74 秋田畜試研報 Bull.Akita Pref.Livest,Exp.Stn.28. 74~82 2014 比内鶏の発育形質関連QTL解明とその検証(第2報) −比内鶏F2家系集団におけるコレシストキニンA受容体遺伝子の ハプロタイプと発育形質との関連性− 力丸宗弘・小松 恵・上本吉伸*1・武田尚人*2・鈴木啓一*3・高橋秀彰*2 *1独立行政法人家畜改良センター *2独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構畜産草地研究所 *3東北大学大学院農学研究科 要 約 我々は,発育が異なる比内鶏系統個体を交配して作出したF2家系集団の量的形質遺伝子座(QTL)解析 を行い,第4番染色体のMCW0240 −ABR0622 間に体重と平均日増体重のQTLを検出した.コレシスト キニンA受容体遺伝子(CCKAR )は,その領域における発育形質に影響する候補遺伝子である.本研究 では,比内鶏F2家系集団におけるCCKAR 遺伝子のハプロタイプと発育形質との関連性について調査を 行った.P世代全個体を対象として,CCKAR 遺伝子の全5つのエクソン領域を含む塩基配列をPCRダ イレクトシーケンス法によって決定し,F2家系集団に出現するCCKAR 遺伝子のハプロタイプを同定し た.次に,ミスマッチ増幅変異アッセイ法によって,F2家系集団各個体のディプロタイプを識別した. その結果,5つのハプロタイプ(ハプロタイプ1−5)が同定された.3つのハプロタイプ(ハプロタイ プ-1,3,4)の組み合わせから得られた6つの遺伝子型について,CCKAR 遺伝子のハプロタイプと 発育形質との関連性について調査を行った結果,ハプロタイプ-1は10および14週齢体重,4-10および 10-14週齢平均日増体重において,ハプロタイプ-3より有意に優れていた.以上の結果から,CCKAR 遺 伝子のハプロタイプは,比内鶏の発育形質改良のための選抜指標として有効であることが示唆された. 緒 言 ニングは,これまでの生理学分野での研究結果か 経済的に重要な形質へ有意な影響を及ぼす量的 ら候補遺伝子としてすでに報告されている遺伝子 形質遺伝子座( QTL )の候補遺伝子の同定や利用 について,その遺伝子内のDNA変異と表現型との は,家畜育種においてますます重要になってきて 関連性を調査する方法である. いる.QTLを探索するための方法として,交配集 ニワトリでは,これまで体重などの発育形質に 団の連鎖地図に基づいたポジショナルクローニン 関する QTL マッピングが広く研究されている グ法と候補遺伝子を用いたファンクショナルクロ (Abashtら2006;Huら2007).また,第1番染色体 ーニング法の2つがある(Andersson2001).ポジ 上のthyroid hormone responsive spot 14 α (Cao ショナルクローニング法は,DNAマーカーと表現 ら2007 )やPIT1(pituitary-specific positive 値の2つの情報から表現型に影響を与える QTL (Nieら2008) ;第2番染色体 transcription factor 1 ) を染色体上に位置付け,効果を推定する方法であ 上のIGFBP (insulin-like growth factor binding る.候補遺伝子を用いたファンクショナルクロー protein )1,3(Qu ら2009);第3番染色体上のODC CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 (Uemotoら. 2011) ;第5 (ornithine decarboxylase ) の関連性を報告している.第4番染色体上の発育 番染色体上のcalpain3( Zhangら2009) ;第7番染 形質の候補遺伝子のうち,我々はCCKAR 遺伝子 色体上のIGFBP2(Leiら2005;Liら2006;Lengら に着目した.なぜなら,比内鶏の系統間交配によ 2009);第9番染色体上のGHSR(growth hormone る解析によって,第4番染色体上のQTL領域のピ (Fangら 2010) ;第10番染 secretagogue receptor ) ーク直下にCCKAR 遺伝子が特定され,それはヒ 色体上のIGF(insulin-like growth factor )1(Lei ら トの肥満の候補遺伝子 (Arya ら 2004) であるから 2008)のような候補遺伝子と発育形質との関連性 である.そこで本研究では,比内鶏のF2家系集団 が数多く調査されている. におけるCCKAR 遺伝子のDNA多型および発育形 前報において,発育が異なる比内鶏2系統を 質との関連性について調査を行った. 交配し,作出したF2家系集団についてQTL解析を 行った結果, 10 と 14 週齢体重および 4-10 週齢と 材料と方法 10-14週齢の平均日増体重に影響を与えるhighly 1.F2資源家系および表型値の測定 significant QTL が第1番染色体上のADL0198 3羽の保存会の雄と9羽の秋田畜試の雌を用い (chr1:171.7 Mb )とABR0287(chr1:173.4 Mb )間 て1∼3羽の雌を無作為にそれぞれの雄に交配し, と第4番染色体上のMCW0240(chr4:69.9 Mb )と F1集団を作出した.F1集団の雄17羽と雌60羽を全 ABR0622(chr4:86.3 Mb )間の共通領域に検出さ 兄弟交配し,206羽の雄と212羽の雌からなる合計 れた(力丸ら 2013).Ankra-Badu ら(2010)は発 418羽のF2家系集団を作出した.F2家系集団は同 育が異なる方向に選抜されてきたブロイラーの系 じ日にふ化した後,同一鶏舎で飼育し,試験期間 統間交配について QTL 解析を行い,比内鶏の系 を通して同一飼料を給与した.体重は4,10,14 統間交配で検出された QTL 領域と重なる領域に 週齢に測定した.0 - 4,4 -10,10-14週齢にお 発育形質に影響を与えるhighly significantQTLを ける平均日増体重は,各週齢における体重から算 LEI0073 とMCW0240(chr4:69.9-88.4 Mb )間に検 出した. 出している.発育形質への遺伝子の直接的な関 与はまだ解明されていないものの,Ankra-Baduら 2.CCKAR ハプロタイプの同定 (2010)はMCW0240 とLEI0073 間における発育形 本研究では,カリフォルニア大学の利用可能 質の候補遺伝子として,コレシストキニンA受容体 なニワトリゲノムのドラフトシーケンス,Santa (Cholecystokinin type Areceptor ) (CCKAR ) (chr4: Cruz( UCSC )Genome Browser( 2006 )および 75.6 Mb ),PPAR -γ(peroxisome proliferator- EnsemblGenome Browser(2006)を用いた.F2家系 activated receptor gamma,coactivator 1 alpha ) 集団における遺伝子の塩基配列の違いを決定する (chr4:76.6 Mb ),SOD3(Extracellular superoxide ため,ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅,ダイレ (chr4:76.2 Mb ) ,C1QTNF7(c1q and dismutase 3) クトシーケンスにより,親個体におけるCCKAR遺 )chr4:79.7 tumor necrosis factor-related protein 7 ( 伝子の5つのエクソンについて塩基配列を決定し Mb ),FGFBP1(fibroblast growth factor binding た.F2家系集団の各ゲノムDNAは,DNA抽出キッ protein 1 )およびFGFBP2(chr4:79.5 Mb )を挙げ ト(セパジーン:三光純薬,東京)を用いて抽出し ている.さらに,Rubinら(2010)は他の候補遺伝 た.CCKAR 遺伝子の5つのエクソンを増幅するた 子としてTBC1(tre-2/USP6, BUB2, cdc16 domain めに5つのPCRプライマーを設計し,PCRを行っ (chr4:71.8 Mb )と発育形質と family, member 1 ) た(表1).