昭和63年11月20日 931 最近 分 離 された 慈 虫病 リケ ッチ アの 化 学 療 法剤 に対 す る感 受 性 につ いて 新潟薬科大学微生物学教室 浦上 弘 多村 憲 宮村 定男 宮崎県衛生研究所 山 本 正 悟 川 畑 紀 彦 (昭和63年4月4日 受付) (昭和63年5月10日 受理) Key words: Rickettsia tsutsugamushi, Antibiotic-sensitivity, MIC determination, Serotype of Rickettsia tsutsugamushi 要 旨 近 年 流 行 の 慈 虫 病 患 者 か ら分 離 さ れ る 」Rickettsia tsutsugamushiの 血 清 型 に は,従 来 か ら知 られ て い る Gilliam,Karp,Kato型 リケ ッチ ア以 外 に,こ れ ら と異 な る 血 清 型 のShimokoshi,Kawasaki,Kuroki 型 リ ケ ッチ ア の 存 在 が 見 出 され て い る.そ し て新 潟 地 方 で の 分 離 株 はGilliam型,Karp型 が 多 い が,九 州 地 方 の 分 離 株 は殆 ど す べ て マ ウ ス に 対 し弱 毒 性 のKawasaki型 の リケ ッ チ ア とKuroki型 であ る こ と も明 らか と な って きて い る.本 研 究 で は これ らの 性 状 を 異 に す る リケ ッチ ア 間 で の 化 学 療 法 剤 感 受 性 の 差 異 の 有 無 を 明 ら か に す る こ と を 目的 と して,新 Shimokoshi型 の1株 準 株 で あ るGilliam,Karp,Katoの3株,計18株 比 較 した.そ の結 果,す Leukomycinは に つ い て,6種 の3株,Karp型 の4株,Kuroki型 の2株, の5株,及 の 抗 生 物 質 に 対 す るMICを び標 測定 して べ て の 株 に 対 し てTetracycline,Minocycline,Dimethylchlortetracycline, い ず れ も0.012∼0.391μg/mlの 0.39∼6.25μg/mlで 潟 地 方 で 分 離 し たGilliam型 と,宮 崎 及 び長 崎 地 方 で 分 離 し たKawasaki型 あ った.Ampicillinは 範 囲 内 のMICを 示 し,Chloramphenico1のMICは い ず れ の 株 に 対 して も100μg/mlの 濃 度 で 全 く発 育 阻 止 を 示 さ な か った. 以 上 の 成 績 よ り,各 分 離 株 は そ の 血 清 型 や 分 離 地 域 に関 係 な く い ず れ も こ れ らの 抗 生 物 質 に感 受 性 を 示 す こ と,マ ウ ス に対 す る毒 性 の 異 な る 株 間 に も 感 受 性 の 差 異 が な い こ とが 判 明 した. 序 文 惹 虫 病 の 病 原 体 で あ る 」Rickettsia tsutsugamushi (R.tsutsugamushi)に antsが 存 在 し,こ ケ ッ チ ア は 標 準3株 は 幾 つ か の 血 清 学 的Variれ まで我 が国 で 分離 され る リ で あ るGilliam,Karp,Kato れ ら 標 準3株 とlrie株 は これ ま で の検 討 で は類 似 し た 株 で,こ れ を 統 一 す る と,現 とは異 な る血 清 型 の株 在 まで 我 が 国 で 患 者 か ら 分 離 さ れ たR.tsutsugamushiの 血 清型 はGilliam型,Karp型,Kato型,Shimokoshi型, Kawasaki-lrie型,Kuroki型 の い ず れ か の 型 に 分 類 さ れ る と さ れ て き た1).し か し 最 近,こ Kawasaki株 の6型 と な る. しか も興 味 あ る こ とに は これ らの血 清 型 を 異 に す る リケ ッチ ア の 分 布 に地 域 的 特 徴 が あ る こ とが と し て,Shimokoshi株2),Kawasaki株3),lrie株4) 判 明 し つ つ あ る.即 やKuroki株5)6)が さ れ る リ ケ ッ チ ア の 血 清 型 は 大 部 分 がGilliam型 分 離 さ れ る よ う に な っ た. 別 刷 請 求先:(〒950-21)新 かKarp型 潟市 上 新 栄 町5-13-2 新 潟薬 科大 学 微 生物 学 教 室 多村 憲 で,時 ち,新 にKato型 潟 県 下 の 患 者 か ら分 離 やShimokoshi型 リ ケ ッ チ ア の 感 染 が 見 ら れ る7).