成 膜 大 学 理 工学 研 究 報 告 J.Fac.Sci.Tech,SeikeiUniv. Uo1.49No.2(2012)pp.7-14 共役 トリエ ン酸 エ ス テル の酸 化 と酸 化 防止 谷保 諒*1,山 本 幸 弘*z,原 節子 紹 Oxidationandanti-oxidationofconjugatedtrienoicfattyacidmethylester RyoTANIYASU*1,YukihiroYAMAMOTO*Z,andSetsukoHARA*3 ABSTRACT:Althoughconjugatedfattyacidsaエepaidmuchatten巨onto血eir血terestingphysiologicpropertiessuch asanticancer,anh-aエteriosclerosis,anh-hypertensionactivities,lossinbodyfatetc,血ereisfewinformationon血eir oxidationbehaviors.Inthepresentwork,theoxidationbehaviorofconjugatedlinolenicacidmethylester(CLN-Me) wascompaエedwi血co皿espondj皿gnon-conjugateda-linolenicacidmethylester(LN-Me)under血evaエiousoxidation conditionsandtheantioxidativeactivitiesofsomeradicalscavengingantioxidants,suchastocopherol(Toc), sesamol(SE),propylgallate(PG)andepigallocatecMngallate(EGCG),forCLN-Mewereevaluated. Under血eoxidationtestsat5,30andl50℃,血eoxidationbektaviorsofCLN-Mewereshowntobedifferent丘om thoseofLN-Me.TheCLN-MewasconsideredtoformnotonlyhydroperoxidestrtatismainproductsofLN-Mebut alsocyclicperoxidesatprimaryoxidationstage.Inthermaloxidationat150°C,polymerizationreactionmightbeprior todecompositionreaction,owingtoformalarge〔 脚 血tyofmorepolymerizedpro〔 加ctsinCLN-Me. Theproductionsofperoxides,decompositioncompoundsandpolymericcompoundsfromCLN-Mebyoxidationwere abletobepreventedbytheadditionofToqSE,PGandEGCG,andEGCGshowedthestrongestantioxidanteffectfor CLN-MeassameasforLN-MebasedontheMghestradicalscaveng血gabilityamongtheseantioxidants. Keywords:conjugatedlinolerucacid,a-linolenicacid,autoxidation,thermaloxidation,anti-oxidation (ReceivedSeptember12,2012) 1緒 論 (CLA)で あ り4),5),1979年Parizaら 対 す る抑 制 作 用 が 報 告 さ れ6),7),そ 近 年,生 活 習 慣 病 の 発 症 予 防 に対 す る食 品 中 の各 種機 能 性 成 分 の有 効 性 が 注 目され て い るD。 エ ネ ル ギ ー の 約1/4を 日本 人 の総 摂 取 占 め る脂 質 につ いて も,エ ネ ル ギ に よ り皮膚 が ん に の 後,脂 質代 謝 改 善 勤 脈 硬 化 作 用,運 勤 能 力 向上 作 用,体 脂 肪 低 下 作 用,抗 作 用,血 圧 上 昇抑 制作 用 な ど種 々 の生 理 活 性 を 有 して い る こ と が 明 ら か に され て き た8).12)。 