1 (57)【特許請求の範囲】【請求項１】有効成分としてデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含有する血圧降下剤。【請求項２】デオキシリボ核酸が、エンテロコッカス・フェカリス菌体から得られたものである請求項１記載の血圧降下剤【請求項３】デオキシリボ核酸が、胸腺等の動物の臓器から得られたものである請求項１記載の血圧降下剤【発明の詳細な説明】【０００１】 10 【産業上の利用分野】この発明は、細胞より抽出されたデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を有効成分として含有する血圧降下剤に関するものである。【０００２】【従来の技術】従来、高血圧症の予防もしくは治療のた 2 めに様々な種類の血圧降下剤（降圧剤）が使用されている。現在臨床で使用されている降圧剤は、降圧利尿剤、 β遮断剤、交感神経抑制剤、血管拡張剤、カルシウム拮抗剤等多種類存在するが、それぞれの薬剤には多種多様な副作用が存在する。本態性高血圧症の治療においては、高脂血症、電解質異常による腎障害、性機能障害、神経障害等、薬剤の長期投与の副作用による二次疾患が問題となっている。又、原因疾患があることで起こる二次性高血圧症の治療においては更に上記薬剤投与による副作用が重篤である。すなわち、二次性高血圧症は、原因基礎疾患が改善されなければ高血圧症の改善は見られず、副作用のある降圧剤の使用は困難である。【０００３】血圧降下剤は長期にわたって投与される薬剤である。そのため、副作用がなく、且つ薬理作用の強力な血圧降下剤の開発が求められている。 (2) 特許２８８９４９１ 3 4 【０００４】最近副作用のない降圧剤として微生物由来＊いる。しかし、最近の研究によると、食品由来核酸成分のものが注目されている。微生物由来の血圧降下剤としが体内に入ると、体内合成にフィードバック機構が働ては、本発明者らによるエンテロコッカス・フェカリスき、体内の核酸量は一定に保たれることが証明されつつの菌体又はその処理物（特開平５−２０１８７１号）、ある。したがって、遺伝性の痛風患者あるいは染色体異クロレラ藻体から分離された分子量１万以上の糖蛋白質常によるプリン体代謝異常によって起こる高尿酸血症患（特公昭６０−４５６０３号）、乳酸桿菌の高分子画分者は別として、本発明剤使用による副作用は生じない。中の多糖類(M.Furushiro et al., Agric. Biol. Chem., 【００１１】本発明のＤＮＡを含有する画分は、水溶性 54, 2193-2198(1990))等が知られている。であるため、容易に任意の剤形とすることができる。ま【０００５】た、投与方法も経口投与（舌下投与も含む）と、非経口【発明が解決しようとしている課題】副作用の少ない降 10 投与（静脈内注射、点滴等）のいずれもが可能である。圧剤としての従来の微生物細胞の高分子画分は、多種多経口投与のための錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤など様の構成成分を含むので品質を一定にすることが難しにする場合は、製剤化に当たり、一般に使用されているく、臨床的使用に際して問題が生じやすい。本発明は、結合剤、抱含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤等を血圧降下作用を有する構成成分を微生物から分画するこ必要に応じて用いることができる。又、経口投与用液体とにより、均質な降圧剤を得、更にこれを処理すること製剤の場合も、任意の補助成分を用いて、内用水液、振によって、よりすぐれた降圧剤を提供するものである。とう合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤等の形態とする【０００６】ことができる。【課題を解決するための手段】本発明者らはこの課題を【００１２】使用量は症状年齢等により異なるが、有効解決するため、微生物細胞から抽出した高分子画分を分成分として１日０．００１∼０．１ｇ／ｋｇ体重を通常子量分画やカラム吸着法など公知の分画法を使用して各 20 成人に対して１日１回又は数回に分けて投与することが種構成成分に分画した。それらの成分をヒトの本態性高できる。血圧症のモデル動物として繁用されている高血圧自然発【００１３】症ラット（以下ＳＨＲという）に適用したところ、ＤＮ【実施例】以下実施例を示すが、本発明はこれらの実施Ａ画分に顕著に血圧を下げる作用があることを見いだ例の記載によってなんら制限されるものではない。し、本発明を完成するに至った。【００１４】実施例１．