こ れ に 対 し,現 在 我 932 感 染症 学 雑 誌 が 国 で の恙 虫 病 多 発 地 域 で あ る宮 崎県,鹿 児 島県 す るR.tsutsugamus勉 第62巻 第11号 の 発 見 に 鑑 み,こ れ ら の リ や 長 崎 県 で 分 離 さ れ る リケ ッチ ア は 殆 どす べ て ケ ッチ アの 化 学 療 法 剤 感 受 性 の 差 異 の有 無 を 検 討 Kawasaki-lrie型 して お くこ とは惹 虫 病 の治 療 上 重 要 で あ る と考 え がKuroki型 で あ る こ とが 判 明 して い る6)8). 一方 ,従 来 か らマ ウス はR.tsutsugamushiに る.本 研 究 で は,九 Kawasaki型 対 州地 方 で新 た に分離 された 及 びKuroki型 リケ ッチ ア と,新 潟 して 強 い感 受 性 を 有 す る と考 え られ て きた が,そ 地 方 で 分 離 し た幾 つ か の株 に つ い て,現 の 後 マ ウ ス に 対 し弱 毒 性 の株 の 存 在 が 明 らか に の治 療 に 頻 用 さ れ て い る抗 生 物 質 を 中心 に,そ の な った4)9).こ れ ま で の 検 索 で,マ 試 験 管 内 に お け る 最 小 発 育 阻 止 濃 度(MIC)を 測 ウス に 強 毒 性 の 株 の 血 清 型 は す べ てGilliam,Karp,Kato型 ず れ か で(こ のい 定 し,比 較 検 討 した の で,そ の 結 果 を 以 下 に報 告 す る. の 血 清 型 の もの の 中 に も一 部 に弱 毒 性 の もの も あ るが),3標 在恙虫病 準 株 と血 清 型 を 異 にす る 材 料 と方 法 株 の 多 くは マ ウ ス に対 して 弱 毒 性 を示 す 株 で あ ろ 1.リ ケ ッチ ア う と推 論 さ れ る10). この 研 究 に 使 用 した リ ケ ッチ ア をTable1に こ の よ うに,現 在 我 が 国 で 分 離 さ れ るRtsutsugamushiに はGilliam,Karp,Kato型 ま とめ た.Gilliam,Karp,Katoの3株 以 外 の新 内 継 代 株 で,ブ は実験室 ラ ック法 に よ りク ロー ン精 製 した 血 清 型 リケ ッチ アが 存 在 す る.そ し て そ れ ら の地 も の で あ る.そ の他 は い ず れ も1979年 か ら1987年 域 分 布 状 況 や マ ウ ス に対 す る病 原 性 の差 異 が 明 ら にか け て,新 潟 県,宮 か に な りつ つ あ る.我 々 は先 に 新 潟 県 下 で 分 離 さ 分 離 した もの で あ る.分 離 法 は後 述 す るが,Table れ た株 を 中 心 に,そ の 化 学 療 法 剤 感 受 性 を 検 索 し 1に 示 し た よ うに 患 者 血 液 か ら,無 処 置 のddYマ て報 告 した11)12).し か し上 述 の よ うな 性 状 を 異 に ゥ ス,Cyclophosphamide処 Table 1 Serotype of each rickettsia was 1 determined R. tsutsugamushi from the 崎 県,長 崎 県 下 の患 者 か ら 置 マ ウ ス,ヌ ー ドマ ウ used in this study reactivities with strain-specific monoclonal or polyclonal antibodies. 2 Rickettsiae determined.-, tested. of 106-107 infectivity in tissue culture mice were not killed;+, were injected intraperitoneally to ddY mice and MLD50 was 10-1-10-2 MLD50;++, 10-3-10-4 MLD50;+++, 10-5-10-6 MLD50; NT, not 昭和63年11月20日 ス,あ 933 る い は 直 接 培 養 細 胞 系 を 用 い て,リ ア を 分 離 し た.分 胞 系 に 移 し て 培 養 し 実 験 に 供 し た.リ 血 清 型 は,分 ケ ッチ 離 リケ ッチ ア は そ の 後 培 養L細 グ ルMEM培 地 で4洗 を0.3ml加 ケ ッチ ア の 離 株 と型 特 異 的 モ ノ ク ロ ナ ル 抗 体7), え て,氷 で 破 砕 し,そ BS-C40細 浄 後,こ れに細胞維持培地 冷下 にガ ラスホモジナ イザ ー の0.1m1を レイ トン管 中 に作 製 した 胞 に 接 種 す る.30分 間35℃ に 静 置 して リ あ る い は モ ル モ ッ ト で 作 製 し たhyperimmune ケ ッ チ ア を 細 胞 に 吸 着 さ せ た 後,1mlの serum5)と を 加 え て35℃ の 反 応 性 を 蛍 光 抗 体 法 に よ って 測 定 し て 決 定 し た.