ー源 や 必 須 脂 肪 酸 の供 給源 と して の役 割 に加 えて ,生 体 ま た,共 役 ト リ エ ン 構 造 を 持 っ た 共 役 リ ノ レ ン 酸(CLN) 内に お け る種 々の 生 理機 能 が 明 らか と な り,脂 質 の摂 取 と し て,a一 量 の み な らず 脂 質 を構 成 す る脂 肪 酸 の種 類 が 重 要 で あ る 成 脂 肪 酸 の 約75%を ら に 東 南 ア ジ ア,酉 ア ジア こ とが 認 識 され る よ うにな った2口)。 一 般 の食 用 勤 植 物 を 中 心 に 世 界 各 国 で 生 産 さ れ て い る ニ ガ ウ リ,世 界各国 油 脂 に含 まれ る多 価 不 飽 和 脂 肪 酸 はそ の殆 どが リノー ル で 飲 料,ジ 酸 やa一 リノ レ ン酸 に代 表 され る よ うに 二重 結 合 が 非 共 薬 の 原 料 で あ る キ サ サ ゲ な ど の 植 物 油 に も30∼70%程 役 型(-CH=CH-CHz-CH=CH-)で 度 含 ま れ て お りB)潤,CLAよ あ るの に 対 し,共 役 脂 肪 酸 と は 二 重 結 合 が 共 役 型(-CH=CH-CH=CH-)で あ る多 価 不 エ レ オ ス テ ア リ ン酸(図1)は 占 め,さ ャム な どに利 用 され て い るザ ク ロお よび 漢 方 りも さ ら に強 い抗 が ん 作 用 や体 脂肪 燃 焼 作用 等 の 生 理機 能 を 示 す こ とが 報 告 され て い る15・16)。 飽 和 脂 肪 酸 の 総 称 で あ る。 共 役 脂 肪 酸 として,最 初 に注 目され た もの が 主 に反 鯛 勤 物 の 肉や 乳 製 品 の脂 肪 に少 量 含 ま れ て い る共 役 ジ エ ン構 造 を 有 す る共 役 リ ノー ル 酸 制 ・理 工 学 研 究 科 物 質 生 命 コ ー ス 修 士 課 程 修 了 生 ≪z・理 工 学 部 助 教 凪 理 工 学 部 教 授(s}tara@就 キ リ油 で は 構 図1α .seikei.acjp) 一7一 一エ レオ ス テ ア リ ン酸 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 こ の よ うに,共 Vo1.49No.2(2012.12) 験 役 脂肪 酸 は 種 々 の 生 理 活 性 を 有 す るた め,健 康 補 助 食 品 や 医 薬 品 へ の 応 用 が 期 待 され て い る が, CLAもCLNも 二 重 結 合 を2つ 脂 肪 酸 で あ る た め,そ が 問 題 と な り,適 ま た は3つ 含 む多価不飽和 の 使 用 に 際 して は そ の 酸 化 安 定性 試 料 と し て 使 用 し たCLN-MeとLN-Meは,林 切 な 酸 化 防 止 法 の 開 発 が 求 め られ て い る。 し か し,共 役 脂 肪 酸 は,リ ケ ミカル (有)製 の キ リ 油 と ア マ ニ 油 を 常 法 に よ りケ ン 化,酸 ノ ー ル 酸 や α 一リ ノ レ ン 酸 分解 し て 得 た 脂 肪 酸 を 硫 酸 触 媒 下 に メ チ ル エ ス テ ル 化 し た 後, の よ うな 二 つ の 二 重 結 合 に 挟 ま れ た 活 性 メ チ レ ン 基 を 持 真 空 蒸 留 に よ っ て 精 製 し て そ れ ぞ れ 調 製 し た 。 ま た, っ 非 共 役 型 多 価 不 飽 和 脂 肪 酸 と は か な り異 な る 酸 化 挙 動 CLN-MeとLN-Meの を 示 す こ と が こ れ ま で に 示 唆 さ れ て い る17)。 す な わ ち, 示 し た 。 試 薬 は す べ て 和 光 純 薬 ㈱ 製,SIGMA社 Brauerら やKummerowら 東 京 化 成 工 業 ㈱ 製 の 市 販 の 特 級 ま た は1級 はCLNの 酸 化 にお い て は酸 素 吸 収 量 に 比 例 し て 共 役 ト リエ ン が 減 少 し,共 加 す る こ と,ま たCLAエ 役 ジエ ンが 増 脂 肪 酸 組 成 と性 状 の 代 表 例 を 表1に 製 または 試薬 をそのま ま使 用 した。 ス テ ル で は 共 役 ジ エ ンが 酸 素 吸 収 量 に 比 例 し て 消 失 す る こ と を 見 出 し,酸 素が二重結合 へ 直 接 付 加 す る こ と を 示 唆 し て い る18)。Lunaら 表1 は,CLA で は 酸 化 一 次 生 成 物 で あ る ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ドの 生 成 は 非 常 に 少 な い の に 対 し て,3量 脂 肪 酸 組 成 体以上の重合物を形成 し や す い こ と を 報 告 し て い る19)。