反応液(15-μL)は,各プライマー(10 75 76 秋田県畜産試験場研究報告 第 28号(2014) CCKARハプロタイプと発育形質との関連性 ハプロタイプと発育形質との関連性 CCKAR CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 3.統計解析 pmol ),1×1×Buffer Buffer forforKOD-Plus(東洋紡,東京) , 3.統計解析 統計解析 (10pmol), KOD-Plus(東洋紡, 東京), (10pmol), 1×Buffer for KOD-Plus(東洋紡, 東京), 3.3. 統計解析 (10pmol), 1×Buffer for KOD-Plus(東洋紡, 東京), 発育形質に対するハプロタイプ効果を評価する dNTP ( 200 μ mol/L ;東洋紡) , MgSO4 ( 1.2 mmol/ 発育形質に対するハプロタイプ効果を評価する dNTP(200 (200μmol/L; μmol/L;東洋紡), 東洋紡), MgSO4(1.2 (1.2mmol/L; mmol/L; 発育形質に対するハプロタイプ効果を評価する dNTP MgSO4 発育形質に対するハプロタイプ効果を評価する dNTP (200 μmol/L; 東洋紡),MgSO4 (1.2 mmol/L; Qxpakソフトウ ソフトウ ために混合遺伝モデルを用いた. ,0.125U の KOD-Plus(KOD-201; 東洋 L;東洋紡) ために混合遺伝モデルを用いた.Qxpak 東洋紡), 0.125 UののKOD-PlusKOD-Plus(KOD-201; 東洋紡), ために混合遺伝モデルを用いた.Qxpak ソフトウ 東洋紡), (KOD-201; 東洋紡), ために混合遺伝モデルを用いた.Qxpak ソフトウ 東洋紡), 0.1250.125 U のUKOD-Plus(KOD-201; 東洋紡), ェア (Pérez-Enciso Misztal2004 のld_fix 紡) , 上記の DNA10 ng を混合することにより調整し ェア (Pérez-Encisoとと とMisztal Misztal2004) 2004)) ld_fix fixオプシ オ 上記の DNA 10ngを混合することにより調整した. を混合することにより調整した. (Pérez-Enciso のの ld_ 上記の ェアェア (Pérez-Enciso と Misztal 2004) の ld_ fix オ オ 上記の DNADNA 10ng10ng を混合することにより調整した. ョンによるハプロタイプ解析を行った. F2家系集 た. PCR 反応は96-well 96-well プレートでサーマルサイクラ プションによるハプロタイプ解析を行った. F2 家 PCR 反応は プレートでサーマルサイクラ プションによるハプロタイプ解析を行った. 反応は 96-well プレートでサーマルサイクラ プションによるハプロタイプ解析を行った. F2 家F2 家 PCRPCR 反応は 96-well プレートでサーマルサイクラ 団においてハプロタイプ2を持つ個体は全く検出 ー ( サーマルサイクラー:バイオ・ラッドラ 系集団においてハプロタイプ2を持つ個体は全く ーiCycler (iCycler サーマルサイクラー:バイオ・ラッド 系集団においてハプロタイプ2を持つ個体は全く ー (iCycler サーマルサイクラー:バイオ・ラッド 系集団においてハプロタイプ2を持つ個体は全く ー (iCycler サーマルサイクラー:バイオ・ラッド されなかったこと,また,ハプロタイプ5は F 2家 ボラトリーズ株式会社,ハーキュリーズ,カリフ 検出されなかったこと,また,ハプロタイプ5は ラボラトリーズ株式会社,ハーキュリーズ,カリ 検出されなかったこと,また,ハプロタイプ5は ラボラトリーズ株式会社,ハーキュリーズ,カリ 検出されなかったこと,また,ハプロタイプ5は ラボラトリーズ株式会社,ハーキュリーズ,カリ 系集団では1個体しか存在しなかったため解析か ォルニア,アメリカ) を用いて行った. PCRサイク F2家系集団では1個体しか存在しなかったため 家系集団では1個体しか存在しなかったため フォルニア,アメリカ) を用いて行った.PCR サ F2 フォルニア,アメリカ) を用いて行った.PCR フォルニア,アメリカ) を用いて行った.PCR サ サ F2 家系集団では1個体しか存在しなかったため 解析から除いた.そのため,本研究では,3つの イクルは,94°C にて2 2分間の熱変性後,熱変性 分間の熱変性後,熱変性 ら除いた.そのため,本研究では,3つのハプロ 94℃にて2分間の熱変性後,熱変性 (94℃, ルは, 解析から除いた.そのため,本研究では,3つの イクルは,94°C 解析から除いた.そのため,本研究では,3つの イクルは,94°C にてにて 2 分間の熱変性後,熱変性 ハプロタイプを用いて解析を行った.各形質のモ (94°C,15 秒間),アニーリング 60°C(エクソン (エクソン タイプを用いて解析を行った.各形質のモデル式 15 秒間) ,アニーリング 60℃(エクソン1) ,54.5℃ ハプロタイプを用いて解析を行った.各形質のモ (94°C,15 秒間),アニーリング 60°C ハプロタイプを用いて解析を行った.各形質のモ (94°C,15 秒間),アニーリング 60°C (エクソン デル式は以下の通りである. 1),54.5°C (エクソン2),57°C (エクソン3, は以下の通りである. (エクソン2) , 57℃(エクソン3,4,5) 30秒,デル式は以下の通りである. デル式は以下の通りである. 1),54.5°C (エクソン2),57°C (エクソン3, 1),54.5°C (エクソン2),57°C (エクソン3, 4,5) 秒,伸長反応 (68°C,60秒間) 秒間) のサイ 伸長反応 ( 68 ℃,60秒間) のサイクルを 30回行い, 4,5) 3030 秒,伸長反応 (68°C,60 のサイ 3 22 4,5) 30 秒,伸長反応 (68°C,60 秒間) のサイ 3 23 y sex ggk kuui ieei i クル 30 回行い, 最後に 68°C にて 9 分 30 秒間伸 i j sex 最後に ℃にて9分 3068°C 秒間伸長反応を行った. クル 3068 回行い, 最後に 30 秒間伸 i yi ysex gikhikh ui ei クル 30 回行い, 最後に 68°C にてにて 9 分 930分秒間伸 j j ikh k1 h1 1 k 1h k k h 1 1 長反応を行った.PCR 産物は,High Pure96UF 長反応を行った.PCR 産物は,High Pure96UF PCR 産物は,High Pure 96 UFCleanup Plates(ロシ 長反応を行った.PCR 産物は,High Pure96UF ここで,yi は各形質について個体i iiの表型値, の表型値, CleanupPlates Plates(ロシュ・ダイアグノスティックス (ロシュ・ダイアグノスティックス ここで,yi Cleanup ここで, yは各形質について個体 の表型値, ュ・ダイアグノスティックス株式会社,マンハイ ここで,yi は各形質について個体 i の表型値, Cleanup Plates (ロシュ・ダイアグノスティックス i は各形質について個体 Sexj は性 は性( j雄および雌) (雄および雌)の母数効果,λ の母数効果, 株式会社, マンハイム, ドイツ) を用いて精製し, λ ikh は0 の母数効果, 株式会社, マンハイム, ドイツ) を用いて精製し, ikh は0 Sex j (雄および雌) は0およ ム,ドイツ) を用いて精製し, BigDye TerminatorSexj Sexj は性jは性 j (雄および雌) の母数効果, 株式会社, マンハイム, ドイツ) を用いて精製し, λikhλは0 ikh BigDyeTerminator TerminatorCycle SequencingFS FSReady Ready および1からなる指示変数であり,個体i iのアリ のアリ BigDye Sequencing および1からなる指示変数であり,個体 び1からなる指示変数であり,個体 のアリル h(h (パーキンエおよび1からなる指示変数であり,個体 Cycle Sequencing FSCycle ReadyReactionkit BigDye Terminator Cycle Sequencing FS Ready i iのアリ Reaction kit (パーキンエルマーアプライドバイオ ル h (h=1,2) がハプロタイプ k (k=1~3) である場 Reaction kit (パーキンエルマーアプライドバイオ ル hル h (h=1,2) がハプロタイプ である場 =1,2) がハプロタイプ k(kk(k=1~3) =1∼3) である場合 ルマーアプライドバイオシステムズ,フォスター Reaction kit (パーキンエルマーアプライドバイオ (h=1,2) がハプロタイプ k (k=1~3) である場 システムズ,フォスターシティー,カリフォルニ 合に1となりそれ以外の場合は0, gk はハプロタ システムズ,フォスターシティー,カリフォルニ 合に1となりそれ以外の場合は0, gk はハプロタ に1となりそれ以外の場合は0, gk はハプロタイ シティー,カリフォルニア,アメリカ) を用いてサ合に1となりそれ以外の場合は0, システムズ,フォスターシティー,カリフォルニ gk はハプロタ ア,アメリカ)を用いてサイクルシークエンスを を用いてサイクルシークエンスを イプk kの相加的遺伝子効果, の相加的遺伝子効果, は変量効果として ア,アメリカ) uiuiは変量効果として ア,アメリカ) を用いてサイクルシークエンスを k kの相加的遺伝子効果, ui uは変量効果として プ の相加的遺伝子効果, イクルシークエンスを行った. PCR増幅には同じイプイプ i は変量効果として共分 2 行った.PCR増幅には同じプライマーを用いた. 増幅には同じプライマーを用いた. 共分散行列 共分散行列A に従うポリジーン効果(A(Aは分 は分 A 行った.PCR u2uに従うポリジーン効果 行った.PCR 増幅には同じプライマーを用いた. 共分散行列 u2 に従うポリジーン効果 に従うポリジーン効果 (A は分 散行列 (Aは分子血縁 プライマーを用いた.シークエンシングは両方向 A シークエンシングは両方向行い,それぞれのシー 子血縁行列), は残差効果である. 本研究では, シークエンシングは両方向行い,それぞれのシー 子血縁行列), eieiは残差効果である. 本研究では, シークエンシングは両方向行い,それぞれのシー 子血縁行列), は残差効果である. 本研究では, 行列) ,eei 行い,それぞれのシークエンシング産物について i は残差効果である.本研究では,分子血 クエンシング産物についてDNA DNAシーケンサー シーケンサー 分子血縁係数行列を作成するために基礎集団の血 クエンシング産物について 分子血縁係数行列を作成するために基礎集団の血 クエンシング産物について DNA シーケンサー 縁係数行列を作成するために基礎集団の血統まで DNA シーケンサー(モデル 3100 :パーキンエルマ分子血縁係数行列を作成するために基礎集団の血 (モデル3100:パーキンエルマーアプライドバイ 3100:パーキンエルマーアプライドバイ 統までさかのぼり,合計520 520羽を解析に用いた. 羽を解析に用いた. (モデル 統までさかのぼり,合計 (モデル 3100:パーキンエルマーアプライドバイ 統までさかのぼり,合計 520羽を解析に用いた.ハプロ 羽を解析に用いた. さかのぼり,合計520 ーアプライドバイオシステムズ) を用いて解析し, オシステムズ)を用いて解析し,F を用いて解析し,F モデル式からなる尤度およびハプロタイプ効果を 2 家系集団にお オシステムズ) モデル式からなる尤度およびハプロタイプ効果を 2 家系集団にお オシステムズ) を用いて解析し,F 2 家系集団にお タイプ効果を含むおよびハプロタイプ効果を除い F2家系集団における親個体の CCKAR 遺伝子のハプモデル式からなる尤度およびハプロタイプ効果を モデル式より除いたモデル式からなる尤度からな ける親個体のCCKAR CCKAR遺伝子のハプロタイプを同 遺伝子のハプロタイプを同 モデル式より除いたモデル式からなる尤度からな ける親個体の モデル式より除いたモデル式からなる尤度からな ける親個体の CCKAR 遺伝子のハプロタイプを同 たモデル式のそれぞれから求めた尤度により算出 ロタイプを同定した. る尤度比を用いて尤度比検定を行いた。この尤度 定した. る尤度比を用いて尤度比検定を行いた。この尤度 定した. る尤度比を用いて尤度比検定を行いた。この尤度 定した. 表1 コレシストキニン 表1コレシストキニン コレシストキニン$A$受容体遺伝子における5つのエクソンの増幅プライマー 受容体遺伝子における5つのエクソンの増幅プライマー 表1 受容体遺伝子における5つのエクソンの増幅プライマー 表1 コレシストキニン $ 受容体遺伝子における5つのエクソンの増幅プライマー エクソン フォワードプライマー フォワードプライマー (5' → 3') エクソン エクソン フォワードプライマー (5' →(5'3')→ 3') エクソン1 1 㼀㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㻭㻯㻯㻳 㼀㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㻭㻯㻯㻳 エクソン エクソン 1 㼀㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻭㻯㼀㻯㻭㻯㻯㻳 エクソン22 㻭㻭㻭㻭㻯㼀㻭㻭㻭㻭㻯㻯㻭㻳㻳㻯㻭㻳㻳㻯 㻭㻭㻭㻭㻯㼀㻭㻭㻭㻭㻯㻯㻭㻳㻳㻯㻭㻳㻳㻯 エクソン エクソン 2 㻭㻭㻭㻭㻯㼀㻭㻭㻭㻭㻯㻯㻭㻳㻳㻯㻭㻳㻳㻯 エクソン33 㻯㻭㻳㻳㻭㻳㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭㻯㻳㻳㻭㻳㻭 㻯㻭㻳㻳㻭㻳㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭㻯㻳㻳㻭㻳㻭 エクソン エクソン 3 㻯㻭㻳㻳㻭㻳㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭㻯㻳㻳㻭㻳㻭 エクソン44 㻯㼀㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻭㻯㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻳㼀㻭㻳 㻯㼀㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻭㻯㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻳㼀㻭㻳 エクソン エクソン 4 㻯㼀㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻭㻯㻯㻯㼀㻯㻯㻭㻳㼀㻭㻳 エクソン55 㻳㻭㻭㻯㻭㻭㻭㻯㻭㻳㼀㻳㼀㻯㼀㼀㻯㻯㻳㼀 㻳㻭㻭㻯㻭㻭㻭㻯㻭㻳㼀㻳㼀㻯㼀㼀㻯㻯㻳㼀 エクソン エクソン 5 㻳㻭㻭㻯㻭㻭㻭㻯㻭㻳㼀㻳㼀㻯㼀㼀㻯㻯㻳㼀 リバースプライマー(5'(5'→→3')3') サイズ(bp) (bp) リバースプライマー サイズ リバースプライマー (5' → 3') サイズ (bp) 㼀㼀㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻯㼀㻭㻭㻯㼀㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭 㻣㻜㻞 㼀㼀㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻯㼀㻭㻭㻯㼀㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭 㼀㼀㼀㻯㼀㻯㻭㼀㻯㻯㼀㻭㻭㻯㼀㼀㻭㼀㻯㻭㻳㻯㻭 㻣㻜㻞 㻣㻜㻞 㼀㻳㼀㼀㻯㻭㻭㼀㻭㻳㻯㻭㻳㻭㼀㻭㻳㻭㻭㻭㻭㻭㻭 㻠㻢㻠 㼀㻳㼀㼀㻯㻭㻭㼀㻭㻳㻯㻭㻳㻭㼀㻭㻳㻭㻭㻭㻭㻭㻭 㼀㻳㼀㼀㻯㻭㻭㼀㻭㻳㻯㻭㻳㻭㼀㻭㻳㻭㻭㻭㻭㻭㻭 㻠㻢㻠 㻠㻢㻠 㻯㻭㻭㻳㻳㻯㻭㻭㻭㻯㻭㼀㼀㻳㼀㻭㻭㻭㻭㻳 㻢㻢㻟 㻯㻭㻭㻳㻳㻯㻭㻭㻭㻯㻭㼀㼀㻳㼀㻭㻭㻭㻭㻳 㻯㻭㻭㻳㻳㻯㻭㻭㻭㻯㻭㼀㼀㻳㼀㻭㻭㻭㻭㻳 㻢㻢㻟 㻢㻢㻟 㻭㻭㻯㻳㻳㻭㻭㼀㻯㻭㻯㻯㼀㻯㻭㻳㼀㻯㻭㻭 㻠㻤㻡 㻭㻭㻯㻳㻳㻭㻭㼀㻯㻭㻯㻯㼀㻯㻭㻳㼀㻯㻭㻭 㻭㻭㻯㻳㻳㻭㻭㼀㻯㻭㻯㻯㼀㻯㻭㻳㼀㻯㻭㻭 㻠㻤㻡 㻠㻤㻡 㻭㻯㻯㻭㻳㻭㼀㻳㻭㼀㻳㼀㻯㻯㻭㻯㼀㼀㻳㻭 㻤㻞㻥 㻭㻯㻯㻭㻳㻭㼀㻳㻭㼀㻳㼀㻯㻯㻭㻯㼀㼀㻳㻭 㻭㻯㻯㻭㻳㻭㼀㻳㻭㼀㻳㼀㻯㻯㻭㻯㼀㼀㻳㻭 㻤㻞㻥 㻤㻞㻥 CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 CCKAR CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 77 表4に3つの CCKAR 遺伝子のハプロタイプ (ハ 2 検定 CCKAR 比は自由度3の 2 分布に従うことから, 分布に従うこ 遺伝子のハプロタイプ (ハ 表4に3つの した.