニシリン ストレプトマイシン ※抗生物質は熱変性するので， ろ過滅菌して添加する。 ②集積培養 「選択培地」を作り，そこにサンプルごと投入 栄養成分を制限し，培養する菌を限定する （生存できる菌） 【方法】 １．キノコをメスで切り，内部を切り出す 外気に触れていないので， 雑菌に汚染されていない。 ※写真では，滅菌したカミソリを使用 ２．内部の小片（３～４ｍｍ）を取り出す ※写真では，滅菌したつまようじを使用 ３．小片を培地中央に静置する ※写真では，滅菌したつまようじを使用 ４．インキュベータ内で培養する ③純粋分離法 集積培養の結果，目的とする菌とともに， 雑菌も存在する場合がある。 この中から，目的とする菌だけを 取り出さなければいけない。 が目 増的 殖と しす たる 場菌 合だ 。け 培養５日目（しいたけ） しも 目 たに 的 場， と 合雑 す 。菌 る も菌 増と 殖と 目的とする菌だけ が増殖した場合 最もきれいな場所を白金耳で 取り，新しい培地に波状に塗 抹する。 培地の面積を 有効に使う 雑菌も増殖した場合 最もきれいな３箇所からそれ ぞれ白金耳で取り，新しい 培地に直線状に塗抹する。 白金耳はその都度 殺菌すること！ ④保存 きのこ種菌は こちらです。 斜面培地⇒好気性菌の保存 高層培地⇒嫌気性菌の保存 冷蔵庫（約５℃）で保存 し， 継代培養を行う。 斜面培地への保存の様子 純粋分離・培養を雑菌が混 入しなくなるまで繰り返す。 種菌として 保存する 純粋分離・培養 保存
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