ま たHamalainenら は,CLA は 二 重 結合 付 近 の 水 素 ラジ カ ル が 引 き抜 か れ る こ とか ら パ ル ミチ ン酸 6.0 ス テ ア リン酸 3.9 オ レイ ン酸 10.2 リノー ル 酸 11.1 ( 酸 化 が 進 む こ と と,ト コ フ ェ ロ ー ル(Toc)の 存在に よ り % 一 54.6 ) 酸 化 が 防 止 さ れ る こ と を 示 し て い る20)。 当 研 究 室 で は,こ れ ま で に 久 下 らが 平 均 不飽 和 度 が ほ ぼ 等 し い 共 役 脂 肪 酸 含 有 油 脂(CLN-TAG)と 含 有 油 脂(LN-TAG)の 非 共役 脂 肪 酸 酸化 挙動 を非水 系お よび乳化 系で 比 較 し,CLN-TAGはLN-TAGよ 解 物,極 ル(SE),エ 2.4 過 酸 化 物 価(PV,meq/kg) 0.7 ア ニ シ ジ ン 価(AnV) 31.3 もLN-TAG同 様 に,Toc,セ サモー ピ ガ ロ カ テ キ ン ガ レ ー ト(EGCG),ケ ルセ 1.2 価(AV) 性 化 合 物 お よび 重 合 0.0 トコ フ ェ ロ ー ル 量(ppm) 物 は 生 成 し や す い こ と を 明 ら か に し て い る21),zz)。 ま た, 閑 田 ら は,CLN-TAGに 平均不飽和度 り ヒ ド ロ ベ ル オ キ シ ドを 生 成 し に く い の に 対 し,分 一 CLN 0.0 重 合 物 量(%) チ ン な どの ラ ジカ ル 捕捉 型 酸 化 防 止剤 に よ る酸 化 防 止 効 果 が 認 め ら れ,ラ ジ カ ル 消 去 能 が 高 い 程,CLN-TAGに 対 共役 脂 肪 酸 の酸 化 挙動 に及 ぼす 温度 の影 響 を 明 らか に す る 酸 化 防 止 効 果 が 顕 著 で あ っ た と 報 告 し て い る23)。 さ す る た め,常 温 で の 自動 酸化 試 験 に加 え て,非 共役 脂 肪 らに これ ま で の研 究 に お い て は キ リ油 な ど共役 脂肪 酸含 酸 の 主 な酸 化 第 一 次 生成 物 で あ る ヒ ドロペ ル オ キ シ ドの 有 天 然 油 脂 を 実 験 試 料 と し て 用 い て い た が,そ 動 に 対 し て は 共 役 脂 肪 酸 含 有 率,脂 TAG分 の酸化挙 生 成 ・分 解 を抑 制 す る 系 で あ る低 温 で の酸 化 試 験 お よび 肪 酸組 成 の み な らず ヒ ドロペ ル オ キ シ ドの生 成 ・分 解 を促 進 す る系 で あ る高 子 種 組 成 も影 響 す る こ と が 報 告 され て い る24)。 温 で の 酸 化 試 験 を行 い,こ そ こ で 本 研 究 で は,こ れ ま で の 研 究 結 果 を よ り詳 細 に CLN-Meの 解 明 す る こ と を 目 的 と し て,α 一 エ レオ ス テ ア リン酸 含 有 含 有 油 脂 で あ る ア マ ニ 油 か らCLNお の メ チ ル エ ス テ ル で あ るCLN-Meお よ びLN-Meを 酸 化 挙 動 をLN-Meと 内径3の よ びLN 試 料 ビ ンに 試 料(CLN-Me,LN-Me)を 加 調 製 し, 入 れ て150℃ に加 熱 した。 子 種 や 平 均 不飽 和 度 な どの 種 々 の影 響 因 子 を排 除 し た 実 験 試 料 の 酸 化 試 験 を 各 種 条 件 下 に 行 う こ と で,共 役 脂 肪 酸 の 酸 化 挙 動 を 詳 細 に 追 跡 し た 。 さ ら に,共 役脂 肪 酸 に 対 す るToc,SE,没 よび EGCGな 下 記 の よ うに 比 較 した。 え,30℃ また は5℃ に静 置 した 。高 温 酸化 試 験 で は100 ナ ス フ ラ ス コに試 料20を TAG分 の温 度 にお ける す な わ ち,自 動 酸 化 試 験 お よ び低 温酸 化 試 験 に お い て は 油 脂 で あ る キ リ 油 と 非 共 役 ト リエ ン 酸 で あ る α 一リ ノ レ ン(LN)酸 れ ら3種 食 子 酸 プ ロ ピ ル(PG)お ラ ジ カ ル 反 応 を 促 進 さ せ た 系 に お け るCLN-Meの 挙 動 を 検 討 す る た め に,ラ ジ カ ル 発 生 剤 で あ る2,2'一 ゾ ビ ス(2一ア ミ ジ ノ プ ロ パ ン)二 塩 酸 塩 ど の 酸 化 防 止 作 用 に つ い て も 検 討 した 。 