この尤度比は自由度3の 表4に3つの CCKAR 遺伝子のハプロタイプ (ハ 比は自由度3の 2 分布に従うことから, 2 検定 2 プロタイプ1,3,4) により P 値を得た。 表4に3つの CCKAR 遺伝子のハプロタイプ (ハと発育形質との関連性を 分布に従うことから, 2 検定 比は自由度3の とから, 検定によりP値を得た. プロタイプ1,3,4) と発育形質との関連性を プロタイプ1,3,4) と発育形質との関連性を により P 値を得た。 示した.これら3つのハプロタイプと発育形質 モデル式 によって説明される全分散に占める プロタイプ1,3,4) と発育形質との関連性を により モデル式によって説明される全分散に占めるハ P 値を得た。 示した.これら3つのハプロタイプと発育形質 示した.これら3つのハプロタイプと発育形質 モデル式 によって説明される全分散に占める (10,14 ハプロタイプ効果の分散の割合は以下の式となる。 示した.これら3つのハプロタイプと発育形質 モデル式 によって説明される全分散に占める プロタイプ効果の分散の割合は以下の式となる. (10,14週齢体重, 4-10週齢体重,4-10,10-14,0-14 ,10-14,0-14週齢平均日 週齢平均日 ハプロタイプ効果の分散の割合は以下の式となる。 (10,14 週齢体重,4-10,10-14,0-14 週齢平均日 増体重) との間に有意な関連性が認められ,ハプ 週齢体重,4-10,10-14,0-14 週齢平均日 ハプロタイプ効果の分散の割合は以下の式となる。 (10,14 増体重) との間に有意な関連性が認められ,ハプ 増体重) との間に有意な関連性が認められ,ハプ ロタイプ1はハプロタイプ3および4より優れて haplotype variance = ) (R_var F_var) / R_var × 100 増体重) との間に有意な関連性が認められ,ハプ haplotype variance= (R_var‒F_var /R_var– × 100 ロタイプ1はハプロタイプ3および4より優れて ロタイプ1はハプロタイプ3および4より優れて haplotype variance = (R_var – F_var) / R_var × 100 いた.また,ハプロタイプが全表型分散に占める ロタイプ1はハプロタイプ3および4より優れて haplotype variance = (R_var – F_var) / R_var × 100 いた.また,ハプロタイプが全表型分散に占める いた.また,ハプロタイプが全表型分散に占める 割合は 7.2-12.0%であった. ここで,R_var はモデル式よりハプロタイプ効 いた.また,ハプロタイプが全表型分散に占める 割合は7.2-12.0% ここで, R_varはモデル式よりハプロタイプ効 はモデル式よりハプロタイプ効 であった. 割合は 7.2-12.0%であった. ここで,R_var 果を除いたモデルでの残差分散,F_var はモデル 割合は 7.2-12.0%であった. ここで,R_var はモデル式よりハプロタイプ効 果を除いたモデルでの残差分散, F_var はモデル 果を除いたモデルでの残差分散,F_var はモデル 考 察 式より得られる残差分散を示す. 果を除いたモデルでの残差分散,F_var はモデル 式より得られる残差分散を示す. 考 察 考 察 式より得られる残差分散を示す. (CCK) は,食欲の調節に関 考 コレシストキニン 察 CCK)は,食欲の調節に関与 式より得られる残差分散を示す. コレシストキニン コレシストキニン((CCK) は,食欲の調節に関 与する消化管ペプチドである (Gibbs ら 1973). 結 果 コレシストキニン (CCK) は,食欲の調節に関 結 果 する消化管ペプチドである (Gibbs ).哺 与する消化管ペプチドである (Gibbs ら ら 1973 1973). 結 果 哺乳類では, は胃内容物の排出を抑制すると シークエンシングの結果,11 個の一塩基多型 与する消化管ペプチドである (Gibbs CCK ら 1973). 結 果 シークエンシングの結果, 個の一塩基多型 乳類では, CCK 哺乳類では, CCKは胃内容物の排出を抑制すると は胃内容物の排出を抑制すると シークエンシングの結果,1111 個の一塩基多型 ともに,胆嚢収縮を促進し,膵酵素と重炭酸塩の (SNPs)がニワトリゲノムのドラフトシーケンスに 哺乳類では, CCK は胃内容物の排出を抑制すると シークエンシングの結果,11 個の一塩基多型 ((SNPs)がニワトリゲノムのドラフトシーケンスに ともに,胆嚢収縮を促進し,膵酵素と重炭酸塩の SNPs)がニワトリゲノムのドラフトシーケンス ともに,胆嚢収縮を促進し,膵酵素と重炭酸塩の 分泌を増加させる.また,胃酸の分泌を抑制し, 対応する領域と異なり,5つのハプロタイプ (ハ ともに,胆嚢収縮を促進し,膵酵素と重炭酸塩の (SNPs)がニワトリゲノムのドラフトシーケンスに 分泌を増加させる.また,胃酸の分泌を抑制し, に対応する領域と異なり, 5つのハプロタイプ(ハ 分泌を増加させる.また,胃酸の分泌を抑制し, 対応する領域と異なり,5つのハプロタイプ (ハ 空腹を遅らせ,食物摂取量を減少させる (Gibbs プロタイプ1-5) が親個体で同定された (表2). 分泌を増加させる.また,胃酸の分泌を抑制し, 対応する領域と異なり,5つのハプロタイプ (ハ 空腹を遅らせ,食物摂取量を減少させる (Gibbs プロタイプ1 -5) が親個体で同定された (表2) . 空腹を遅らせ,食物摂取量を減少させる (Gibbs プロタイプ1-5) が親個体で同定された (表2). ら 1973; Kissileff ら 1981). CCK の2つの G タン 5つのハプロタイプの塩基配列は日本の DNA 空腹を遅らせ,食物摂取量を減少させる (Gibbs プロタイプ1-5) が親個体で同定された (表2). DNA ら 1973; 1973; Kissileffらら1981). 1981) .CCK の2つの タン 5つのハプロタイプの塩基配列は日本の ら Kissileff CCK の2つの GG タン 5つのハプロタイプの塩基配列は日本の DNA パク質共役受容体は データバンク (DDBJ) で以下のアクセション番 ら 1973; Kissileff ら 1981). CCK の2つの G CCKAR タン (Sankaran ら 1980)と 5つのハプロタイプの塩基配列は日本の DNA データバンク DDBJ ) で以下のアクセション番 Sankaranらら1980)と 1980)と パク質共役受容体はCCKAR パク質共役受容体は CCKAR( (Sankaran データバンク((DDBJ) で以下のアクセション番 コレシストキニンタイプ 号に登録されている (AB604331パク質共役受容体は 、AB604332、 CCKAR (Sankaran ら 1980)とB 受容体 (CCKBR ; Innis データバンク (DDBJ) で以下のアクセション番 号に登録されている AB604331 ,AB604332 コレシストキニンタイプBB受容体 受容体((CCKBR CCKBR; Innis コレシストキニンタイプ ; Innis 号に登録されている((AB604331 、AB604332 、 , と Snyder 1980) として同定されている.CCKAR AB604333 AB604334 家系集団に コレシストキニンタイプ B 受容体 (CCKBR ; Innis 号に登録されている (AB604331 、、 AB604332 、、AB604335)。F2 AB604333 , AB604334 ,AB604335 ) .家系集団に F2家系集団 とSnyder1980 として同定されている. CCKARは と Snyder 1980)) として同定されている.CCKAR AB604333、 AB604334 、AB604335)。F2 は消化管,CCKBR は脳に主に分布するが,両方 おいて, これらのハプロタイプから 15 の異なる遺 と Snyder 1980) として同定されている.CCKAR AB604333、AB604334、AB604335)。