2012年1月31日 公開実験打ち合わせ クライオプロテクタントを用いた 「結晶工学的処理」による結晶の改善の試み 高エネルギー加速器研究機構 千田美紀 14年1月31日金曜日 1 クライオプロテクタントの探索 1. 結晶化条件をもとに、標準母液を作成する。（沈殿剤濃度を1.2∼2倍とし、final pHを結晶化 溶液と合わせたものを用いることが多い。） ※標準母液：結晶にヒビが入ったり溶けたりすることなく数日間安定に保存できる溶液。 ○ 2. 20∼30%(w/v)になるようにクライオプロテクタントを標準母液に加えた溶液を作成する。クライ オプロテクタントを加えるとpHが大きく変化する場合があるため、finalのpHが結晶化溶液（標準母 液）と同じになるように調製する必要がある。 3. 同じように処理した見た目が同じような結晶でも結晶の質が同じとは限らない。最低でも同じ 手順で凍結した結晶を3個以上用意して、良し悪しを判断することが望ましい。 4.まずは、クライオプロテクタント溶液に30秒ソーキングした結晶を凍結し、Uni-Puckに詰め た結晶をスクリーニングに用いるのがよいのではないか？ 14年1月31日金曜日 2 クライオプロテクタントの探索のイメージ Option Glycerol Ethlene glycol PEG200 PEG400 PEG600 PEG4000 PVP K-15 MPD 1,6-Hexanediol 1,2-Propanediol DMSO 2-Propanol Ethanol Methanol D-Sucrose D-Raffinose D-Glucose Trehalose (THL) Erythritol Xylitol A screening THL Erythritol Combination B THL + Erythritol Hampton Research CryoPro 14年1月31日金曜日 3 標準母液とクライオプロテクタントの例 サンプル名 結晶化条件 標準母液 クライオプロテクタント 溶液 2.1 M sodium formate 0.1 M acetate buffer pH 5.3 2.5 M sodium formate 0.1 M acetate buffer pH 5.3 2.7 M ammonium sulfate 0.1 M sodium citrate 0.2 M K/Na tartrate 30 mM magnesium chloride pH 5.4 2.75 M ammonium sulfate 0.1 M sodium citrate 0.2 M K/Na tartrate 30 mM magnesium chloride pH 5.4 30%(w/v) trehalose 2.75 M ammonium sulfate 0.1 M sodium citrate 0.2 M K/Na tartrate 30 mM magnesium chloride pH 5.4 CagA(1-876) 7-10%(v/v) ethanol 50 mM Tris-HCl pH 7.0 20%(v/v) ethanol 50 mM Tris-HCl pH 7.0 30%(w/v) trehalose 20%(v/v) ethanol 50 mM Tris-HCl pH 7.0 DDO 10%(w/v) PEG8000 0.1 M acetate buffer pH 4.7 20%(w/v) PEG8000 0.1 M acetate buffer pH 4.7 20%(v/v) glycerol 20%(w/v) PEG8000 0.1 M acetate buffer pH 4.7 BphA4 TAF-Ibeta 14年1月31日金曜日 27.5% Glycerol 2.5 M sodium formate 0.1 M acetate buffer pH 5.3 4
© Copyright 2024 ExpyDoc
![[Vol.47] Shinwasorb を用いた有機溶剤の分析例](http://s3.expydoc.com/store/data/007277292_1-08a9eb3601ace04482ecd587b9bc378e-250x500.png)
