-------------------------------------------------------------------------------［ 成果情報名］細 胞 等の超急速ガラス化手法（ FV 法）の開発 ［ 要約］微少量のガラス化液で 超急速ガラス化を可能 にする FV 法（ Fukuoka Vitrification Method ）を考案した。この 方法で細胞等を簡 易に保存できる。 ［ キーワード］ ガラス化、保 存 ［ 担当部署］家畜部 ・畜産工学チーム ［ 連絡先］ 092-925-5232 ［ 対象作物］乳用牛 ・肉用牛・豚 ［専門項目 ］バイテク ［成果分類］製品開発 -------------------------------------------------------------------------------［ 背景・ねらい］ 種々の細胞を 長期間保存す る方法として近 年ガラス化という方法が考案 され、牛胚移植 技 術においても 胚をガラス化保存すると融 解 後の生存性が 一般的に高い た め試験段階で利 用 されつつある 。しかし、多 くのガラス化の 手法は特許で 押さえられており、実用する場 合 に抵触や使用制約 が懸念されるため、 県独自の技術開発 が望まれる。 そこで、家畜類の 細胞等を簡易な方法 でガラス化できる 新たな手法を考案 する。 （ 要望機関名：畜産課( H10 )） ［ 成果の内容・特徴 ］ １ ．細胞等 の超急速 ガ ラ ス化を 可能 に す る方 法を 考案し た（ FV 法： Fukuoka Vitrification Method）。 ２ ．ガラス化 に使用する糸 は釣り糸を加工 して簡易に製 造できる。製 造 法は 40mm の 2.5 号の釣 り糸の 一端を 平らに 潰し角 度をつける （図１ ）。材 料の糸は 光を透 過する 有色透 明なものを使 用するため、実体顕微鏡下で 細胞等の確認 が容易である。 また、糸は軽量 で液体窒素中 でも柔軟性を保 ち、角度をつけた部分にガラス化液を滴下 するため、外か らの力を受け に く い。 ３ ． FV 法に必要な ガラス化液は微 少 量であるため（図１ ）、液体窒素を用 いた超急速冷却 が可能である。 ４ ． FV 法による超急速ガラス化およびその融 解は以下のような 手順で行う（図２ ）。 ( 1 ) 実体顕微鏡下で 、平ら な部分 にガ ラ ス化液 に平衡 した細胞等を ピペットで 滴下す る（（ イ ）：この時 60mm シャーレ を下に置き、顕 微 鏡 台への接触による 汚染を防ぐ ）。 ( 2 ) 細胞等を ガラス 化液に 導入（ 平 衡 開 始）し て素早 く液体窒素に 投入 し、ピンセッ ト でサ ン プ ル チ ュ ー ブ に導入後 （ウ ）、液 体 窒 素と と も にキ ャ ッ プを し て液 体 窒 素ボ ンベで 保存する（エ ）。 ( 3 ) 融解 はサ ン プ ル チ ュ ー ブ から 糸を ピ ン セ ッ トで 液 体 窒 素 中 に引 き出 し（ オ ）、素 早く希釈液に投入して、ガラス化液の希釈および耐凍剤除去を行 う（カ ）。 ［ 成果の活用面・留意点］ １ ．保存はサンプルチューブの代わりに 細いストローでの 保存も可能である 。 ［ 具体的データ］ 40m m 2m m 側面図 30度 2.5号 釣 り糸 ガラス 化 液 中 の 細 胞 顕 微 鏡 下で細 胞 を の せ る 上面図 糸 の 一 端 を押 し潰 す ドロップ容量： 0.262μl 図１ 超急速ガラス化に 用いる加工糸の見取 り図（平成１４年 ） ピンセット 液体窒素 60mlシャーレ 前平衡液１ 前平衡液２ ガラス化液 （ウ） （イ） （ア） 液体窒素ボンベ LN２ 液体窒素 希釈液１ PBS 希釈液２ 希釈液１ （キ） 図２ （カ） （オ） FV 法 による超急速ガ ラ ス化および融解の手 順（平成１４年） ［ その他］ 研究課題名：高能力乳牛の作出技術 予 算 区 分：県特 研 究 期 間：平成 14 年度（平成 12 ∼ 16 年） 研究担当者：笠 正 二 郎、森美幸、上 田 修 二 発表論文等：平成 14 年度畜産関係試験成績書 特願 2004- 054966 （エ）
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