Methoden des Gentransfers

Gentechnik
Methoden des
Gentransfers
Ein Referat von Natalie Gancarczyk
Übersicht
1. Bedingungen für effizienten Gentransfer
1.1 Vorteile der Plasmide als Vektoren
1.2 Eigenschaften umgebauter Plasmide
2. Methoden des Gentransfers
2.1 Behandlung mit Calciumchlorid
2.2 Elektroporation
2.3 Lipofektion
2.4 Verwendung des Ti-Plasmids als Vektor
2.5 Biolistik („DNA-Kanone“)
2.6 Mikroinjektion
1. Bedingungen für
effizienten
Gentransfer
1. Bedingungen für effizienten Gentransfer
1.1 Vorteile der Plasmiden als Vektoren
gängige Vektoren für Prokaryoten:
Æ Plasmide:

vereinfachte Isolation
können mit Fremd-DNA rekombiniert werden
sind klein
Æ leicht in Wirtsorganismen zu transformieren
Æ replizieren sich dort extrachromosomal
1. Bedingungen für effizienten Gentransfer
1.2 Eigenschaften umgebauter Plasmide
für Gentechnik umgebaute Plasmide enthalten:
Ort ori (origin of replication)
Marker- (Gen für Antibiotikaresistenz)
oder Reporter-Gene
(Gene, deren Expression im
transformierten Organismus direkt
sichtbar wird)

MCS (multiple cloning site)
2. Methoden des
Gentransfers
2. Methoden des Gentransfers
2.1 Behandlung mit Calciumchlorid
2.2 Elektroporation
Voraussetzung damit Bakterien DNA aufnehmen
Æ kompetent
(durchlässige Membran)
Î

durch 2 Verfahren:
Behandlung mit
Calciumchlorid
Elektroporation
2. Methoden des Gentransfers
2.3 Lipofektion
2. Methoden des Gentransfers
2.4 Verwendung des Ti-Plasmids als Vektor
2. Methoden des Gentransfers
2.5 Biolistik
2. Methoden des Gentransfers
2.6 Mikroinjektion
Vielen Dank für
die
Aufmerksamkeit!

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