〔実 8 頁〕特許公報（Ｂ２） (19)日本国特許庁（ＪＰ） (12) (11)特許番号特許第5771376号 (45)発行日（Ｐ５７７１３７６） (24)登録日平成27年7月3日(2015.7.3) 平成27年8月26日(2015.8.26) (51)Int.Cl. ＦＩＣ１２Ｎ 5/02 (2006.01) Ｃ１２Ｎ 5/02 ＺＮＡＣ０７Ｋ 7/06 (2006.01) Ｃ０７Ｋ 7/06 Ａ６１Ｋ 38/00 (2006.01) Ａ６１Ｋ 37/02 Ａ６１Ｐ 35/00 (2006.01) Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ０１Ｎ (2006.01) Ａ０１Ｎ 1/02 1/02 請求項の数4 （全10頁） (21)出願番号特願2010-209975(P2010-209975) (22)出願日平成22年9月17日(2010.9.17) 国立大学法人岩手大学 (65)公開番号特開2012-060976(P2012-60976A) 岩手県盛岡市上田三丁目１８番８号 (43)公開日平成24年3月29日(2012.3.29) 審査請求日 (73)特許権者 504165591 (73)特許権者 304026696 平成25年9月5日(2013.9.5) 国立大学法人三重大学三重県津市栗真町屋町１５７７（出願人による申告）生物系産業創出のための異分野融 (74)代理人 100093230 合研究支援事業、農林水産省、産業技術力強化法第１９弁理士条の適用を受けるもの (72)発明者鈴木西澤利夫幸一岩手県盛岡市上田三丁目１８番８号国立大学法人岩手大学内 (72)発明者今井邦雄三重県津市栗真町屋町１５７７国立大学法人三重大学大学院生物資源学研究科内最終頁に続く (54)【発明の名称】細胞増殖抑制剤、細胞または臓器の保存液 1 2 (57)【特許請求の範囲】【請求項１】次式で表される化合物を有効成分として含有することを特徴とする動物細胞または臓器の保存液。【化１】（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す）【請求項３】保存液の温度は、５∼３７℃であることを特徴とする請 10 求項１の動物細胞または臓器の保存方法。（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す【請求項４】）次式で表される新規化合物。【請求項２】【化３】次式で表される化合物を有効成分として含有する動物細胞または臓器の保存液に、動物細胞または臓器を浸漬することを特徴とする動物細胞または臓器の保存方法。【化２】（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す ( 2 ) JP 3 5771376 B2 2015.8.26 4 ）灌流法、２）単純浸漬保存方法、の２つの方法に大別さ【発明の詳細な説明】れる。【技術分野】【０００７】【０００１】灌流法は、保存期間中に臓器灌流を行って、細胞に必要本発明は、細胞増殖抑制剤、細胞または臓器の保存液にな酸素や栄養素を補給し、かつ老廃物を除去することで関する。、臓器の代謝を維持し、保存期間の延長を図るものであ【背景技術】る。しかしながら、灌流法による臓器保存には、灌流温【０００２】度、灌流圧、灌流量、灌流液の組成など様々な因子が関本発明者らは、ヤママユガ科（Saturniidae）の天蚕（A 係するため、詳細な至適条件が確立されていない。 ntheraea yamamai）に関する研究の中で、アミノ酸配列 10 【０００８】、アスパラギン酸−イソロイシン−ロイシン−アルギニ一方、単純浸漬保存法は、臓器を低温に保持して細胞のン−グリシン（ＤＩＬＲＧ）を有し、Ｃ末端がアミド化代謝を抑制することで、酸素欠乏による組織障害を防止されており、分子量が５７０．９５９である新規なペプする方法であり、簡便かつ有効な方法として、臨床現場チドを見出し、このペプチドの休眠制御作用、ガン細胞では、広く用いられている。具体的には、摘出前あるいの増殖抑制作用を明らかにすることで、特許を取得しては摘出後に、流入血管などから、低温の保存液を用いている（特許文献１、２）。なお、このペプチドは、本発臓器の血管床から血液成分を洗浄後、摘出臓器を同保存明者らによって、「ヤママリン」と命名されてもいる。液に浸漬する方法が一般的である。