各 L細 分 離 株 の マ ウ ス に 対 す る 毒 性 は, 接 種 し てMLD50を れ を 無 処 理 のddYマ ウスに 求 め た 時 の 程 度 をTable中 に 2.細 胞 BS-C40細 L細 過 標 本 ま た は 細 胞 の 塗 抹 標 本 をGiemsa染 フ リ カ ミ ド リザ ル 腎 細 胞)及 ウ ス 繊 維 芽 細 胞)と (日 水 製)に ウ シ ま た は コ ウ シ 血 清 を10%の ア を 感 染 さ せ た 後 は,維 び 試薬剤 Ampicillin sodim(ABPC):Sigma製,Lot no.17FO551,力 も イ ー グ ルMEM 添 加 し た 培 地 中 で 培 養 し た.ま 割合 に た 細 胞 に リケ ッチ 持 培 地 と し て血 清 濃 度 を 減 じ た も の を 使 用 し た. 3.リ 価889μg/mg(和 入);Leukomycin(LM):和 DCF7225,力 (CP):和 光 純 薬 製,Lotno.TLJ7294,純 合 に は,そ の 血 餅 に 等 量 のSPG(3.8mMKH2PO4 -7 .2mMK2HPO4-4.9mMグ ル タ ミ ン 酸 一218 hydrochloride(DMCTC):日 の0.5m1を マ ウ ス 腹 腔 内 に 接 種 し た.Cyclo- phosphamide処 1g当 理 を 行 う場 合 に は,マ ウ ス の体 重 an)を リ ケ ッ チ ア 接 種 後1お 投 与 し た.接 点 で,発 よ び2日 目に腹 腔 内 症 が 見 られ な い 場 合 に は 接 種 後2週 後 に 脾 臓 を 無 菌 的 に 取 りだ し,SPGで10%乳 し た 後,0.3∼0.5mlを 間前 剤 と 別 の マ ウス の腹 腔 内 に接 種 す る こ と に よ り継 代 し た.な no.141,純 おSPGに 本 レ ダ リ ー 製,totno. 本 レ ダ リ ー 製,Lot 度98.5%. 使 用 に 際 し て,LMは0.1M酢 mg/mlの は細 菌 混 の 他 の 薬 剤 は 蒸 留 水 中 に1 おABPCは 原 液 を 作 製 し た が,そ を 限 度 と し て 一20℃ 存 し,用 酸 ナ ト リ ウ ム緩 濃 度 に 溶 解 し,こ れ を 原 液 と し て 希 釈 し て 使 用 し た.な 種 マ ウス が 発 症 した場 合 に は そ の 時 本 レ 度100.7%;Dimethylchlortetracycline 衝 液(pH5.0)に,そ た り0.2mgのCyclophosphamide(Endox- 度99.6 度85.9%;Tetracycline hydrochloride(TC):日 あ る い は 氷 冷 下 に血 餅 の 状 態 で送 付 され て きた 場 加 え て 乳 剤 と し,そ 使 用 の 都 度 溶 解 して の 他 の 薬 剤 は 原 液 を1ヵ 時 に こ れ を 融 解 し て 使 用 し た. 5.MICの 測定法 24wellsの ポ リス チ レ ソ 製 平 底 マ ル チ プ レ ー ト (Corning製)を 用 い て,2%ウ ッ ス イMEMNo.3の シ血 清 加 イ ー グル MEM(ニ streptomycin(SM)100μ9/mlを フ ェ ノ ル レ ッ ド不 含 の も の を 使 用 し,こ 者血 月 フ リー ザ ー 中 に 小 分 け し て 保 入 を 抑 え る た めpenicillinG(PCG)100u/ml, 加 え た.患 no. hydrochloride(MINO):日 516,純 糖 の 混 液,pH7.0)を 光 純 薬 製,Lot ダ リ ー 製,Lotno.207,純 患 者 血 液 が そ の ま ま ド ラ イ ア イ ス で 凍 結 下 に, 光純 薬 よ り購 価1,560μg/mg;Chloramphenicol %;Minocyclin ケ ッチ アの 分 離 法 mM薦 色 また は 間 接 蛍 光 抗 体 法 で 鏡 検 す る こ と に 依 っ た. 次 の 抗 生 物 質 を 使 用 し た. 胞(ア 胞(マ 2%に リケ ッチ ア分 離 成 功 の確 認 は マ ウ ス の腹 膜 の 擦 4.供 示 し た. の 後 培 地 は3∼4日 毎 に 交 換 し て 培 養 を 続 け た. 