F2 家系集団に 15の異なる において, これらのハプロタイプから 消化管,CCKBRは脳に主に分布するが,両方の は消化管,CCKBR は脳に主に分布するが,両方 おいて, これらのハプロタイプから 15 の異なる遺 の受容体サブタイプは中枢神経系と腸に分布する. 伝子型 (1/1,2/2,3/3,4/4,5/5,1/2,1/3,1/4, は消化管,CCKBR は脳に主に分布するが,両方 おいて, これらのハプロタイプから 15 の異なる遺 遺伝子型 (1/1,2/2,3/3,4/4,5/5,1/2,1/3, 受容体サブタイプは中枢神経系と腸に分布する. の受容体サブタイプは中枢神経系と腸に分布する. 伝子型 (1/1,2/2,3/3,4/4,5/5,1/2,1/3,1/4, 1/5,2/3,2/4,2/5,3/4,3/5,4/5) が分離される の受容体サブタイプは中枢神経系と腸に分布する. 伝子型 (1/1,2/2,3/3,4/4,5/5,1/2,1/3,1/4, 1/4 ,1/5,2/3,2/4,2/5,3/4,3/5 ,4/5)が分離 1/5,2/3,2/4,2/5,3/4,3/5,4/5) が分離される 可能性が示唆された.したがって,Cha ら (1992) 1/5,2/3,2/4,2/5,3/4,3/5,4/5) が分離される 表2 )2家系集団における親個体の 表2 可能性が示唆された.したがって,Cha ら (1992) される可能性が示唆された.したがって, Chaら 表2F2)家系集団における親個体の 2家系集団における親個体の によって述べられているように 15 の遺伝子型を 可能性が示唆された.したがって,Cha ら (1992) 遺伝子型 表2遺伝子型 )遺伝子型 2家系集団における親個体の 15 の遺伝子型を (によって述べられているように 1992)によって述べられているように 15の遺伝 識別するためにミスマッチ増幅変異アッセイ によって述べられているように 15 の遺伝子型を 個体 数 遺伝子型 遺伝子型 識別するためにミスマッチ増幅変異アッセイ 子型を識別するためにミスマッチ増幅変異アッセ 個体 数 遺伝子型 㻝 㻟㻛㻡 (MAMA) PCR プロトコールを開発した.次に 識別するためにミスマッチ増幅変異アッセイ 個体 雄親 数 雄親 遺伝子型 㻝 㻟㻛㻡 (MAMA) PCR プロトコールを開発した.次に イ (MAMA )PCR プロトコールを開発した.次に 㻞 㻟㻛㻠 雄親 㻝 㻟㻛㻡 CCKAR 遺伝子のハプロタイプを識別するために (MAMA) PCR プロトコールを開発した.次に 㻞 㻟㻛㻠 CCKAR 遺伝子のハプロタイプを識別するために CCKAR 遺伝子のハプロタイプを識別するために 㻟 㻟㻛㻠 㻞 㻟㻛㻠 6つの PCR プライマーを設計し,表3に示したよ CCKAR 遺伝子のハプロタイプを識別するために 㻟 㻟㻛㻠 6つのPCR PCRプライマーを設計し,表3に示したよ プライマーを設計し,表3に示したよ 6つの 㻟 㻟㻛㻠 うに PCR 表3に示したよ と遺伝子解析を行った. 6つの PCR プライマーを設計し, 雌親 㻝 㻝㻛㻞 うに PCR と遺伝子解析を行った. うにPCRと遺伝子解析を行った. 㻝 㻝㻛㻞 15 個の予想される遺伝子型のうち,7個 雌親 (1/1, うに PCR と遺伝子解析を行った. 㻞 㻝㻛㻝 㻝 㻝㻛㻞 個の予想される遺伝子型のうち,7個((1/1, 15個の予想される遺伝子型のうち,7個 1/1, 雌親 㻞 㻝㻛㻝 㻟 㻝㻛㻝 1/3,1/4,1/5,3/3,3/4,4/4) が F2 個体で検出さ 15 個の予想される遺伝子型のうち,7個 (1/1, 㻞 㻝㻛㻝 㻟 㻝㻛㻝 1/3,1/4,1/5,3/3,3/4,4/4) 2 個体で検出さ 1/3 ,1/4,1/5,3/3,3/4,4/4が )がFF 2個体で検出さ 㻠 㻝㻛㻝 れた.ハプロタイプ2を示す F1 個体は F2 家系集 㻟 㻝㻛㻝 1/3,1/4,1/5,3/3,3/4,4/4) が F2 個体で検出さ 㻠 㻝㻛㻝 れた.ハプロタイプ2を示す F 個体はFF22家系集団 家系集 れた.ハプロタイプ2を示す F11個体は 㻡 㻝㻛㻝 㻠 㻝㻛㻝 団で偶然選ばれなかったため,F れた.ハプロタイプ2を示す F1 個体は F2 家系集 2 家系集団におい 㻡 㻝㻛㻝 団で偶然選ばれなかったため,F 家系集団におい 2 㻢 㻝㻛㻝 で偶然選ばれなかったため,F2家系集団において 㻡 㻝㻛㻝 㻢 㻝㻛㻝 てハプロタイプ2を持つ個体は全く検出されなか 団で偶然選ばれなかったため,F 2 家系集団におい 㻣 㻝㻛㻝 てハプロタイプ2を持つ個体は全く検出されなか 㻢 㻝㻛㻝 ハプロタイプ2を持つ個体は全く検出されなかっ 㻣 㻝㻛㻝 った.さらに,1/5 個体は1羽だけしか検出され てハプロタイプ2を持つ個体は全く検出されなか 㻤 㻝㻛㻝 㻣 㻝㻛㻝 った.さらに,1/5 個体は1羽だけしか検出され た.さらに, 1/5個体は1羽だけしか検出されな 㻤 㻝㻛㻝 なかったので, この個体は統計解析から除外した. った.さらに,1/5 個体は1羽だけしか検出され 㻥 㻝㻛㻝 㻤 㻝㻛㻝 なかったので, この個体は統計解析から除外した. 㻥 㻝㻛㻝 かったので,この個体は統計解析から除外した. なかったので, この個体は統計解析から除外した. 㻥 㻝㻛㻝 78 秋田県畜産試験場研究報告 第28号(2014) CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 表3 ミスマッチ増幅変異アッセイ法に用いた 表3 ミスマッチ増幅変異アッセイ法に用いたPCR 3&5プライマー プライマー サイズ 㻔㼎㼜㻕 ターゲットポジション 㻔㻭㻮㻞㻝㻠㻡㻟㻠㻧㻌㻻㼔㼗㼡㼎㼛㻘㻌㻞㻜㻜㻡㻕 㻼㻯㻾増幅 ハプロタイプ 㻝 㻞 㻟 㻗 – – プライマーセット プライマー (5'→3') 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻞㻞㻜㻙㻝㻠㻡 㻯㻯㻯㻭㻭㻯㻭㻳㼀㻭㻳㻳㻯㻯㻭㻳㼀㻭㻭㻯㻭 㻳㻳㼀㻳㻯㻭㻭㻳㼀㻭㻭㻳㻯㼀㻯㼀㼀㼀㻭㻭㻯㼍㻭㼠 㻝㻥㻜 㼓㻌㻞㻞㻜㻚㻌㻭㻌㻪㻌㻳 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻞㻞㻜㻙㻞㻟 㻯㻯㻯㻭㻭㻯㻭㻳㼀㻭㻳㻳㻯㻯㻭㻳㼀㻭㻭㻯㻭 㻳㻳㼀㻳㻯㻭㻭㻳㼀㻭㻭㻳㻯㼀㻯㼀㼀㼀㻭㻭㻯㼍㻭㼏 㻝㻥㻜 㼓㻌㻞㻞㻜㻚㻌㻭㻌㻪㻌㻳 – 㻗 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻣㻢㻣㻙㻝㻞㻡 㻳㻭㻳㼏㻳㼀㻳㼀㻯㼀㻭㻯㻭㼀㼀㻯㻭㻭㻯㼍㼀㼏 㻳㼀㼀㻳㻳㻯㼀㻳㼀㻳㻯㼀㻳㼀㼀㻳㼀㼀㻳㼀 㻞㻜㻤 㼓㻌㻣㻢㻣㻚㻌㼀㻌㻪㻌㻯 㻗 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻣㻠㻥㻙㻟㻠 㻯㼀㻭㼀㻳㼀㻳㻯㻭㻳㻳㼀㻭㼀㻯㼀㻯㼀㻳㼀㻳㼏㻳㼠 㻳㼀㼀㻳㻳㻯㼀㻳㼀㻳㻯㼀㻳㼀㼀㻳㼀㼀㻳㼀 㻞㻞㻤 㼓㻌㻣㻠㻥㻚㻌㼀㻌㻪㻌㻯 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻝㻡㻠㻣㻙㻝 㻳㻯㼀㻳㻯㼍㻯㼀㻭㻭㻳㻯㻭㻳㻭㻭㻳㼍㻯㼍 㻯㻯㻭㻯㼀㼀㻳㼀㻭㻳㻯㻯㻯㻯㼀㼀㻯㼀㻳㻭 㻝㻡㻝 㻯㻯㻷㻭㻾㻙㻝㻡㻠㻣㻙㻞㻟㻠㻡 㻯㼀㻳㻯㼓㻯㼀㻭㻭㻳㻯㻭㻳㻭㻭㻳㼍㻯㼓 㻯㻯㻭㻯㼀㼀㻳㼀㻭㻳㻯㻯㻯㻯㼀㼀㻯㼀㻳㻭 㻝㻤㻣 㻠 㻗 㻡 㻗 㻗 – – 㻗 – – 㻗 – – 㻗 㻗 – 㼓㻌㻝㻡㻠㻣㻚㻌㻳㻌㻪㻌㻭 㻗 – – – – 㼓㻌㻝㻡㻠㻣㻚㻌㻳㻌㻪㻌㻭 – 㻗 㻗 㻗 㻗 小文字のアンダーラインで示した箇所は、誘導されるミスマッチを表す。´末端の小文字で示 小文字のアンダーラインで示した箇所は、誘導されるミスマッチを表す。 3´−末端の小文字で示 した部分は、目的とする一塩基多型を表す。それぞれのプライマーセットが PCRによって増幅可 によって増幅可 した部分は、目的とする一塩基多型を表す。それぞれのプライマーセットが 3&5 能、不可能なハプロタイプは、それぞれ「+」または「−」として示す。 能、不可能なハプロタイプは、それぞれ「」または「–」として示す。 