一g一 酸化 ア を試 料 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 (CLN-Me,LN-Me)20当 た り に0」 験 を 行 っ た 。 な お,AAPHは を 内 径3の し,結 添加 して 酸 化試 水 溶 性 で あ る た め,試 料20 て0/W型 ま た,CLN-Me,LN-Meに 乳 液(0/W=3/7)を ま た,各 調 製 した。 リ ノ ー ル 酸 メ チ ル(LA-Me)を 試 料 問 の 有 意 差 検 定 は,Excel統 お け る有 意 差 の有 無 を 評 価 した。 3.結 同 様 の 酸 化 試 験 に 供 した 。 PG,EGCGをCLN-Me,LN-Meに 果 と考 一Toc:6.8%, CLN-MeとLN-Meの /3-Toc:0.4%,y-Toc:70.8%,S-Toc:22.0%),SE, それ ぞれ 添加 して 酸 化 PVとAnVの 酸 化 防 止 剤 は 試 料gに 対 し,そ れ ぞ れ4.3×10 (ToclOOO相 て メ タ ノー ル に 溶解 させ て 添 常温 お よび 低 温 酸 化 試 験 にお け る 経 時 変 化 を 図2に ま ず,30℃ 試 験 を 行 い,こ れ ら の 酸 化 防 止 能 を 評 価 し た 。す な わ ち, 比 較 し て み る と,PVに ら4000hま お い て はLN-Meは 径5の で あ っ た 。 一 方,CLN-Meで を 測 定 して 酸 化 防 止 能 を 評価 した 。 度 まで達 し の 後 は 低 下 し て 試 験 終 了 時 に は400meq/kg程 は 少 しず つ 上 昇 し,試 っ た 。AnVに 験 終 了 時 のPVは お い て はCLN-Meで 昇 は 小 さ く 終 了 時 は 約500で 約300meq/kgで 達 し た が,LN-Meで は上 あ っ た 。こ の よ うにCLN-Me とLN-Meで はPVとAnVの した。 とLN-Meの 酸 化 挙動 に は 差 の あ る こ とが判 明 した。 各種 酸化 試 験 に お い て,酸 化 二 次 生 成 物 で あ る分 解 物 量 を 基 準 油脂 分 析 法 記 載 のAnV法26)に 変 化 が 大 き く異 な り,CLN-Me に お け る 低 温 酸 化 試 験 に お い て は,CLN-Me, LN-Me共 に30℃ に お け る 酸 化 挙 動 と 比 較 してPVとAnV の 上 昇 が 大 き く抑 制 され,各 よ り測 定 した 。 種 酸 化 生成 物 の 生成 速 度 が 低 下 し て い る こ と が 明 ら で あ っ た 。 ま た,LN-Meに 各種 酸化 試 験 に お い て,酸 化 二 次 生 成 物 で あ る重 合 物 あ は 試 験 開 始 直 後 か ら急 油脂 分 析試 験 法 記載 のPV一電 位 差 滴 定法25)に よっ て 測 定 に5℃ 度 は 開 始 時 か ら 終 了 時 ま でPV 激 に 上 昇 し,終 了 時 に は2000に ドロペ ル オ キ シ ド量 を 基 準 試 験開始直後か で は 急 激 に 上 昇 し て800meq/kg程 た が,そ シ ャ ー レ 中 で 自 動 酸 化 し,経 時 的 に 各 種 酸 化 度 示 した。 常 温 酸 化 試 験 に お け るCLN-MeとLN-Meを 加 し て 十 分 に 撹 絆 し た 。 さ ら に 完 全 に 脱 溶 媒 し た 後,内 各種 酸化 試 験 に お い て,ヒ 計 処 理 ソ フ トで レ イ ン 酸 メ チ ル(OA-Me), ラ ジ カ ル 捕 捉 型 酸 化 防 止 剤 で あ るToc(α 当 量)を,全 動係 数 は いず 内 で あ る こ と を 確 認 した 。 多 重 比 較 分 析 を 行 い,p〈0.05に お け る水 素 ラジ カ ル の 引 き 抜 か れ や す さ を 比 較 す る た め に,オ 果 は そ の 平 均 値 で 示 し た 。 な お,変 れ の 測 定 値 に お い て も10%以 試 料 ビ ン に 入 れ ロ ー タ リー シ ェ イ カ ー で 撹 拝(200)し Vo1.49No.2(2012.12) て 試 験 開 始 後 のPVの おい 上 昇 速 度 は 常 温 に 比 較 して 低 温 下 量 を 基 準 油脂 分 析 法 記 載 の ゲ ル 浸 透 ク ロマ トグ ラ フ法27) で は 著 し く 遅 い も の の,上 昇 が 続 き,最 に よ り測 定 した 。 