（エンテロコッカスの培養）【０００７】すなわち、本発明が提供する血圧降下剤エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecali は、細胞内のＤＮＡ画分を有効成分とするものである。 s)ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以下 6 【０００８】この画分の抽出法としては、細胞を破壊に示す組成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０し、有機溶媒で除タンパク後、遠心分離法もしくは巻き個／ｍｌ）、３７℃で１０∼１６時間培養し、生菌数約 9 取り法で該当画分を採取する方法が主であるが、ＤＮＡ 30 １０個／ｍｌの培養液を得た。得られた培養液を１を分画する操作であればどのような方法を使っても差し２，０００×ｇで２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水支えない。で２回洗浄して菌体を得た。【０００９】実施例に示すとおり、ＤＮＡを含有する画【００１５】ロゴサ液体培地の組成を示す。分は、ＳＨＲを用いた実験において顕著な血圧降下作用トリプチケース１０ｇを示し、更にその降下作用は持続性を有することが確認酵母エキス５ｇされた。また、実施例に示すように、微生物由来のＤＮトリプトース３ｇＡだけでなく、動物細胞由来のＤＮＡであっても同様にリン酸一カリウム３ｇ血圧降下作用が見られることにより、種特有のＤＮＡのリン酸二カリウム３ｇ構造に関係なく血圧降下作用がある。ＤＮＡを含む画分クエン酸三アンモニウム２ｇは腸内常在微生物又は食用可能な物質から抽出している 40 ツイーン８０（界面活性剤）１ｇため、毒性はほとんどなく、ＳＨＲに対して経口及び静グルコース２０ｇ脈内に投与してもなんら異常は見られなかった。また、システイン塩酸塩０．２ｇ自然物からの精製物でも、合成物でも毒性はほとんどな塩類溶液（１のとおり）５ｍｌい。蒸留水１０００ｍｌ【００１０】核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）を多量に含む食（ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌）物の大量摂取は、高尿酸血症の原因の一つと考えられて＊（１）塩類溶液：ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ１１．５ｇＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．６８ｇＭｎＳＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ２．４ｇ蒸留水１００ｍｌ (3) 特許２８８９４９１ 5 6 【００１６】実施例２．（生菌体よりのＤＮＡ抽出）＊測定）実施例１で得られた菌体８０ｇをｐＨ７に調整した０．実施例２で得られたＤＮＡ画分の核酸量を測定した。核５Ｍ塩化カリウム、４０ｍＭ酢酸アンモニウムおよび１酸は分光光度計（日立製作所社製Ｕ−２０００型）でｍＭ酢酸マグネシウム混合溶液１Ｌに懸濁し、リゾチー波長２６０ｎｍにおいて１ＯＤ260 ＝２０μｇ／ｍｌムを終濃度１，３３０μｇ／ｍｌになるよう加え、３７ＤＮＡに換算して計算した。該画分の核酸含有量は１ｍ ℃で２時間保持した後、生じたプロトプラスト細胞をｌ当たり０．８ｍｇであった。４，７５０×ｇで２０分間遠心分離して回収した。【００２０】実施例２で得られたＤＮＡ画分及び酵素処【００１７】プロトプラスト細胞に５０ｍＭＴｒｉｓ理（ＲＮａｓｅＡ、ＤＮａｓｅ I（宝酒造社製）に・ＨＣｌ溶液（ｐＨ８．５）８００ｍｌ、０．５ＭＥて消化）を行った実施例２のＤＮＡ画分について、１％ＤＴＡ（ｐＨ８）８０ｍｌ及びＳＬＳ（サルコシンナト 10 アガロースゲル電気泳動を行った。その結果を図１に示リウム）（Fluka社製）８０ｍｌを加えて溶菌させ、こす。ＤＮＡ画分をＤＮａｓｅ Iで処理したものにはＤれを４℃で一晩放置後、等量のフェノール／クロロホルＮＡ画分と同位置に泳動バンドが現れなかった。ム（１：１（ｖ／ｖ））混液と混和し、１０，０００× 【００２１】実施例２のＤＮＡ画分２０ｍｇをアンプルｇで２０分間遠心分離により水層と有機溶媒層に分離しに取り、１Ｎ−Ｈ2 ＳＯ4 を２ｍｌ加え、減圧下で封管た。回収した水層を等量のフェノール／クロロホルムし、１００℃で１８時間加水分解を行った。その後開封（１：１（ｖ／ｖ））混液と混和し、分離させる操作をしＢａＣＯ3 にて中和し、遠心でＢａＳＯ4 を除去した。２回繰り返し、核酸画分を抽出した。