胞 系 で 測 定 し た リ ケ ッチ ア の 感 染 価 を106 ∼107に そ ろ え て ,こ に 培 養 し た.そ 維 持培地 カ ナ マ イ シ ン, れに フ ェ 液 が ヘ パ リンを 添 加 した 状 態 で 入 手 し得 た 場 合 に ノ ル レ ッ ドを6mg/tの は,こ た)を 希 釈 液 と し て 各 抗 生 物 質 の 倍 数 希 釈 系 列(各 れ にPCG100u/ml,SM100μg/mlを す る イ ー グ ルMEM培 3.5mlの 地 を 等 量 加 え,そ 遠 心 し て,白 wellに400μ1)を の5mlを ヒ ト リ ン パ 球 分 離 用Ficoll-Conray上 層 積 し,1,500rpm,30分 取 す る.こ 含有 に 血 球 層 を分 の 白 血 球 を 遠 心 で 回 収 し,上 記の イー ら100μg/mlま mlま で,そ 0.006μg/mlま 濃 度 に な る よ うに 添 加 し 作 製 す る.ABPCは200μ9/m1か で,CPは50μg/mlか ら0.024μg/ の 他 の 抗 生 物 質 は12.5μ9/mlか で の12段 階 希 釈 系 列 と し た.他 ら に 感 染症 学 雑 誌 934 対 照 と し て 実 験 の 都 度,5∼10のwellに の 含 有 し な い2%ウ μ1を 添 加 し た.こ 抗生物質 シ 血 清 加 イ ー グ ルMEM400 れ ら の 各wel1に 丸 形 カ バ ー グ ラ ス を 挿 入 し た(カ 胞 を10視 野 以 上 観 察 し て判 定 した. 実験成績 バー グラスはあ 潔 な テ ィッ シ ュ ペ ー パ ー で よ く拭 き と っ て か ら,乾 熱滅菌 し た も の を 使 用 し た)。 ,200ml角 胞(継 代 後1∼2日 グ ルMEMで2回 目 で,細 ケ ッ チ ア 接 種 液1mlを シ血 清 加 イ ー 当 濃 度 に希 釈 した リ 接 種 し た(感 染細胞 数が全 度 に な る濃 度 の リ ケ ッチ ア 接 種 液 を 用 い た).万 遍 な く リ ケ ッチ ア の 吸 着 が 行 わ れ る よ う に 培 養 瓶 を10∼15分 ら,37℃ て,細 に1.5∼2時 間 隔 で振 盪 しなが 間 培 養 し た.次 に接 種 液 を 捨 胞 層 をEDTA液(171mMNaCl-3.4mM 液 にEDTAを0.2%に 混 溶 解)で 洗 浄 し,ト 中 に ト リ プ シ ソ を0.1%に の化 学 療 段 階 希 釈 し た薬 物 の 存 れ な くな る薬 剤 の最 小濃 度,即 ちMICを,光 学顕 微 鏡 で観 察 して 決 定 し よ う とす る もの で あ るが, こ の方 法 で リケ ッチ アの 増 殖 が 見 られ な くな る薬 剤 の限 界 点 が 明 瞭 に判 別 で きる か ど うか が重 要 で あ る.そ こでMIC測 定 に先 立 って,倍 数 希 釈 した 薬 剤 の存 在 下 に,リ ケ ッチ ア の増 殖 が ど の よ うに 変 化 す る か を 検 討 した.使 ABPC以 用 し た 薬 剤 の うち, 外 は い ず れ も リケ ッチ ア の 増 殖 を 阻 害 した が,こ KCI-10mMNa2HPO4-1.8mMKH2PO4の ン 溶 液(EDTA液 今 回 我 々が 用 い たR.uutsugamus勉 在 下 に,細 胞 中 の リケ ッチ ア の 増 殖 が 全 く認 め ら 胞 が 単 層 を形 成 した 洗 浄 後,適 細 胞 数 の20∼60%程 1.抗 生 物 質 の 濃 度 変 化 に伴 う リケ ッチ ア の 増 殖変化 の観察 法 剤 感 受 性 試 験 で は,2倍 形 培 養 瓶 中 で 静 置 培 養 し たL細 も の)の 培 地 を 捨 て,細 胞 層 を2%ウ 第11号 した.通 常 カバ ー グ ラス の 異 な る部 分 の細 直 径12mmの ら か じ め 純 エ タ ノ ー ル で 洗 浄 し,清 一 方 MICと 第62巻 培 養4∼6日 の よ うな有 効 薬 剤 の存 在 下 にお い て, 目に 観 察 す る と,薬 剤 の 濃 度 が高 ま リプ シ るに 伴 っ て,リ 溶 解) 数(感 ケ ッチ ア の 増 殖 が 認 め られ る細 胞 染 細 胞 数)が,対 照 で あ る薬 剤 の 存 在 しな を 用 い て,常 法 に よ り細 胞 を ガ ラ ス 面 か ら 剥 離 し, い培 地 中 で 培 養 した も の に比 し て顕 著 に低 下 して 新 し い2%ウ い る の が 見 られ る.薬 剤 の 濃 度 が 高 ま る に し た シ 血 清 加MEM培 地 中 に 再 浮 遊 し, 均 質 な 細 胞 浮 遊 液 を 作 製 し た.