受容体遺伝子ハプロタイプ 表4 表4F2家系集団における発育形質の表型値およびコレシストキニン )2家系集団における発育形質の表型値およびコレシストキニン $A受容体遺伝子ハプロタイプ の影響 の影響 形質 個体数 表型値 ハプロタイプ 1 平均値±標準偏差 㻸㻾㼀 㻼 値 4週齢体重 (g) 10週齢体重 (g) 14週齢体重 (g) 0-4週齢平均日増体重 (g/日) 4-10週齢平均日増体重 (g/日) 10-14週齢平均日増体重 (g/日) 0-14週齢平均日増体重 (g/日) 㻠㻝㻣㻖 㻠㻝㻤 㻠㻝㻤 㻠㻝㻣㻖 㻠㻝㻣㻖 㻠㻝㻤 㻠㻝㻤 㻌㻌㻌㻞㻟㻝㻚㻝 㻌㻌㻌㻥㻢㻜㻚㻢 㻌㻝㻘㻠㻢㻢㻚㻥 㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻡㻚㻞 㻌㻌㻌㻌㻌㻝㻣㻚㻠 㻌㻌㻌㻌㻌㻝㻤㻚㻝 㻌㻌㻌㻌㻌㻝㻠㻚㻢 ± ± ± ± ± ± ± 㻌㻌㻌㻟㻤㻚㻟 㻌㻝㻢㻟㻚㻡 㻌㻞㻢㻜㻚㻣 㻌㻌㻌㻌㻝㻚㻜 㻌㻌㻌㻌㻟㻚㻟 㻌㻌㻌㻌㻠㻚㻠 㻌㻌㻌㻌㻞㻚㻣 㻌㻌㻝㻚㻡 㻌㻟㻢㻚㻢 㻌㻡㻣㻚㻣 㻌㻌㻝㻚㻡 㻌 㻠㻢㻚㻡 㻌 㻡㻜㻚㻝 㻌 㻡㻣㻚㻡 㼚㻚㼟㻚 㻡㻚㻣 × 㻝㻜 㻙㻤 㻝㻚㻥 × 㻝㻜 㻙㻝㻞 㼚㻚㼟㻚 㻠㻚㻠 × 㻝㻜 㻙㻝㻜 㻣㻚㻡 × 㻝㻜 㻙㻝㻝 㻞㻚㻞 × 㻝㻜 㻙㻝㻞 ハプロタイプ 3 ハプロタイプ 4 平均値±標準誤差 平均値±標準誤差 平均値±標準誤差 㻌㻡㻠㻣㻚㻥 㻌㻤㻢㻣㻚㻝 㻌㻌㻌㻝㻜㻚㻝 㻌㻌㻌㻝㻝㻚㻠 㻌㻌㻌㻌㻌㻤㻚㻣 - ± ± - ± ± ± 㻝㻣㻚㻜 㻞㻟㻚㻞 㻌㻠㻥㻢㻚㻤 㻌㻣㻣㻥㻚㻞 㻜㻚㻟 㻜㻚㻞 㻜㻚㻞 㻌㻌㻌㻌㻥㻚㻜 㻌㻌㻌㻝㻜㻚㻝 㻌㻌㻌㻌㻣㻚㻤 - ± ± - ± ± ± 㻝㻤㻚㻞 㻞㻠㻚㻤 㻌㻡㻜㻞㻚㻣 㻌㻣㻥㻜㻚㻜 㻜㻚㻠 㻜㻚㻟 㻜㻚㻟 㻥㻚㻜 㻝㻜㻚㻞 㻣㻚㻥 - ± ± - ± ± ± 㻝㻤㻚㻥 㻞㻡㻚㻣 㻜㻚㻠 㻜㻚㻟 㻜㻚㻟 分散 㻾㼢㼍㼞 㻲㼢㼍㼞 㻔㻾㼢㼍㼞 -㻲㼢㼍㼞 㻕㻛 - 㻝㻢㻡㻡㻠㻚㻣 㻟㻝㻤㻡㻞㻚㻥 - 㻢㻚㻤 㻣㻚㻝 㻟㻚㻟 - 㻝㻡㻟㻞㻡㻚㻝 㻞㻤㻜㻞㻝㻚㻡 - 㻢㻚㻞 㻢㻚㻟 㻞㻚㻥 㻾㼢㼍㼞㻌㻔㻑㻕 - 㻣㻚㻠 㻝㻞㻚㻜 - 㻥㻚㻠 㻝㻝㻚㻡 㻝㻞㻚㻜 LRT: 対数尤度比,n.s.有意差なし /57対数尤度比QV有意差なし Rvar : Fvar :性、ハプロ 5YDUハプロタイプ効果を除いた性とポリジーン効果を含むモデルでの残差分散, ハプロタイプ効果を除いた性とポリジーン効果を含むモデルでの残差分散)YDU 性、ハ タイプ、ポリジーン効果を含んだモデルでの残差分散 プロタイプ、ポリジーン効果を含んだモデルでの残差分散 *4週齢体重と0-4、4-10週齢平均日増体重(g/日)は、1個体データ不足による。 週齢体重と 週齢平均日増体重J日は、 個体データ不足による。 CCK ,CCKAR,CCKBRの機能は鳥類や哺乳類で CCK,CCKAR,CCKBR の機能は鳥類や哺乳類で 広く研究されている.例えば, CCK の静脈注射 広く研究されている.例えば,CCK の静脈注射は はニワトリの食物摂取量を抑制する (Savory ニワトリの食物摂取量を抑制する (Savory と と Gentle 1980).また,CCK はニワトリの腸運動 Gentle, , 1980).また,CCK はニワトリの腸運動 ((Rodríguez-Sinovas Rodríguez-Sinovasらら1997; 1997 ;Martin ら 1995; Martin ら 1995; Martinez ら 1995),胆嚢の胆汁の流れ 1995),胆嚢の胆汁の流れ( Dukeらら Martinez ら (Duke 1987)を調節する.さらに,CCKはニワトリとア 1987) を調節する.さらに,CCK はニワトリとア ヒルの膵臓からアミラーゼ分泌を刺激する(Satoh ヒルの膵臓からアミラーゼ分泌を刺激する ら 1994;Xiao と Cui2004).近年,Ohkuboら (Satoh ら 1994; Xiao と Cui 2004).近年,Ohkubo ( )は, CCKARのmRNA は,前胃と砂嚢を除 ら2007 (2007) は,CCKAR の mRNA は,前胃と砂嚢 き,主に消化管に分布するが,CCKBRのmRNA を除き,主に消化管に分布するが,CCKBR の は主に脳に存在することを報告している. mRNA は主に脳に存在することを報告している. CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 79 これらの研究は,CCK,CCKAR,CCKBRが哺乳 たSNPが第4番染色体上のドラフトシーケンスマ 類と同様に鳥類の食欲調節に重要な役割を果たし ップ(2006 assembly) (AB604331:g.420C>A) ていることを示唆している. 75630198bpに検出された.g.420C>Aにおいて これらの3つの遺伝子の作用を研究するために ハプロタイプ1のSNPはAアリルであったが,ハ CCK ,CCKAR ,CCKBR 遺伝子ノックアウトマウ プロタイプ3および4,ニワトリゲノムのドラフ スが作出されている(Robinson ら 2000).しかし トシーケンスではCアリルであった.これまでブ ながら,飽満への CCK の影響が立証されている ロイラー,レイヤー,烏骨鶏について,このSNP にもかかわらず,3頭のノックアウトマウスは全 は報告されていない(Ensembl Genome Browser て成長し,正常な体重を示す.対照的に,遺伝子 2004). 突然変異(Miyasaka ら 1994)のためにCCKAR 遺 YY1はプロモーターに依存する転写活性化因子, 伝子を欠くOtsuka Long Evans Tokushima Fatty 抑制体,転写開始要素結合タンパク質として機能 ( OLETF )ラットはコントロール( Long Evans する亜鉛フィンガータンパク質である (Shrivastava Tokushima Otsuka)ラットより出生後1日目から と Calame 1994).Houston ら(2006)はブタの 大きくなるまで体重が重い (Schroeder ら 2006) . CCKAR遺伝子の5′UTRにおけるYY1結合部位の CCKAR 遺伝子ノックアウトマウスとOLETFラッ SNPが飼料摂取量や発育に影響することを報告し トとの表現型における違いは,CCKAR 遺伝子の ている.このメカニズムはHoustonら(2006)によ 欠損が生理学的変化に影響を及ぼす種間差による って推察されているものと同様であり,ブタとニ ものかもしれない. ワトリとの種間差に関係がないと考えられる.し 本研究では,CCKAR 遺伝子がノックアウトされ かしながら,各SNPが遺伝子発現調節に及ぼす影 ていないので,タンパク質配列によるハプロタイ 響を解明するためには,今後更なる研究が必要で プと発育形質との関連性について説明することは ある. できない.さらに,CCKAR 遺伝子のコード領域に 以上の結果から,発育が異なる比内鶏の系統 検出されたSNPsによるアミノ酸配列の違いは認め 間交配により作出された F 2家系集団において, られなかった.よって,CCKAR 遺伝子のタンパ CCKAR 遺伝子のハプロタイプと発育形質に有意 ク質は機能上正常であり,今のところ,CCKAR な関連性が認められ, CCKAR 遺伝子のハプロタイ 遺伝子のハプロタイプに何か機能的意義があるか プが比内鶏の発育形質改良のための選抜指標とし どうかは不明である.本研究で検出された関連 て有効であることが確認された. は,直接これらの形質の調節にかかわるハプロタ イプと別の連鎖遺伝子との間の連鎖不平衡によっ 謝 辞 て引き起こされる可能性も考えられる. 本研究は「動物ゲノムを活用した新市場創出の CCKAR 遺伝子のハプロタイプと発育形質との ための技術開発(動物ゲノム情報を活用した新市 関連性を説明する1つの可能性として,CCKAR 場創造のための研究) 」 委託事業によるものです. 遺伝子の 5 ′非翻訳領域(5 ′UTR)における SNP が CCKAR 遺伝子の発現調節に関与している可能性 引用文献 が考えられる.実際,CCKAR 遺伝子の 5 ′UTR Abasht B, Dekkers JCM, Lamont SJ. 2006. Review における推定YY1結合部位(TCTTC(C/A)TAG) of quantitative trait loci identified in the chicken. (Park と Atchison 1991;Shi ら 1991)に対応し Poultry Science 85, 2079-2096. 