得られた水層に等この処理物１０μｌを薄層(Whatman silicagel K5)にス量のクロロホルムを混和し、不純物を除去する操作を２ポットし、酢酸エチル：イソプロピルアルコール：水＝回繰り返した。得られた水層に２倍量の１００％冷エタ６５：２２：１１（ｖ／ｖ／ｖ）の展開溶媒で薄層クロノールを加え、染色体ＤＮＡを析出させた。 20 マトグラフィーを行った。その後、５０％硫酸噴霧後１【００１８】ガラス棒で巻きとって回収した析出ＤＮＡ００℃、１０分間加熱して移動画分を検出した。結果をに１００％エタノールを加え、洗浄した後軽く乾燥し図２に示す。た。次に、１００ｍｌの水に溶解し、ＲＮａｓｅＡ【００２２】実施例４．（エンテロコッカス生菌からの（ベーリンガー・マンハイム社製）を終濃度１００μｇＤＮＡ画分の経口投与による血圧低下作用）／ｍｌになるように添加して、３７℃で１時間反応させ日本チャールズリバー社より購入した雄性ＳＨＲ（１５て、混在するＲＮＡを除いた。除タンパクのためにフェ週齢）を各群の平均体重が一定となるように１群８匹ずノール処理とクロロホルム処理を行い、得られた水層につに分けた。実施例２で得られたＤＮＡ画分を生理的食４００ｍｌの水を加え、さらに全体の２倍量の１００％塩水に溶解し、６５ｍｇ／ｋｇ体重を、胃ゾンデにて経冷エタノールを加え、再析出したＤＮＡを巻き取り回収口投与した。対照群には生理的食塩水を投与した。３７した。得られたＤＮＡを水５００ｍｌに溶解させた後、 30 ℃で１２分間保温したラットの尾動脈収縮期血圧（ｍｍ５０ｍｌの３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）及び２倍Ｈｇ）を投与直前、投与の４、９、２４時間後に非観血量の１００％冷エタノールを加え、析出ＤＮＡを巻き取式血圧測定装置（ＭＫ−１０００：室町機械社製）で測った。この操作業を２回繰り返し不純物を除去した。得定した。結果を表１に示す（測定値は平均値±ＳＤを表られたＤＮＡに１００％エタノールを加え、洗浄したす。）。後、凍結乾燥した。【００２３】【００１９】実施例３．（抽出物質の構成成分含有量の＊【表１】 ──────────────────────────────────── 投与後の時間（ｈ） ───────────────────────── ０４９２４ ──────────────────────────────────── 対照 237±12 232±7 233±11 232±9 E. faecalis由来DNA 240±10 220±9** 221±12* 233±9 ──────────────────────────────────── （* p<0.05, ** p<0.01）的食塩水に溶解し、実施例４と同様に経口投与した。尾【００２４】実施例５．（子牛胸腺由来ＤＮＡ画分の経静脈収縮期血圧（ｍｍＨｇ）を実施例４と同様に測定し口投与による血圧低下作用）た。対照群が２４０ｍｍＨｇ付近であるのに対し、子牛日本チャールズリバー社より購入した雄性ＳＨＲ（１５胸腺由来ＤＮＡを投与した群は投与４時間後２２６．４週齢）を各群の平均体重が一定となるように１群８匹ず ±９．１ｍｍＨｇ、９時間後２１１．６±１５．８ｍｍつに分けた。子牛胸腺由来ＤＮＡ（シグマ社製）を生理 50 Ｈｇと投与前の値に対して有意に低下した。 (4) 特許２８８９４９１ 7 8 【００２５】実施例６．（製剤例）＊徴を有することにより、医薬品としての使用に限らず、（１）実施例２で得たＤＮＡ画分５０mgを、精製でんぷ日常の食品に添加して高血圧症を予防することも可能でん末５０mg及び乳糖２００mgと混合して、錠剤又は顆粒ある。また、ＤＮＡであれば由来を問わないため、ＤＮ剤にする。Ａ含量の多い動物及び魚介類の臓器（精巣等）等、廃棄【００２６】（２）実施例２で得たＤＮＡ画分１００mg されていたものの有効利用もできる。を、大豆タンパク１００mg及び乳糖２００mgと混合し【図面の簡単な説明】て、錠剤又は顆粒剤にする。【図１】実施例２で得られたＤＮＡ画分及びその酵素処【００２７】理物のアガロースゲル電気泳動のパターンを示した図で【発明の効果】本発明の血圧降下剤は、副作用及び毒性ある。が極めて低く、経口投与でも本態性高血圧症に著しい効 10 【図２】実施例２で得られたＤＮＡ画分の加水分解物の果がありかつ即効性であり持続性も有する。これらの特＊薄層クロマトグラムを示した図である。【図１】【図２】 ───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き 6 (58)調査した分野(Int.Cl. ，ＤＢ名) A61K 31/70 A61K 35/00 - 35/84 C07H 21/04 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)