細 turkを 用 い て 計 数 し て,7.5×104cells/mlの 濃 度 と し,そ の400μ1を,先 が って,個 胞 数 をBurkel 細胞 に 作 製 した 抗 生 物 質 の 々 の細 胞 中 の リケ ッチ ア の 数 も対 照 に 比 して低 下 す る が,リ ケ ッチ アを 保 持 す る細 胞 に は相 当 数 の リケ ッチ アの 集 団 が常 に細 胞 質 中 に見 希 釈 系 列 の 入 っ て い る マ ル チ プ レ ー トの 各we11 られ,明 ら か に そ こで 増 殖 した と判 断 され る の で, に 分 注 し た. 感 染 細 胞 で あ る か ど うか の 判 断 は 容 易 で あ る.リ 各 プ レ ー トは5%CO2培 養 し た.培 養4∼6日 養 器 中 で37℃ 目 に 各wellの に静置培 培 地 を 捨 て, ケ ッチ ア接 種 時 のmultiplicityは,対 20∼60%の 照 の場合 に 感 染 細 胞 数 に な る よ うに 抑 え て い るの 細 胞 層 をPBS(137mMNaC1-2.7mMKCI-8-1 で,1個 mMNa2HPO4-1.5mMKH2PO4-0.9mM り込 まれ て,そ れ が そ の ま ま細 胞 中 に 残 存 した も CaCl2-1.1mMMgC12混 液)で2回 タ ノ ー ル で 固 定 し,2%Giemsa液 し な が ら染 色 し た.各well中 洗 浄 後,純 で20分 メ 間振 愚 の カ ノミー グ ラ ス を 取 り出 し,乾 燥 後,MX(マ ッ ナ ミ):キ シ レ ン混 液 (1二1)で 細 胞 面 を 内 側 に し て ス ラ イ ドグ ラ ス に 貼 りつ け た. の細 胞 中 に一 度 に 多 数 の リケ ッチ ア が 取 の を 観 察 して い る とい う可 能 性 は な い. Fig.1にKato株 を 用 い た 場 合 の 薬 剤 濃 度 と感 染 細 胞 数 の関 係 を 示 す.薬 剤 濃 度 を上 昇 し て行 く と,あ る点 か ら感 染 細 胞 数 は ほ ぼ 直 線 的 に低 下 す る.従 って,薬 剤 濃 度 の薄 い 試 料 か ら順 に 顕 微 鏡 下 に観 察 し て行 く と,感 染 細 胞 数 が 次 第 に 低 下 し こ れ を 顕 微 鏡 下 で1,000倍 の 倍 率 で,抗 生 物 質 の 希 釈 度 の 高 い 方 か ら 順 に 観 察 し,リ ケ ッチ ア の 感 て行 く状 態 が 観 察 され,そ れ が 殆 ど観 察 視 野 中 に 見 られ な くな る終 未 点,即 ちFig.1の 曲線が横軸 染 ・増 殖 が 全 く 認 め られ な く な る 抗 生 物 質 の 濃 度 に到 達 す る点 の判 別 は 容 易 で あ り,従 っ て この 方 を も っ て,そ 法 で 薬 剤 のR.tsutsugamushiに の 抗 生 物 質 の リ ケ ッチ ア に 対 す る 対 す るMIC測 定 昭 和63年11月20日 935 Table 2 MIC(pg/ml) of antibodies against R. tsutsugamushi Fig. 1 Decrease of infected cells in medium with increasing amount of antibiotics. Cells were infected with R. tsutsugamushi Kato strain and the infected cell rate in control culture(culture without antibiotics) was 40%. アを 細 胞 に 吸着 させ,こ の感 染 細 胞 を ト リプ シ ン で ガ ラ ス面 か ら剥 離 し,均 質 な細 胞 浮 遊 液 を 作 成 し て,こ た.こ の浮 遊 液 を 各wellに 一 定量 ず つ接種 し の 方 法 に よ り各wellの 感 染細 胞 数お よび well中 の 各 部 分 の感 染 細 胞 の 分 布 を 均 等 に す る こ とが で きた.ト リプ シ ン処 理 は 細 胞 外 に 存 在 す る遊 離 の リケ ッチ ア は不 活 化 す るが,宿 主細胞中 に 侵 入 後 の リケ ッチ ア は不 活 化 し な い. 2.