【０００３】【０００９】また、本発明者らは、前記ペプチドの細胞浸透性および実用化されている臓器保存液としては、グルコースと諸細胞増殖抑制活性を上昇させるために、ペプチド誘導体 20 種の電解質を含んでなるユーロコリンズ液と、不浸透成についての研究を進め、パルミチン酸との結合体（「Ｃ分、膠質浸透圧成分、エネルギー代謝促進成分及びホル１６−ヤママリン」と命名されている）の顕著な細胞増モンをそれぞれ含んでなるウィスコンシン液がよく知ら殖抑制活性を報告している（非特許文献１）。れている。しかしながら、ユーロコリンズ液は生存能力【０００４】の高い腎臓には有効であるが、腎臓以外の臓器に対してしかしながら、非特許文献１では、Ｃ１６−ヤママリンは、組織・細胞に対する保護効果が十分でないと言われ以外のペプチド誘導体（Ｃ２、Ｃ８）に関しては、細胞ており、また、ウィスコンシン液は製剤として不安定で抑制効果が確認されていない。したがって、Ｃ１６以下あり、調製後は低温保存しなければならない欠点があるの炭素数のペプチド誘導体についてはその有用な用途がと言われている。確立されているとはいい難かった。【００１０】【０００５】 30 このような欠点を克服するため、様々な臓器保存液も提一方、医療技術の進歩に伴い、臓器の移植手術が広く行案されている（例えば、特許文献３、４、５）。しかしわれるようになっている。傷病者における臓器の障害がながら、これらの臓器保存液も、製剤の調製と恒常性の甚だ大きく、通常の治療による回復が見込めない場合に維持が難しく、また、水に対する溶解度が低いなどの問は、提供者の臓器を被提供者に移植して治療する。移植題を有しているものもある。手術のために臓器提供者（ドナー）から摘出された移植【００１１】臓器は、血流が途絶し血流を介した酸素の供給がない状さらに、上記のいずれの臓器保存液においても、臓器を態（虚血状態）で、移植まで数分から数時間に渡り保存低温に保持する必要があるため、移植後の臓器の機能回される。この際、保存温度や保存液などの保存条件が適復が妨げられているという根本的な問題もある。さらに切に選択されなかったり、移植までに長時間を要する場、冷却装置などを必要とし、臓器の搬送時の負担が大き合がある。こうした場合、移植によって移植臓器内の血 40 いことも改善すべき点として指摘されている。流が回復した際（再灌流時）に、移植臓器に基質的ある【先行技術文献】いは機能的な障害が生じる場合がある。例えば、肝臓移【特許文献】植においては、移植後に凝固活性の亢進や血栓形成を伴【００１２】って微小循環障害に陥り、グラフト肝機能不全が認めら【特許文献１】特許第3023790号れる場合がある。このような障害は、一般的に移植臓器【特許文献２】特許第3579711号の虚血後再灌流障害とよばれている。【特許文献３】特開2000-191401号公報【０００６】【特許文献４】特開2002-60301号公報こうした症状を防ぎ、移植用臓器を生理的に良好な状態【特許文献５】特開2005-306749号公報で保存するための方法についての検討がなされてきた。【非特許文献】そして、現在までに報告されている臓器保存法は、１） 50 【００１３】 ( 3 ) JP 5 【非特許文献１】Yang et al. 5771376 B2 2015.8.26 6 A Palmitonyl Conjugat 化合物を有効成分として含有する細胞または臓器の保存 e of an Insect Pentapeptide Causes Growth Arrest i 液に、細胞または臓器を浸漬することを特徴としている n Mammalian Cells and Mimics the Action of Diapaus 。 e Hormone (2007). 【００２１】【発明の概要】【化３】【発明が解決しようとする課題】【００１４】そして、上記の背景から、本発明者は、Ｃ１６−ヤママリン以外のペプチド誘導体についての細胞増殖抑制効果に関する新たな知見を見出した。 10 【００１５】本発明は、Ｃ１６−ヤママリン以外のペプチド誘導体の新規かつ有用な用途を提供すること、特に、移植臓器の虚血後再灌流障害の発生を防ぎ、さらに、臓器の保存温【００２２】度を低温としなくとも、十分な保存効果を発揮する細胞（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示すおよび臓器保存液を提供することを課題としている。）【課題を解決するための手段】本発明の細胞または臓器の保存方法では、保存液の温度【００１６】は、５∼３７℃であることが好ましい。