1200meq/kgに 殆 ど上 昇 せ ず,こ 達 し た が,AnVは 終 的 に は れ らの 結 果 か ら低 温 下 で は 生 成 され た ヒ ド ロペ ル オ キ シ ドが 分 PV,AnVお よ び 重 合 物 量 は1試 料 に つ き3回 ずつ測定 解 し に く い こ と が 確 認 さ れ た 。 一 方,CLN-Meに お いて 2000 1200 a 1500 窃900 > x 毎1000 ・11 b 5 c`'.300 500 d 0 0 020004000600080002000400060008000 0 時 間(h)※ ●CLN・Me(30℃ 図230。Cお 酸 化)■CLN・Me(5℃ 異 な る 文字 間 で有 意 差 あ りP・05時 酸 化)▲LN・Me(30℃ よび 一g一 酸 化)▲LN・Me(5℃ 間(h) 酸 化) 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 はPVの Vo1.49No.2(2012.12) ほ と ん ど 観 察 され な か っ た 。 一 方,CLN-Meに 上 昇 は 常 温 に 比 較 し て 抑 制 され て い た が,LN-Me に 比 較 し て 温 度 の 影 響 は 見 られ な か っ た の に 対 し,AnV 酸 化 試 験 開 始 か ら 無 添 加 のCLN-Meと は 常 温 に 比 較 し て 低 温 下 で は 顕 著 に 抑 制 さ れ,分 共 に 上 昇 が 促 進 され,特 にAnVへ 解 物の お いては 比 較 し てPV,AnV の 影 響 が 顕 著 で あ った 。 生 成 に 及 ぼ す 温 度 の 影 響 が 明 確 で あ っ た 。ま た,CLN-Me こ の こ と か ら,CLN-Meに に お い て は ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ドの 分 解 が 起 こ りに く い 低 ロ ペ ル オ キ シ ドの 生 成 を 促 進 す る 作 用 よ り も,生 温 下 で もLN-Meに 上昇 し 環 状 ペ ル オ キ シ ドを ラ ジ カ ル 酸 化 反 応 に よ り分 解 し て カ ル ボ ニ ル 化 合 物 の 生成 は ヒ ドロペ ル オ キ ル ボ ニル 化 合 物 を生 成 す る反 応 を促 進 す る こ とが示 唆 さ た こ と か ら,カ 比 較 し てPVは 上 昇 せ ず,AnVは シ ドの 分 解 に 基 づ く 経 路 で は な く,ヒ ドロベ ル オ キ シ ド 対 して ラ ジ カ ル 発 生 剤 は ヒ ド れ た。 を 経 由 し な い 別 の 経 路 が 示 唆 さ れ た 。 つ ま り,CLN-Me 次 に,リ ノー ル 酸 メ チ ル(LA-Me)お で は 酸 化 一 次 生 成 物 と し て ヒ ド ロ ベ ル オ キ シ ドに 加 え て, メ チ ル(0-Me)のAAPH添 PVで 時 変 化 を 測 定 し,CLN-MeとLN-Mと は 測 定 さ れ な い 環 状 ペ ル オ キ シ ドが 生 成 し,そ れ が 開 裂 し てAnVを 次 に,150℃ お よ び 重 合 物 量 に つ い てCLN-MeとLN-Meを PVは1275meq/kg,ll2.6meq/kg,AnVで 見 ら れ ず,ま たAnVの よ り顕 著 に な り,や 化 挙 動 に お い て,ヒ は0-Meと 方 が 高 い 値 を示 す こ 熱 時 のCLN-Meの ト リエ ン 酸 で は あ る が 共 役 型 で あ り, 活 性 メ チ レ ン が な い た め に,活 性 メ チ レ ン 基 を2っ LN-Meや 持 つLA-Meと 活 性 メ チ レ ン 基 を1つ 素 ラ ジ カ ル が 引 き 抜 か れ に く く,活 酸 な い 一 価 不 飽 和 脂 肪 酸 で あ る0-Meに ラ ジ カ ル 発 生 剤 と してAAPHをCLN-Meお 相 当す る 酸 化 速 度 これ ら の 酸 化 試 験 の 結 果 か ら,CLN-Meは 図4に 左 側 の 経 路 の よ うに 二 重 結 ル 連 鎖 反 応 に よ り ヒ ド ロ ベ ル オ キ シ ドが 生 成 す る こ と に に お け る 酸 化 試 験 を 行 い,PVお よ びAnV 加 え て,さ ら に 別 の 経 路 と し て 共 役 二 重 結 合 に 対 す る 酸 素 示 した。 の1,2付 はPVの は 図4の 乳 液(0/W=3/7) を 用 い て30℃ 上 昇 が 大 き く促 進 加 お よ び1,4付 成 され,さ お い て は 添加 に よる 上 昇 は 加 に よ っ て 環 状 ペ ル オ キ シ ドが 形 らに 酸 素一 酸 素 問 の 解 裂 に よる ラ ジ カル の 生 成 が 起 こ り,分 解 物 ・重 合 物 が 生 成 す る と 推 測 され た 。 