分 離 株 の 各 種 薬 剤 に 対 す る感 受 性 試 験 Gilliam,Karp,Katoの 標 準 株,及 び患 者 か ら 近 年 分 離 した 株 に 対 す る各 薬 剤 のMICをTable 2示 す.ABPCは か った が,他 全 く抗 リケ ッチ ア効 果 を 示 さ な の 抗 生 物 質 は い ず れ も高 い抗 リケ ッ チ ア作 用 を示 した.CPのMICは 株 に よ り多 少 変 動 した が,TC,MINO,DMCTC,LMのMICは い ず れ も 近 似 し て0.012∼0.391μ9/m1の 値 を示 し,株 間 に大 きい 差 異 は認 め られ なか っ た.分 離 株 の 中 に は,Table1に 示 した よ うに各 血 清型 の 株 とマ ウ ス に対 す る毒 性 の異 な る株 が 含 ま れ て い が 可 能 で あ る こ とが判 明 した.同 一の染色試料 を る が,そ の よ うな 分 離 株 の 性 状 と各 抗 生 物 質 の 異 な る研 究 者 が観 察 した 場 合 で も,こ の鏡 検 の 段 MICの 階 で は殆 ど差 が 出 な い. られ な か った. な お今 回 の 実 験 で は,200ml角 形 培 養 瓶 中 の細 胞 に リケ ッチ ア を接 種 して,1.5∼2時 間 リケ ッチ 高 低 との 間 に も特 筆 す べ き相 関 性 は 認 め 考 察 前 報 で 我 々 は 新 潟 県 下 の 患 者 か ら分 離 し たR. 936 感染 症 学 雑誌 の化 学療法 剤感 受性 につ い て報告 tsutsugamushi した11)12).更に 今 回 の実 験 で はTable 1に 示 し た よ う に,九 州 地 方 で 分 離 さ れ たKawasaki及 Kuroki型 の株 も含 め て,6血 検 討 し た.但 しKato株 び 清 型,18株 につ い て は近 年 分 離 株 が 得 られ て い な い の で 標 準 株 しか使 用 で きな か った.ま わ れ て い る株 も含 ませ た. を 使 用 した が,ABPCは 惹 中 病 に無 効 な 薬 剤 と して,対 照 の意 味 で 加 え,他 の 薬 剤 はMINOを 除 い て い ず れ も慈 虫 病 に 適 用 許 可 の あ る もの で,そ 用 い た.MINOに の 有 効 性 を確 認 す る た め に つ い て は 未 だ惹 虫 病 へ の適 用 許 可 が な され て い な い が,TCと 同系 統 の近 年 多 用 され て い る薬 剤 で あ るの で,検 討 薬 剤 に加 え た. 実 験 結 果 は,TC,MINO,DMCTC,LMの4 薬 剤 に つ い て は,分 離 株 及 び 標 準 株 と もMICは 0.012∼0.391μg/m1の は0.024∼0.195μg/mlの 範 囲 内 に あ り,そ の大 部 分 -321 perties of Rickettsia tsutsugamushi, Kawasaki strain, isolated from a patient in Kyushu. Microbiol. Immunol., 30: 611-620, 1986. 4) Kobayashi, Y., Tachibana, N., Matsumoto, I., Oyama, T. & Kageyama, T.: Isolation of Rickettsia tsutsugamushi by the use of cyclophosphamide-treated mice. In Rickettsiae and Rickettsial Diseases(Kazar, J., Ormsbee, R. A. & Tarasevich, I. N. ed.) p.181-188, Publshing House of the Slobak Academy of Sciences, Bratislava, 1978. 係 な く,す べ て の リケ ッチ ア は この 種 の薬 剤 に 対 し て ほ ぼ 同 程 度 の 感 受 性 を 示 す こ とが 明 ら か と 示 し(0.39∼6.25 5) 山 本 正 悟: つ つ が 虫 病 の 臨 床 と診 断, 各 種 一 そ の 特 性 と 評 価, μg/ml),株 間 の ぼ らつ き も他 の薬 剤 に比 して 大 き か った が,有 意 の 差 と考 え るほ ど の もの で は な い. , 1962. 2) Tamura, A., Takahashi, K., Tsuruhara, T., Urakami, H., Miyamura, S., Sekikawa, H., Kenmotsu, M., Shibata, M., Abe, S. & Nezu, H.: Isolation of Rickettsia tsutsugamushi antigenically different from Kato, Karp and Gilliam strains from patients. Microbiol. Immunol., 28: 873-882, 1984. 