80 秋田県畜産試験場研究報告 第28号(2014) Ankra-Badu GA, Le Bihan-Duval E, Mignon-Grasteau Comparative and Physiological Psychology 84, S, Pitel F, Beaumont C, Duclos MJ, Simon J, Carré 488-495. W, Porter TE, Vignal A, Cogburn LA, Aggrey SE. Houston RD, Haley CS, Archibald AL, Cameron ND, 2010. Mapping QTL for growth and shank traits in Plastow GS, Rance KA. 2006. A polymorphism in chickens divergently selected for high or low body the 50-untranslated region of the porcine weight. Animal Genetics 41, 400-405. cholecystokinin type A receptor gene affects feed Andersson L. 2001. Genetic dissection of phenotypic intake and growth. Genetics 174, 1555-1563. diversity in farm animals. Nature Reviews Genetics Hu ZL, Fritz ER, Reecy JM. 2007. AnimalQTLdb: a 2, 130‒138. livestock QTL database tool set for positional QTL Arya R, Duggirala R, Jenkinson CP, Almasy L, information mining and beyond. Nucleic Acids Blangero J, O’Connell P, Stern MP. 2004. Evidence Research 35, 604-609. of a novel quantitative-trait locus for obesity on Innis RB, Snyder SH. 1980. Distinct cholecystokinin chromosome 4p in Mexican Americans. The receptors in brain and pancreas. :Proceedings of American Journal of Human Genetics 74, 272-282. the National Academy of Sciences of the United Cao ZP, Wang SZ, Wang QG, Wang YX, Li H. 2007. States of America 77, 6917‒6921. Association of spot14α gene polymorphisms with Kissileff HR, Pi-Sunyer FX, Thornton J, Smith GP. body weight in the chicken. Poultry Science 86, 1981. C-terminal octapeptide of cholecystokinin 1873‒1880. decreases food intake in man. The American Cha RS, Zarbl H, Keohavong P, Thilly WG. 1992. Journal of Clinical Nutrition 34, 154-160. Mismatch amplification mutation assay (MAMA): Lei M, Peng X, Zhou M, Luo C, Nie Q, Zhang X. application to the c-H-ras gene. PCR Methods and 2008. Polymorphisms of the IGF1R gene and their Applications 2, 14-20. genetic effects on chicken early growth and Duke GE,Larntz K,Hunter H.1987.The influence of carcass traits. BMC Genetics 9, 70. cholecystokinin, vasoactive intestinal peptide and Lei MM, Nie QH, Peng X, Zhang DX, Zhang XQ. secretin on pancreatic and bilary secretion in laying 2005. Single nucleotide polymorphisms of the hens. Comparative Biochemistry and Physiology chicken insulin-like factor binding protein 2 gene Part C: Pharmacology 86, 97‒102. associated with chicken growth and carcass traits. Ensembl Genome Browser. European Bioinformatics Poultry Science 84, 1191-1198. Institute, UK. http//uswest.ensembl.org/index. html. Leng L, Wang S, Li Z, Wang Q, Li H. 2009. A 2004. polymorphism in the 3 ′ -flanking region of Fang M, Nie Q, Luo C, Zhang D, Zhang X. 2010. insulin-like growth factor binding protein 2 gene Associations of GHSR gene polymorphisms with associated with abdominal fat in chickens. Poultry chicken growth and carcass traits. Molecular Science 88, 938-942. Biology Reports 37, 423‒428. Li ZH, Li H, Zhang H, Wang SZ, Wang QG, Wang Gibbs J, Young RC, Smith GP. 1973. Cholecystokinin YX. 2006. Identification of a single nucleotide decreases food intake in rats. Journal of polymorphism of the insulin-like growth factor binding protein 2 gene and its association with CCKAR ハプロタイプと発育形質との関連性 growth and body composition traits in the 力丸宗弘,佐々木修,小出水規行,小松恵,高橋 chicken. Journal of Animal Science 84, 2902-2906. 大希,鈴木啓一,高橋秀彰.2013. 比内鶏の発 Martín MT, Fernández E, Rodríguez-Sinovas A, 育形質関連 QTL 解明とその検証(第1報)− Goñalons E. 1995. Effects of cholecystokinin on 比内鶏の発育形質に関するQTL解析−.