Agilent 3100 OFFGEL Fractionator ＜Agilent 3100 OFFGEL Fractionatorの仕様＞ ・IPGゲルのpH範囲はpH 4-7とpH 3-10の2種類が あり，それぞれLow resolutionとHigh resolution (0.1/0.5 pH)があります．全部で4通りのIPGゲル が選択可能です． ・Low resolutionの場合，12画分， High resolution の場合 24画分に分画 きます の場合，24画分に分画できます． ・IPGゲル1本当たり 最小50 ugから最大5 mgまで の試料の処理が可能です． Page 1 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X 等電点（pI）を用いた分画 ppH グラジエント immobilized ((IPG ggels)) 分画数 12 or 24 画分あたりの量 µ 150 µl Resolution 0.1/0.5 pH 分画時間 5 - 24 h ((depending p g on ggel stripp length g Page 2 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X OFFGEL Fractionatorによるタンパク質の分離 E. coli 細胞抽出液 fraction # 4 * 1/2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 SDS-PAGEによる再現性の確認 9 12 15 a b c a b c a b c 5 pH 6 7 Page 3 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X 高い分離能を示すOFFGEL Fractionator pH 4.5 – 6.1 ヒト血漿 2D PAGE 2D-PAGE pH 4.5 – 5.5 target: ∆ pH 0.16 0 16 Page 4 fraction #4 pH 4.77-4.93 pH 4.5 – 5.5 pH 4.5 – 5.5 pH 4.5 – 5.5 fraction #5 fraction #6 fraction #7 pH 4.93-5.10 pH 5.10-5.26 pH 5.26-5.42 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X 多次元解析を使用した血漿のタンパク質同定 H H L HL L HL H LL H H H LH HH H H H HH H Plasma OFFGEL Fractionator SCX + RP LC-MS/MS (2D) OGE + SCX + RP LC-MS/MS (3D) Multiple Affinity Removal Column L LL L LL L HH HHH H HH 酵素消化 酵素消化 SCX chromatography g p y Solvent tray Degasser HPLC-Chip/MS HPLC Chip/MS (RP) nanoflow pump m-WPS Solvent tray 2nd pump Page 5 Cooler LC/MSD Trap XCT Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X 多次元解析を使用した血漿のタンパク質同定 タンパク質とペプチドの同定数 SCX + RP LC-MS/MS (2D) Proteins iddentified OGE + SCX + RP LC LC-MS/MS MS/MS (3D) 2D SCX/RP Page 6 Minimum Peptide Score (Spectrum Mill) 3D OGE/SCX/RP Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X SCXによる分離作業をReplace可能 Emilie Ernoult, Erick Gamelin and Catherine Guette Proteome Science 2008, 6:27 Page 7 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X OFFGELを使用したペプチドの分離 H H LH L H L LH LL H H H LH H H H H H H H Plasma Multiple Affinity Removal Column 1800 LLLL LL L Proteins 酵素消化 酵素消化 Solvent tray 1600 Proteins s or Peptides s identified HH HHH HHH Peptides 1400 1200 1000 800 600 400 Degasser 200 nanoflow pump 0 m-WPS Solvent tray 2nd pump Page 8 Cooler LC/MSD Trap XCT SCX OFFGEL Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X まとめ OFFGEL Fractionatorは、 高度な解析機能 • IPGゲルを使用することによる確かな分離技術 • 用途に合わせたIPGゲルの選択 (4種類から選択) pH 4-7 : High resolution (0.1 pH) Low resolution (0.5 pH) pH 3-10 : High resolution (0.1 ( pH)) Low resolution(0.5 ( pH)) 簡便な操作性 • 分離された試料が液層で回収でき、以降の操作が容易 • SCXによる分離作業を代替可能 Page 9 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X Wheat Analysis Molecu ular weight Isoelectric point (pI) Wheat Type A Protein extraction Alkylation with IAA Acetone precipitated p p Labeling at 10 ug/ul total protein (Bradford) 100 ug labeled protein fractionated pH3-10 Fractions undiluted analyzed with 250HSP-Assay Wheat Type B 2008 Agilent Restricted
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