3) Yamamoto, S., Kawabata, N., Tamura, A., Urakami, H., Ohashi, N., Murata, M., Yoshida, Y. & Kawamura, A. Jr.: Immkunological pro- 値 を 示 した.こ の こ とか 若 干 高 いMICを 依 っ た. 文 献 1) Shishido, A.: Identification and serological classification of the causative agent of scrub typhus in Japan. Jpn. J. Med. Sci. Biol., 15: 308 ら,株 の 血 清 型 や マ ウ ス に対 す る毒 性 の強 弱 に 関 な っ た.CPは 第11号 お研 究 の一 部 は文 部 省 科 学 研 究 補 助 金 (60570201,62870020)に た使 用 リケ ッチ アの 中 に マ ウ ス に対 す る毒 性 試 験 が 行 供 試 薬 剤 と して6種 を 表 す る.な 第62巻 ル ス, 6) 12: 山 本 正 悟, 蛍 光 抗 体 法. 270-274, 1984. 川 畑 紀 彦, 村 田 道 里, 血 清診 断 の 臨床 とウ イ 南 嶋 洋 一: な お前 回 の 報 告11)12)と 多 少 数 値 の異 な る部 分 も あ 県 の 恙 虫 病 患 者 由 来Rickettsia tsutsugamushiの るが,今 回 はL細 抗 原 性 に つ い て.第62回 胞 系 を 用 いた こ と,供 試 薬 剤 は い ず れ もそ の 含 有 力 価 が 測 定 され た もの を新 規 に 入 手 して 実 験 に供 した こ と,な どに よ る も の で あ り,測 定 結 果 が 本 質 的 に 異 な る もの で は な い. sugamushiの びCPは 各 血 清 型 の 、R.tsut- 感 染 症 に 有 効 で,MINOも それ らと 同 程 度 の有 効 性 を 有 す る こ とが 確 認 され た.今 も前 回 と同様,耐 p.87, 7) Murata, M., 回 性 を有 す る と思 わ れ る分 離 株 は 見 出せ な か った. 謝辞:長 崎県下の リケッチアの分離に使用 した患者 の採 of Immunol., Rickettsia Tamura, H. & Kawamura, antibodies against 茂, 林 N., A., A. Jr.: of monoclonal prototype tsutsugamushi. 30: 599-610, 8) 渡 辺 講 一, 河 野 st- Microbiol. 1986. 敏 明, 賀 来満 夫, 道 津 安 正, 井 上祐 一, 増 山泰 治, 山 口恵 三, 広 田正 毅, 原 耕 平, 伊 藤 直 美, 中 野 正 心, 提 恒 雄, 小 森 清 和, 伊藤 洋 介, 山本 正 悟, 川畑 紀 彦: 長 崎 地 方 に お け る恙 虫 病 の 臨床 的 お よび血 清 学 的検 討(第 2報). 依った.こ こに同教授に深甚なる感謝の意 を表す る.ま た 87, 1988. 馬場哲也氏の絶大 なる協力 に依った.こ こにあわせて謝意 H., and characterization strainspecific 血は,長 崎大学医学部第2内 科原 耕平教 授の こ援 助に 実験 は新潟医療技術専門学校の卒業生である折笠順子氏, Y., Osono, M. Ohashi, Urakami, S., Tanaka, Production rains 日本感 染 症 学会 総 会 講 演 1988. M., Yoshida, Oyanagi, Nogami, 以 上 の結 果 か ら,現 在 慈 虫 病 に使 用 され て い る TC,DMCTC,LM及 抄 録, 宮崎 第62回 日本 感 染 症 学会 総 会 講演 抄 録, p. 9) Kawamura, A. Jr., Murata, M., Osono, M., Nogami, S., Shirasaka, A., Tanaka, H., Sudo, K., Suzuki, K., Miyairi, T. & Kijima, H.: Studies 昭 和63年11月20日 937 on inapparant ease infection in Izu island: monstration of an avirulent in mice. Jpn. J. Exptl. 