300 900 a ?00 ﹀一 一く 翁600 x a' e.300 ) 100 > G.0 0 0 示 し 合 の と な り の 炭 素 か ら水 素 ラ ジ カ ル が 引 き抜 か れ,ラ ジ カ 加 し て 調 製 し た0/W型 さ れ て い た の に 対 し,AnVに 性 メ チ レン 基 を持 た よ びLN-Me20g に 対 し,0.1添 加LN-Meで 比 較 して水 た 酸 化 メ カ ニ ズ ム に よ り酸 化 が 進 行 す る と 考 察 され た 。 す な わ ち,CLN-Meで りAAPH添 持 っ を 示 し た も の と 考 え られ た 。 ド ロ ペ ル オ キ シ ドの 生 成 反 応 や 分 解 進 され る こ とが 示 唆 され た。 3よ た,CLN-Me ほ ぼ 同 じ上 昇 速 度 を 示 す こ と が 観 察 さ れ た 。す な わ ち,CLN-Meは 反 応 だ け で な く 環 状 ペ ル オ キ シ ドの 生 成 ・分 解 反 応 も促 の 経 時 変 化 を 図3に 上昇 が早 い 結 合 数 に 伴 っ て 上 昇 速 度 が 速 ま る こ と,ま 上 昇 は いず れ も常 温 下 と比 較 して と が 確 認 され た 。 こ の 結 果 か ら,加 順 でPVの 比 較 す る と, 重合 物 量 の 上 昇 速 度 に 差 は は りCLN-Meの 比 較 し た 結 果, こ と が 観 察 され た 。 こ の 結 果 か ら 非 共 役 酸 で は そ の 二 重 なった。高温酸化におい て はCLN-MeとLN-MeのPVと 経 のPV,AnV は1293.1,546.6, 重 合 物 量 で は19.1%,14.7%と よ び オ レ イ ン酸 加 系 酸 化 試 験 に お け るPVの LN-Me>LA-Me>CLN-Me≒0-Meの 上 昇 させ て い る こ と が 推 測 され た 。 高 温 酸 化 試 験 に お け る5h後 成 した 204060 80 0 ?04060 時 間(h) 80 時 間(h) ※ 異 な る文 字 間 で 有 意 差 あ りp ●CLN・Me●CLN・Me(ラ 図3ラ ジ カ ル 促 進 系)▲LN・Me▲LN・Me(ラ ジカル発生剤添加系酸化試馬 剣 こお け るPVとAnV 一10一 ジ カ ル 促 進 系) 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 Vo1.49No.2(2012.12) 馬/・!＼ 〈 一/＼/馬 一H/＼0 〆 =1鮒 で〉㍗麗 釦＼0・1・附 麺 ザ 》 。 ↓。RZ 識か∴ぬ ∵ oo. 舗・↓ R,<<<↑ 〈/RZ ㎝ 図4 と が 確 認 され,さ ラ ジ カ ル 捕 捉 型 酸 化 防 止 剤 で あ るToc,SE,PG,EGCG をCLN-Meま ppm相 の 上 昇 が 抑 制 され る,つ 当 量)添 加 し て 酸 化 試 験 を 行 い,PV,AnVお 間 を 無 添 加 系 を1と よ び20%に て は,試 重 合 物 の 上 昇 が 見 られ な か っ 基 づ い た 評 価 の み を 図5に り,LN-Meに 認 さ れ た 。 ま た,そ SEとPGは ま た,CLN-Meに て,PVに 示 した。 の 酸 化 防 止 効 果 はTocが シ ド量 を 示 すPVが 最 も 強 い こ と が 半1」 明 した 。 剤 に つ い てDPPHを はPVの AnVの 重 合 物 量 の 上 昇 も抑 制 され る こ と 最 も 高 い 効 果 を 示 し た 。 こ れ ら4種 各 種 酸 化 条 件 下 の 酸 化 挙 動 をLN-Meと し た 結 果,LN-Meで 最 も 弱 く, が 確 認 さ れ,酸 化 防 止 効 果 はEGCG>PG≒SE>Tocと EGCGが CLN-Meの 対 して は 各 種 酸 化 防 止 剤 の添 加 に よっ 加 え てAnVや ジ カル 捕 捉 型 酸 化 防止 剤 の利 用 は お い て も有 効 な 酸 化 防 止 法 で あ る こ とが判 明 つい 上 昇 を 抑 制 し,酸 化 防 止 効 果 が 確 ほ ぼ 同 程 度,EGCGが よび 重 合 物 量 解 ・重 合 反 応 が 抑 制 さ した。 対 して は 無 添加 系 に 比 較 して い ず れ の 酸 化 防 止 剤 もPVの ま り,分 論 示 し た 。 