Protein Expression コーナー細胞株のトランスフェクションにおける継代数の効果 Linda Jacobsen1 and Peyton Hughes2 1Roche Applied Science, Indianapolis, USA; 2ATCC, Manassas, USA トランスフェクション実験を成功させるためのンプレックス（5：2の試薬/DNA比）の3種類の容量重要なファクターの一つは、細胞の品質です。実（4μl、6μl、10μl）を細胞に加えました。両方験の主要な一部として、細胞株は結果の信頼性やの継代数において、同様の発現レベルがトランス再現性を左右する、最も高い変動性を持つファクフェクションの24時間後に観察されました。しかターとなります。しながら、高継代数の細胞ではトランスフェクションの48時間後にルシフェラーゼの発現が顕著にトランスフェクション実験において、細胞の継減少していました（図1a）。細胞増殖の最小限の代数はトランスフェクション効率だけではなく、阻害が、3種類の容量のコンプレックスで見られまタンパク質発現にも影響します。これらの心配をした。それに対して、6-10μlのコンプレックスを取り除くために、ロシュ・ダイアグノスティック加えた場合に、高継代数の細胞で増殖阻害が見らスではATCCから保証された細胞株を新たに入手し、れました。増殖におけるこの効果はコンプレック継代数をモニターしながら使用することを推奨しス量が少ない場合は観察されませんでした（図1b）。ています。細胞株は標準的な実験における試薬であり、生命科学研究における高い信頼性と再現性継代数の効果や品質保証の無い細胞を使用したを保証するための、必須の成分であるとの認識が際の問題についての詳細は、高まってきています［1-4］。高品質の生命科学製 www.atcc.org/cellBioResource.cfmのATCCオンラ品を作るメーカーは製品の開発と至適化において、インセルリソースをご覧ください。ルーチン的かつ全面的にATCC細胞株を使用していリファレンスます。 1. Hartung T et al. (2002) ATLA 30:407-414 図1のデータは低及び高継代数のRAW 264.7（ATCC 2. Chatterjee R (2007) Science 315 :928-931 TIB-71）細胞が同様に十分にトランスフェクショ 3. Nardone RM (2006) Eradication of ンされるが、タンパク質発現においては高継代数 cross-contaminated cell lines : A call to の細胞が顕著に減少していることを示しています。 action. available at; RAW 264.7細胞は第5継代（低継代数）と第74継代 http://biotrac.com/pages/authentication.html （高継代数）のときに、ルシフェラーゼを発現す 4. O’Brien SJ (2001) Proc Natl Acad Sci USA ® るプラスミドが、FuGENE HDトランスフェクション試薬でトランスフェクションされました。同じコ 98:7656-7658 Protein Expression コーナー図1：タンパク質発現と増殖における継代数の影響。低及び高継代数のRAW 264.7 (ATCC TIB-71)細胞を3 種類の容量のトランスフェクションコンプレックスでトランスフェクションしました。(a) トランスフェクション効率とタンパク質発現。(b) 細胞増殖。