秋田県 chicken cecal motility: mechanisms involved. Life 畜産試験場研究報告 27,27-33. Sciences 56, 601‒610. Robinson SW, Dinulescu DM, Cone RD. 2000. Martínez V, Jiménez M, Goñalons E, Vergara P. Genetic models of obesity and energy balance in the 1995. Modulation of the migrating myoelectric mouse. Annual Review of Genetics 34, 687-745. complexes by cholecystokinin and gastrin in the Rodriguez-Sinovas A, Fernandez E, Manteca X, gastrointestinal tract of chickens. Poultry Science Fernández AG, Goñalons E. 1997. CCK is involved 74, 563‒576. in both peripheral and central mechanisms Miyasaka K, Kanai S, Ohta M, Kawanami T, Kono A, controlling food intake in chickens. The American Funakoshi A. 1994. Lack of satiety effect of Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and cholecystokinin (CCK) in a new rat model not e Comparative Physiology 272, R334-340. xpressing the CCKAR eceptor gene. Neuroscience Rubin CJ, Zody MC, Eriksson J, Meadows JR, Sherwood Letters 180, 143‒146. E, Webster MT, Jiang L, Ingman M, Sharpe T, Ka S, Nie Q, Fang M, Xie L, Zhou M, Liang Z, Luo Z, Wang Hallböök F, Besnier F, Carlborg O, Bed'hom B, G, Bi W, Liang C, Zhang W, Zhang X. 2008. The Tixier-Boichard M, Jensen P, Siegel P, Lindblad- PIT1 gene polymorphisms were associated with Toh K, Andersson L. 2010. Whole-genome chicken growth traits. BMC Genetics 9, 20. resequencing reveals loci under selection during Ohkubo T,Shamoto K,Ogino T,2007. Structure and chicken domestication. Nature 464, 587‒591. tissue distribution of cholecystokinin-1 receptor in Sankaran H, Goldfine ID, Deveney CW, Wong KY, chicken. Journal of Poultry Science 44, 98-104. Williams JA. 1980. Binding of cholecystokinin to Park K and Atchison M. 1991. Isolation of a high affinity receptors on isolated rat pancreatic candidate receptor/activator, NF-E1(YY-1, δ), acini. The Journal of Biological Chemistry 255, that bind to the immunoglobulin k 3′enhancer 1849‒1853. immunoglobulin heavy-chain μE1 site. Satoh S, Furuse M, Choi YH, Okumura J. 1994. Proceedings of the National Academy of Sciences Cholecystokinin is not a major regulator in the of the United States of America 88, 9804-9808. digestive system in the chicken. Cellular and And the Pérez-Enciso M, Misztal. I. 2004. Qxpak: a Molecular Life Sciences 50, 812-814. versatile mixed model application for genetical Savory CJ and Gentle MJ. 1980. Intravenous injections genomics and QTL analyses. Bioinformatics 20, of cholecystokinin and caerulein suppress food 2792-2798. intake in domestic fowls. Experientia 36, 1191-1192. Qu JT, Tang SQ, Sun DX, Zhang Y. 2009. Schroeder M, Zagoory-Sharon O, Lavi-Avnon Y, Polymorphisms of three neuroendocrine-correlated Moran TH, Weller A. 2006. Weight gain and genes associated with growth and reproductive maternal behavior in CCK1 deficient rats. traits in the chicken. Poultry Science 88, 722-727. Physiology and Behavior 89, 402-409. 81 82 秋田県畜産試験場研究報告 第28号(2014) Shi Y, Seto E, Chang LS, and Shenk T. 1991. Transcriptional repression by YY1, a human GLI-kruippel-protein, and relief of repression by adenovirus E1A protein. Cell 67, 377-388. Shrivastava A, Calame K. 1994. An analysis of genes regulated by the multi-functional transcriptional regulator Yin Yang-1. Nucleic Acids Research 22, 5151-5155. UCSC Genome Browser Home. University of California, Santa Crus, USA. http//genome.ucsc.edu/. 2004. Uemoto Y, Sato S, Ohtake T, Sato S, Okumura Y, Kobayashi E. 2011. Ornithine decarboxylase gene is a positional candidate gene affecting growth and carcass traits in F2 intercross chickens. Poultry Science 90, 35‒41. Xiao R and Cui Z J. 2004. Mutual dependence of VIP/ PACAP and CCK receptor signaling for a physiological role in duck exocrine pancreatic secretion. The American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology 286, R189-198. Zhang ZR, Liu YP, Yao YG, Jiang XS, Du HR, Zhu Q. 2009. Identification and association of the single nucleotide polymorphisms in calpain3 (CAPN3) gene with carcass traits in chickens. BMC Genetics 10, 10.
© Copyright 2025 ExpyDoc