本発明の細胞増殖抑制剤は、次式で表される化合物を有【００２３】効成分として含有することを特徴としている。 20 さらに本発明の新規化合物は次式で表される。【００１７】【００２４】【化１】【化４】【００１８】【００２５】（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す））さらに、本発明の細胞または臓器の保存液は、次式で表【発明の効果】される化合物を有効成分として含有することを特徴とし【００２６】ている。本発明の細胞増殖抑制剤は、細胞の増殖を顕著に抑制す【００１９】ることができる。したがって、継代培養のインターバル【化２】を柔軟に変化させることができ、細胞培養従事者等の労力を著しく軽減することができる。また、本発明の保存 40 液は、細胞または臓器を効果的に保存することができる。【発明を実施するための形態】【００２７】本発明の細胞増殖抑制剤は、有効成分として以下の化合物を含有している。【００２８】【００２０】（式中のＲは、炭素数が６または１０のアシル基を示す）本発明の細胞または臓器の保存方法は、次式で表される 50 【化５】 ( 4 ) JP 7 5771376 B2 2015.8.26 8 制することができるという新規な知見に基づいている。このような昆虫由来のペプチドを利用した臓器保存液も、従来全く知られていない。【００３４】そして、酸素消費抑制効果が可逆的であることは、細胞および臓器の保存剤として有用であることを意味している。【００３５】【００２９】すなわち、本発明の保存液は、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲこの化合物における式中のＲは、アシル基を示しており 10 Ｇ−ＮＨ２を溶液として調製したものであるが、例えば（以下、「Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２」という、移植臓器を保存する場合、保存期間中は、臓器を保存）、このＮ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２は、従来、液に浸漬することで酸素消費量を抑制し、移植前に、保本発明者らの研究によって見出された、「アスパラギン存液から臓器を取り出すことで、再び、臓器の酸素消費酸−イソロイシン−ロイシン−アルギニン−グリシンを量を正常に戻すことができる。したがって、酸素欠乏に有し、Ｃ末端がアミド化されたペプチド」（以下、「Ｄよる臓器の組織障害を防止することができる。ＩＬＲＧ−ＮＨ２」という）のＮ末端に、アシル基を導【００３６】入することで合成することができる。ＤＩＬＲＧ−ＮＨさらに、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２は、化学構は、例えば、天蚕（Antheraea yamamai）の幼虫から造の骨格となるアミノ酸の数が５と少なく、極めて短い単離、精製したものを使用することもできるし、公知の低分子であることから、例えば、保存液の調製および恒ペプチド合成法により製造したものを使用することもで 20 常性の維持が容易である。また、常温での保存が可能できる。またその他の方法によって取得することもできる、保存性、取扱い性にも優れ、長時間の保存も可能であが、経済性、大量生産性等を考慮すれば、ペプチド合成る。法による取得が好ましい。【００３７】【００３０】また、本発明の保存液は、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ− そして、アシル基の導入は、公知の方法で行なうことがＮＨ２単独の形態であっても、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲでき、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２におけるアシＧ−ＮＨ２とそれ以外の、例えば、グルコース、マルトル基の炭素数は、細胞浸透性、細胞の酸素消費量抑制効ース、シュークロース、ラクトース、ラフィノース、ト果、細胞増殖抑制効果の観点から、６または１０とするレハロース、マンニトール、ヒドロキシエチル澱粉、プことができる。