10) 多村 憲,浦 sulgamushiの ants. of Tsutsugamushi seroepidemiology 上 弘, rickettsia 1980. Rickettsia tsut- 蛋 白 ・抗 原 構 造 と 血 清 学 的Vari- 臨 床 と ウ イ ル ス, Susceptibilities 15: 492-498, 11) 宮 村 定 男, 佐 藤 奈 名 枝, 多村 憲: 最近 分 離 した 恙 虫 病 リケ ッ チ ア の 化 学 療 法 剤 感 受 性 に つ い て. strain Med., 50: 91-105, 大 橋 典 男: disand de- 12) 感 染 症 誌, 59: 宮 村 定 男, 浦上 486-488, 弘, 1985. 太 田 達 夫: 細胞培養による 恙 虫 病 リケ ッチ ア の 薬 剤 感 受 性 の 測 定 に つ い て. Chemotherapy, 35: 159-160, 1987. 1987. of Recent Clinical Chemotherapeutic Isolates of Rickettsia Agents In Vitro tsutsugamushi to Hiroshi URAKAMI, Akira TAMURA & Sadao MIYAMURA Department of Microbiology, Niigata College of Pharmacy Seigo YAMAMOTO & Norihiko KAWABATA Miyazaki Prefectural Public Health Laboratory Recent researches on Rickettsia tsutsugamushi isolated from patients of scrub typhus in Japan demonstrated the existence of newly discovered serotypes, such as Shimokoshi, Kawasaki, and Kuroki, which are distinguished serologically from the prototype strains of Gilliam, Karp, and Kato. Additionally, recent observation suggests that, whereas Gilliam and Karp types are dominant in Honshu Island, almost all isolates in Kyushu Island are Kawasaki and Kuroki types. To know whether these serotypes of rickettsiae show identical or different susceptibility to chemotherapeutic agents, MIC values of 6 antibiotics were determined against 3 prototype strains and 15 isolates, such as 3, 2, and 1 isolates of Gilliam, Karp and Shimokoshi types, respectively, isolated in Niigata Prefecture, and 4 and 5 isolates of Kawasaki and Kuroki types, rescpectively, isolated in Miyazaki and Nagasaki Prefectures. The reuslts indicated that all strains tested showed MIC values within 0.021-0.391 ,ug/m1 against tetracycline, minocycline, dimethylchlortetracycline, and leukomycin, and 0.39-6.25 pg/ml against chloramphenicol, whereas no inhibitory effect was observed with aminobenzylpenicillin even at the concentration of 100 pg/ml. Thus, significant differences are not demonstrated in susceptibility to these antibiotics among the isolates and prototype strains of R. tsutsugamushi.
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