な お,LN-Meに 5よ CLN-Meに 到 達 す る時 能 を 評 価 し た 結 果 を 図5に た た め,PVに れ る こ と が 判 明 し,ラ よび 重 して 比 較 す る こ とに よっ て 酸 化 防 止 験 期 間 内 にAnVや ジ カル 消去 能 が 高 い酸 化 防止 剤 を 加 え る こ と に よ っ てCLN-MeのAnVお た はLN-Me20gに4.3×10mol(To 合 物 が そ れ ぞ れ30meq/kg,400お ら に,ラ は試 験 開 始 直後 か ら ヒ ドロベル オ キ 顕 著 に 上 昇 し た の に 対 し,CLN-Meで 上 昇 が 非 常 に 遅 い こ と,一 上 昇 はLN-Meに 方,分 比 較 し てCLN-Meで あ る こ と か ら,CLN-MeとLN-Meの な り, 解 物 量 を示 す 非 常 に顕 著 で 酸 化 挙 動 が 明 らか に 異 な る こ と が 確 認 され た 。 す な わ ち,Ln-Meで の酸化防止 比較 は非 共役 型 二 重 結 合 に 挟 ま れ た 活 性 メ チ レ ン か ら水 素 ラ ジ カ ル が 用 い て 測 定 した モ ル あ た り の ラ ジ カ 引 き 抜 か れ る こ と に よ っ て ラ ジ カ ル 連 鎖 反 応 が 開 始 され, ル 消 去 能 はTocを1.0と す る とSEが1.4,PGが2.5,EGCG ヒ ド ロペ ル オ キ シ ドが 主 た る 酸 化 一 次 生 成 物 と し て 生 成 が7.6と 最 も 高 い 消 去 能 を 示 し た こ と か ら, し た 後,さ な り,EGCGが CLN-Meお よ びLN-Meに ジ 物 が 生 成 され る の に 対 し,LN-Meで は ヒ ドロペル オ キ シ カ ル 消 去 能 の 強 さを 反 映 して い る と考 え られ た 。 この よ ドを 経 由 す る 酸 化 反 応 よ り も,共 役 二重 結 合 へ の酸 素付 うにCLN-Meの 対 す る 酸 化 防 止 能 はDPPHラ らに 二次 的 な 酸化 に よ っ て 分解 物 お よび 重合 酸 化 は ラ ジ カル 捕 捉 型 酸 化 防 止 剤 の 添加 加 に 基 づ く環 状 ペ ル オ キ シ ドの 生 成 が 優 先 され,さ らに に よ っ て 効 果 的 に 抑 制 さ れ た こ と か ら,図4に 示 した よ こ れ ら の ペ ル オ キ シ ドが ラ ジ カ ル 酸 化 反 応 に よ り分 解 し うに,CLN-Meの は異な る て カル ボ ニル 化 合 物 な どを生 成 す る こ とが判 明 した。 従 酸 化 メ カ ニ ズ ム に はCLN-Meと 経 路 も 存 在 し て い る も の の,生 っ て,CLN-Meお 成 し た ペ ル オ キ シ ドの 開 よび 共役 油 脂 の 酸 化 度 の 把 握 に は ヒ ド ロ ベ ル オ キ シ ド量 を 示 すPVの 裂 に よ っ て 分 解 ・重 合 す る反 応 は ラ ジ カ ル 反 応 で あ る こ 一11一 み で は な く,AnVの よ うな 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 Vo1.49No.2(2012.12) 30 30 20 LN-Me 20 PV 1 5 1 5 10 10 肇 朝謹孚亀 嚢 当塩革亀 PV 25 25 CLN-Me 5 5 0 0 PGEGCG SE 6 5 無 活加T。c CLN-Me 4 重合 物量 2 2 1 1 0 0 無 き加T。c meq/kg、AnV:400、 PGEGCG 3 嚢 判謹葦臨 AnV 5 3 畷薯 譲革亀 4 CI_N-Me 駈 無 爺加Toc 重 合 物 量:20%に SE PGEGCG 達 す る ま で の 時 間 を 無 添 加 系=1と して表 示 図5 ) 7 分解 物 量 お よび 重 合 物 量 を 測 定 す る こ とが 必 要 で あ る こ とが 判 明 した。 また,CLN-Meの Pariza.,gravesW.A.,eef-derived 酸 化 防止 に対 して はToc inhibits に 代 表 され る ラジ カ ル捕 捉型 酸 化 防 止剤 の 添加 が 有 効 で epidermalorsy-dimethylbenz- あ り,特 にEGCGの Carcinogenesis6 ) 8 よ うな ラ ジ カ ル 消 去 能 が 高 い 酸 化 防 止剤 の 効果 が 顕 著 で あ る こ と も確 認 され,今 後 の 共 役脂 山 田 耕 路,「 食 品 成 分 の は た ら き 」 朝 倉 書 店. 