ルランなどの糖質、グルコン酸、乳酸、酢酸、プロピオ２【００３１】 30 ン酸、β−ヒドロキシ酪酸、クエン酸などの有機酸、塩本発明の細胞増殖抑制剤の対象となる細胞としては、ヒ化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化トまたは非ヒト動物の組織から単離した幹細胞、皮膚細カルシウム、燐酸二水素ナトリウム、燐酸二水素カリウ胞、粘膜細胞、肝細胞、膵島細胞、神経細胞、軟骨細胞ム、燐酸水素二ナトリウム、燐酸水素二カリウム、炭酸、内皮細胞、上皮細胞、骨細胞、筋細胞を含み、さらに水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、、家畜などの動物や魚類の精子、卵子または受精卵、昆炭酸カリウムなどの電解質、Ｌ−アスコルビン酸、ビタ虫細胞、植物細胞などが含まれる。ミンＥなどのビタミン、グリシン、グルタミン酸、リジ【００３２】ンなどのアミノ酸、抗利尿ホルモン、インスリンなどのさらに、本発明の細胞増殖抑制剤は、例えば、公知の培ホルモン、クエン酸、クエン酸塩、ヘパリン、エデト酸地で培養されている細胞に対して適量（例えば、終濃度 10μM∼10mM程度）添加して使用することができる。まナトリウムなどの抗凝固剤、カルシウム拮抗剤、アドレ 40 ナリンβ受容体拮抗剤、アンギオテンシン変換酵素阻害た、本発明の細胞増殖抑制剤は、例えば、有機溶媒等に剤などの降圧剤、アデノシン酸燐酸などの核酸塩基、凍溶解した状態で使用することができる。本発明の細胞増結防止蛋白質などの凍結防止剤、活性酸素消去剤、細胞殖抑制剤は、その増殖抑制活性を阻害しないことを条件賦活剤、抗生物質、抗血小板因子、肝障害抑制剤、賦形に、その他各種の公知の組成物を包含することができる剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、粘性剤、再吸収促進剤、。本発明の細胞増殖抑制剤によれば、継代培養のインタ界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、防腐剤、乳化剤、等ーバルを柔軟に変化させることができ、細胞培養従事者張化剤、安定化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤などの、臓器保等の労力を著しく軽減することができる。存液に通常一般に配合される成分の１又は複数との組成【００３３】物としての形態であってもよい。そして、本発明の保存液は、Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ【００３８】 −ＮＨ２が、細胞および臓器の酸素消費量を可逆的に抑 50 また、この発明の保存液を、例えば、ユーロコリンズ液 ( 5 ) JP 9 5771376 B2 2015.8.26 10 やウィスコンシン液などの公知の臓器保存液に配合して化は、対応するカルボン酸の塩化物（塩化ヘキサノイル用いるときには、それらの臓器保存能を改善することもまたは塩化デカノイル）で処理することによっても達成できる。できる。以下、Ｃ６−ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２およびＣ１０さらに、この発明の保存剤によって、細胞、臓器を保存 −ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２を「Ｃ６−ヤママリン、Ｃ１０− する場合は、保存液中のＮ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−Ｎヤママリン」と記載する。Ｈ２の濃度は、細胞、臓器の種類やその他の条件に応じ【００４３】て適宜決定することができる。具体的には、例えば、１なお、精製は逆相カラム Develosil−ＯＤＳ HG-5（２０μＭ∼１０mＭの範囲を例示することができる。０ｍｍ×２５０ｍｍ、野村化学（株）製）をＨＰＬＣの【００３９】システム（ガリバー（株）日本分光）に接続して行ったそして、本発明の保存液を使用する条件として好ましい 10 。溶出は、４ｍｌ／分の流速で、０．１％トリフルオロ適用温度は、５∼３７℃、特に好ましくは、２５∼３７酢酸（ＴＦＡ）の存在下でアセトニトリルの濃度勾配（ ℃である。本発明の保存液は、従来のように、必ずしも０∼１２０分で０∼１００％）を用いて行い、活性画分低温で臓器を保存する必要がないため、移植後の臓器のを溶出せしめた。吸光度は２２０ｎｍで測定した。ペプ機能回復がスムーズに行われることになる。