＼、書 .藤篇鹸塘副櫛孝) し曝氏轡ボ∼もも誰＼パ擦い猶愛卸界心霧継論文懇転筆貧継笹論文内容要旨筋萎縮性側索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis;ALS)は運動ニューロンが選択的, 進行性に変性する神経変性疾患である。全体の5-10%が家族性を示し,家族性ALSの約20% の原因遺伝子としてCu/Znsuperoxidedismutase(Cu/ZnSOD)が報告されている。本研究ではALSの病態解明を目的に,当科にて既に作製されているH46R変異トランスジェニック (Tg)マウスと臨床経過の異なるL84V変異を導入したTgマウスを共通の背景にて作製して変異蛋白の神経細胞障害性を比較検討した。ヒトCu/ZnSOD遺伝子全長を.クローニングし,L84V点突然変異を導入した。これをBDF1 マウス受精卵にマイクロインジェクションすることによってTgマウスを作製した。生まれたマウスの尾からDNAを抽出し,PCR法,サザンプロット,ウェスタンプロットにて導入遺伝子およびその発現を確認し,またCu/ZnSOD活性を検討した。作製したTgマウスのうち,19系統にて遺伝子の導入が確認され,その中で導入遺伝子量,発現量の高い3系統にて進行性の筋脱力と筋萎縮がみられた。H46R変異Tgマウスと生存期間がほぼ同じ系統を比較した結果,本L84V変異Tgマウスでは発症から死亡するまでの期間が短いことと変異蛋白の発現量が少ないことが明らかとなった。これはヒト家系における臨床経過と共通するものであり,Cu/ZnSOD変異の種類の違いにより神経細胞障害性が異なることが明らかとなった。また,L84V変異TgマウスではH46R変異およびこれまでに報告されている変異Tgマウスと異なり,発症が前肢から始まる特徴が認められた。L84V変異Tgマウスの Cu/ZnSOD活性は生理的レベルとほぼ同様であり,L84V変異蛋白自体はCu/ZnSOD活性をもたないことが示唆された。病理学的には他の変異Tgマウスに認められる脊髄の空胞変性所見は認められなかった。空胞変性を示す他の変異TgマウスではCu/ZnSOD活性が上昇しているので,この空胞変性形成にはCu/ZnSOD活性上昇が関与していると考えられた。変1生した運動ニューロンに認められる封入体はL84V変異Tgマウスでも認められたが,発現量が多く,早く発症する系統のほうがむしろ封入体は少なかった。このことは,封入体が神経細胞変性の原因ではない可能性を示唆していた。今回作製したL84V変異Cu/ZnSOD変異TgマウスをH46R変異Tgマウスと比較することによって変異による神経細胞障害の違いが明らかとなった。また,このTgマウスはCu/Zn SOD活性に影響を与えず,空胞変性も少ないヒトのALSに近いモデルであると考えられた。今後H46R,L84Vの2つの変異Tgマウスを比較,解析してゆくことはALSの病態解明に有用であると考えられた。一314一審査結果の要旨筋萎縮性側索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis;ALS)は運動ニューロンが選択的, 進行性に変性する神経変性疾患である。全体の5-10%が家族性を示し,家族性ALSの約20% の原因遺伝子としてCu/Znsuperoxidedismutase(Cu/ZnSOD)が報告されている。本研究ではALSの病態解明を目的に,当科にて既に作製されているH46R変異トランスジェニック (Tg)マウスと臨床経過の異なるL84V変異を導入したTgマウスを共通の遺伝的背景にて作製して変異Cu/ZnSOD蛋白の神経細胞障害性を比較検討した。ヒトCu/ZnSOD遺伝子全長をクローニングし,L84V点突然変異を導入した。これをBDF1 マウス受精卵にマイクロインジェクションすることによってTgマウスを作製した。作製した Tgマウスのうち,19系統にて遺伝子の導入が確認され,その中で導入遺伝子量,発現量の高い 3系統にて進行性の筋脱力と筋萎縮がみられた。H46R変異Tgマウスと生存期間がほぼ同じ系統を比較した結果,L84V変異Tgマウスでは変異蛋白の発現量が少ないにもかかわらず発症から死亡するまでの期間が短いことが明らかとなった。これはヒト家系における臨床経過と共通するものであり,Cu/ZnSOD変異の種類の違いにより神経細胞障害性が異なることが示唆された。L84V変異TgマウスのCu/ZnSOD活性は生理的レベルとほぼ同様であり,L84V変異蛋白自体はCu/ZnSOD活性をもたないことが示唆された。また,病理学的には他の変異Tg マウスに認められる脊髄の空胞変性所見は認められなかった。空胞変性を示す他の変異TgマウスではCu/ZnSOD活性が上昇しているので,空胞変性形成にはCu/ZnSOD活性上昇が関与するのかもしれない。今回作製したL84V変異Cu/ZnSOD変異Tg・マウスをH46R変異Tgマウスと比較することによって変異による神経細胞障害の違いが明らかとなった。また,このTgマウスはCu/Zn SOD活性に影響を与えず,空胞変性も少ないヒトのALSに近いモデルであると考えられた。今後H46R,L84Vの2っの変異Tgマウスを比較,解析してゆくことはALSの病態解明に有用であり,本研究は学位に値する重要なものと考えられる。一315一