肪 酸 お よび 共 役 油脂 の利 用 に お け る酸 化 防 止 法 と して 有 効 と考 え られ た 。 9)Pariza.,kY.Theicallyactiv isomersjProg.Lipid 参考文献 40,283-298 ) 1 10)Nagaoanagita.,atedc 寺 尾 純 二,山 西 倫 太 郎,高 村 仁知 「 食 品機 能 学 」 光 Their.ノournalce ) 2 ) 3 生 館(2003) Bioengineering,7 俊,後 藤 直 宏;「食 品 機 脂 質 」丸 善(2004) 俊 --)Benjaminpener.,gatedleiccids 「 機 能性 脂 質 の 進 展 」 functionalteir シー エ ム シー 八nutritionetabolism., ) 4 Reaney.J.T.Liu.-D.,We conjugated 12)古 oleiacidesearch,AOCS 用,オ ) 5 Champaign _, 役 レ オ サ イ リ ノ ー ル Proctor 1tS Physiology, ine Dietaryof vaccemc acidJ.Foodmp.Anal.,-197 曾 14)TagaT.,tabashi.,currence _, Geomethicalmersecanoic 6)Ha.L.,iza.,cinogens Oils:Analysisygas fromandeat-alteredivatives chromatographyanteid linoleicCarcinogenesis, chromatography,Lipids, 一12一 酸 の 生 理 機 能 エ ン ス,10,415-421 13)Chin.LiuW.,M.,.L.,riza FieldJ., Human 場 一 哲,共 _, と 食 品 へ の 応 成 践 大 学 理 工 学 研 究 報 告 15)Tsuzuki.,asakiR.,a ImamauraIwata.,da.,yazawa., Conjugatedleniclowlya intestineicklyconverted acid.,J.ri,136,(2006) 16)Yanagita.,raceuticalctionjugatedi acidMilkence, _,78 17)SuzukiasitaK.,tudy theidationcontainingconjugated PUFAm.Soc., 563-595 18)太 田 静 行 「油 脂 食 品 の 劣 化 と そ の 防 止 」 幸 書 房 p.10-12 19)Lunalauente.A., G.,ferineconjugated andjugatedylLipi 1085-1092 20)Hamalainen.L, g・, Stereochemistry autoxidationof eydroperoxides methylepresenca -tocopheroLipid , , 21)Kuge.,a idation a conjugatedenoyllycerol behavior eiridatione establishment J.eo,58, 22) 節 子,天 研 究,オ 然 油脂 の 品 質 管 理 と有 効 活 用 に 関 す る レ オ サ イ エ ン ス,10,453-460(2010) 23)節 子,共 役 リノ レ ン酸 含 有 構 造 油脂 に 対 す る 各 種 フェ ノー ル性 化 合 物 の 酸 化 防 止 能 の 比 較,日 本 栄 養 ・食 糧 学 会 誌,63,219-226(2010) 24)節 子,共 役 リ ノ レ ン酸含 有 構 造 油 脂 の 酸 化 安 定 性 に 及 ぼ す ト リア シ ル グ リ セ ロ ー ル 分 子 種 組 成,日 本 栄 養 ・食 糧 学 会 誌,64,3-10 (201i) 25)日 本油化学会 酸 化 物 価(電 26)日 「 基 準 油 脂 分 析 試 験 法 」 暫4-2000 位 差 滴 滴 法)(2003) 本油化学会 「 基 準 油 脂 分 析 試 験 法 」25.3-1996 ニ シ ジ ン 価(2003) 27)日 本油化学会 「 基 準 油 脂 分 析 試 験 法 」暫16-2005 合 物 量(ゲ ル 浸 透 ク ロ マ ト グ ラ フ 法)(2005) 一13一 Vo1.49No.2(2012.12)
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