もちろん、チドは、サンプルプレート上で等量のマトリックス（４臓器移植においては機能回復の問題はあるが、保存液の０％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡα−ＣＨＣＡを飽温度を低温（例えば、５℃以下）とすることもでき、こ和させたもの）と混合した後乾燥させ、ＭＡＬＤＩ−Ｔの場合は、さらに長期間の細胞、臓器の保存が可能となＯＦＭＳ（Discovery、（株）島津製作所製）によってる。構造確認した。【００４０】【００４４】そして、本発明の保存液の対象となる細胞は、例えば、 20 ＜２＞細胞増殖抑制試験ヒトまたは非ヒト動物の組織から単離した幹細胞、皮膚（１）HepG2細胞（ヒト肝がん細胞）細胞、粘膜細胞、肝細胞、膵島細胞、神経細胞、軟骨細 HepG2細胞を、１０％ＦＣＳ(GIBCO社、Low-IgG牛胎児血胞、内皮細胞、上皮細胞、骨細胞、筋細胞を含み、さら清)を含むDMEM培地(Sigma製)中で、37℃、CO2 濃度5%条に、家畜などの動物や魚類の精子、卵子または受精卵、件下で種培養を行なった。その後、種細胞を96well培養昆虫細胞、植物細胞などが含まれる。プレートに、1ウエル当たり100μLの2.0×10 cell/mL細【００４１】胞を分注した。さらに、本発明の保存液の対象となる臓器には、皮膚、【００４５】血管、角膜、腎臓、心臓、肝臓、臍帯、腸、神経、肺、このプレートを37℃、CO2 濃度5%条件下で、1日培養を行胎盤または膵臓などが含まれる。い、細胞がウエル底面に接着したことを確認した後、培【実施例】 4 30 養プレートに、以下の３条件で、被検物質を添加し、37 【００４２】 ℃、CO2 濃度5%条件下で5日間培養を行なった。以下に、本発明の実施例について説明する。本発明は、１）Control として、ＰＢＳを１ウェル当たり1.0μL添以下の実施例に限定されるものではない。加＜１＞Ｎ末端アシル化ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２の合成２）ＤＭＳＯに溶解した200mMのC6−ヤママリンを１ウペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８、（株）島津製作所製ェル当たり1.0μL添加(終濃度2mM) ）を用いて、通常の方法によって樹脂上にN末端遊離、３）ＤＭＳＯに溶解した20mMのC10−ヤママリンを１ウ保護基付ペプチド、アスパラギン酸−イソロイシン−ロェル当たり0.5μL添加(終濃度100μM) イシン−アルギニン−グリシン−ＮＨ２（ＤＩＬＲＧ− 細胞数は、WST-1アッセイ(Premix WST-1 タカラバイオＮＨ２）を合成した。社製)による増殖確認試験で被検物質添加前、０日、被そして、上記ペプチド樹脂をジメチルホルムアミド（DM 40 検物質添加後、1∼５日目まで毎日測定を行なった。 F）とピリジンの混合溶媒に懸濁し、ヘキサン酸（C6カ【００４６】ルボン酸）またはデカン酸（C10カルボン酸）およびWSC すなわち、対象のマイクロプレートの１ウェル当たり10 D(1-ethyl-3-(3-dimethylaminoprppyl)-carbodiimide h μLのPremix WST-1を加え、37℃、CO2 濃度5%条件下で1 ydrochloride)を加え、室温で一晩攪拌した。反応終了時間インキュベートした後、450nmで吸光度を測定した後、樹脂を濾集し、DMFおよびメタノールで洗浄した。。なお、WST-1アッセイによる細胞数は、あらかじめ作このようにして得たアシル化ペプチド樹脂を通常の方法成したWST-1アッセイ検量線より求めた。で切り落としカクテル処理し、粗アシル化ＤＩＬＲＧ− 【００４７】 NH2（Ｃ６−ＤＩＬＲＧ−ＮＨ２、Ｃ１０−ＤＩＬＲＧこの結果、Ｃ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリン無添加の −ＮＨ２）を得た。なお、ここに用いたヘキサン酸また Controlで細胞がコンフラントになったのに対し、培養はデカン酸とWSCDの混合物によるペプチド樹脂のアシル 50 開始時にＣ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンを添加した ( 6 ) JP 11 5771376 B2 2015.8.26 12 ものでは、培養5日後においても、細胞がコンフラントェル当たり1.0μL添加(終濃度2mM) にならずに、培養を継続することができた(表１)。３）ＤＭＳＯに溶解した20mMのC10−ヤママリンを１ウ【００４８】ェル当たり0.5μL添加(終濃度100μM) 【表１】各細胞に対するＣ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンの効果は、培養開始日と培養5日目に、顕微鏡観察下で、視野中にある細胞が増殖しているかどうかで判定した。【００５２】これらの結果(表２)、細胞種によっては、若干のばらつ【００４９】きがあるものの、基本的には、どの細胞でも、Ｃ６ヤマ（２）各種細胞を用いたＣ６ヤママリンおよびＣ１０ヤ 10 マリン、Ｃ１０ヤママリンは、増殖抑制効果を有するこママリンの添加効果確認とがわかった（[表２]）。１）Ｋ５６２細胞（CML,慢性骨髄性白血病）を、１０％【００５３】ＦＣＳ(GIBCO社、Low-IgG牛胎児血清)を含むＲＰＭＩ培【表２】地(日水製薬製)中で、37℃、CO2 濃度5%条件下で種培養を行なった。２）ＮＨＤＦ（正常ヒト皮膚繊維芽細胞、クラボウ製）を、解凍後、Medium106SにLSGS特注増殖添加剤を加えた培地(クラボウ社製)中で、37℃、CO2 濃度5%条件下で種培養を行なった。３）HepG2細胞（ヒト肝がん細胞）を、１０％ＦＣＳ(GI 20 BCO社、Low-IgG牛胎児血清)を含むDMEM培地(Sigma製)中【００５４】で、37℃、CO2 濃度5%条件下で種培養を行なった。なお、Ｃ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンの添加濃度や【００５０】添加タイミングについては、適宜設定することができ、その後、K562種細胞では96well培養プレートに、1ウエより長期間継代なしで培養することも可能である。した 4 ル当たり100μLの1.1×10 cell/mL細胞を分注した。NHD がって、これらＣ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンは、 F種細胞では96well培養プレートに、1ウエル当たり100 継代培養のインターバルを柔軟に変化させることができ 4 μLの2.4×10 cell/mL細胞を分注した。HepG2種細胞で、細胞培養従事者等の労力を著しく軽減する方法を提供は96well培養プレートに、1ウエル当たり100μLの2.0× するものである。 4 10 cell/mL細胞を分注した。【００５１】【００５５】 30 また、Ｃ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンによるこのよ更に、細胞を分注した培養プレートに、以下の３条件でうな細胞増殖抑制効果は、細胞の酸素消費量を可逆的に、被検物質を添加し、37℃、CO2 濃度5%条件下で培養を抑制することができたことによると推定することができ行なった。る。したがって、Ｃ６ヤママリン、Ｃ１０ヤママリンを１）Control として、ＰＢＳを１ウェル当たり1.0μL添有効成分とすることで、細胞および臓器の保存液として加有効利用することができる。２）ＤＭＳＯに溶解した200mMのC6−ヤママリンを１ウ ( 7 ) 【配列表】 0005771376000001.app JP 5771376 B2 2015.8.26 ( 8 ) JP 5771376 B2 2015.8.26 ──────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者佐藤嘉則岩手県盛岡市上田三丁目１８番８号 (72)発明者楊平岩手県盛岡市上田三丁目１８番８号 (72)発明者国立大学法人岩手大学内江幡国立大学法人岩手大学内順良岩手県盛岡市小鳥沢一丁目５番１８号審査官 (56)参考文献大久保智之特許第５５４９９１２（ＪＰ，Ｂ２） Journal of Peptide Science，２０１０年４月１２日，16，242-248 バイオサイエンスとインダストリー，２００７年，65, 10，511-515 Journal of Insect Biotechnology and Sericology，２００７年，76，63-69 蚕糸・昆虫バイオテック，２００９年４月，78, 1，3-11 (58)調査した分野(Int.Cl.，ＤＢ名) Ｃ１２Ｎ５／００Ｃ０７Ｋ７／００Ａ０１Ｎ１／００Ａ６１Ｋ３８／００Ａ６１Ｐ３５／００ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）Ｓｃｏｐｕｓ