Title 補体第4成分（C4）産生異常の分子機構 Author(s) 中山, 耕造 Citation 金沢大学十全医学会雑誌, 97(2): 260-272 Issue Date 1988-04-20 Type Departmental Bulletin Paper Text version publisher URL http://hdl.handle.net/2297/8020 Right *KURAに登録されているコンテンツの著作権は，執筆者，出版社（学協会）などが有します。 *KURAに登録されているコンテンツの利用については，著作権法に規定されている私的使用や引用などの範囲内で行ってください。 *著作権法に規定されている私的使用や引用などの範囲を超える利用を行う場合には，著作権者の許諾を得てください。ただし，著作権者 から著作権等管理事業者（学術著作権協会，日本著作出版権管理システムなど）に権利委託されているコンテンツの利用手続については ，各著作権等管理事業者に確認してください。 http://dspace.lib.kanazawa-u.ac.jp/dspace/ 金沢 大 学十 全 医 学 会 雑誌 260 第9 7 巻 2 6tj −2 7 9 く1 粥81 第2 号 補 体 第 4 成 分 くC 4 1 産 生 異 常 の 分 子 機 構 金 沢 大 学 が ん 研 究所 免 疫 生 物 部 く主任 二 高橋 守 信 教按I 中 造 耕 山 く昭和6 3 年 2 月 4 日 受 付1 ト の 補 体第 4 成 分 くC 4ナは ヒ 単独 欠損 が 見 ら れ る 関を 示す これ ． 因 で あ る と 考 え られ て 1i ら の 欠損 は C 4 欠損 の 約 半 数 に は ． い る ， モ デ 実験 と し て ル 現系 くC 4 り と の 間 に は 原因 を 明 ら か に す る た め 定量 C hl o r a m ， C4 e n i c ol た る W 7 H 2 ． ． のク yl t viv o n ロ r a n sf e r a s e で の ロ に ニ ー の 事よ り こ ． S l p 由来 の ン グ及 び 構 造 解 析 を行 bin re c o m C 4 由来 の 5 fl a ． a n t K ア セ イ に よ るi くC A T l ッ 補体 系 は n e y − W 導され るが H 2 ン に誘 w o r そ の 結果 ． r e c o m bi n a H ， ti o − 2 の n 7 ds 補体系に は ， a c ti v i p r o m o te r bi n a n ty 炎症 や 液 性 免 疫 の 経 路 に お け る C 3 転 化酵 素 くC 3 コ ン ペ ル 11 成 成 分 と し て 必 須 な 働 き を行 っ て い る ヒ ． ト の 補体 第 4 成 分 は A bb m rev ent ar M H C ， i a ti o n s こ D N A i y j m a or m ， C4A D N A R N A his t o c o m ， ， m r a n s − そ の 結 乳 転 写活 性 ． − ミ ド を用 い て C 4 に 連 関 し た 遺 伝 子 ス れ らの 3 つ の こ ． つ 5 ， W 7 H 2 ． ， S l p 遺伝 子 を 1 ， つ ， ， 側が C4 由来 3 側が ， ， bi n r e c o m 遺伝子 が t a n ウス に お け る Slp の 構成的 マ p O S t t r a n S C ri p ti o n a l c o n t r o l メ e o x id C OS m ， ソ タイ プ か ら成 り た ディ 10 タ ー ， cl o n in g ， r 3 疾患と 強く連関 して お り 1 ， h yd r o x ge r c o m 正 常人 口 の 約 ， ン パ ク質 も しく 2l タ ン パ ク 質の 単 独 欠損 が 見 ら れ る yl a se i m L c u p u s yth e m く2 1−O H l 欠 損 を合 併 し 強 い 連関 を示 す 5I ． C 4 A 欠損 ． くS L El 様 の at o s u s C 4 B 欠 損 で は 高頻 度 で 21 先 天 性 副 腎過 形 成 症 と な る 41 y r i b o n u cl e i c p a tib ili t y て い るが E 古典 ゼう の 構 っ ％と い う非常 な高率 で C4 A タ は 特 に S y st e ． eSS en 15 ー ノ はC4B サザ ン プ ， ま た 1 型 の 糖尿病と も ． ロ a c id R N A ニ kb i k il o b ， pl e x ニ Sl p R N A ， Se X ， as e r ib o n u cl e i c くs H 1i m it e d − bp， b ッ a c id a se − そ の 結果と して トによ て っ ニ CD N A p air p r ot ein ニ S L E ， くsJ 三 C l S y St ． れ らの その 結 C O m ， e m こ ， C 4 欠損 の 遺 伝 子 が す で に 解 析 さ れ て い る郎 7 1 と C 4 B の 2 つ の アイ d t て明 ら か に 多量 の C 4 べ − ， 遺 伝学上 C4 で特 に 重要 な の は疾 患 と の 関連 で あ る 間で 比 較 した n u cl e a r t ge n e 補 体 第 4 成 分 くC 41 は ， また ， ． 古典 経 路 と 別経 路 の 2 つ の 惰 性 化反応が存在 して お り での 結果生 じた と考 え られ る 20 種の 血 清 タ ン パ ク 質 と数種 の レ セ プ ， の と C 41 の 差が 生 じて い る と考 え られ h コ ， 持 つ 事が 明 ら か と な っ た つ v it r o ウ ス は C4 遺伝子 を 1 マ 発現畳 の 差の こ の ． − は C4一 に 比 に ト ヒ ， R N A の 定 温 核 内 C4 R N A m − n 1 本研究で は 等 の 特 定 の 系統 で は 構 成 的 に 発 現 し て い 7 − ， W h 段階で C 4 の と し て 生 体 防御 に お い て 重 要 な 役 割 を果 た し ． C4 ， か ら 成 る 生体 反 応 系 で ， ー と C4 h k i n g 部 位 す な わ ち遺 伝 子 発 現 調節 部 位 を 持 つ 事 が r ec o m てい る ト に よる C 4 r a n S C ri p t i o n St t O た っ 遺伝子 を 3 発 現 の 原 因で あ る と 考 え ら れ た タ ッ お け る S l p の 構 成 的発 現 の 原 因 を明 ら か に す る た め ， ー ト ッ ． 種 々 の発 現変異 ， ． se x ウ ス C 4 の 高発 現 系 くC 4 hl と 低発 マ ． プロ 転 写 活 性 の 測 定 を行 い C 4 p ， そ し て C 4 遺 伝 子 と S I p 遺伝 子 と の エ ト及び ド ッ 般 に は テ ス トス テ ロ 一 ， た っ ， また Slp は ． 解析 を 行 発 現 変 異種 の と C 41 間で 有意 な 差 は 認 め ら れ な い に も か か わ ら ず h R N A が検 出され た m ， 誘 導さ れ る ン に ロ ウス C 4 及 び Slp に は マ ． テス トス テ ， ト C 4 の塵生異常の モ デ ル と して 重 要で ある ヒ ウス の マ ザ ンプ a c et ア ツ セ イ に よるi c ri p ti o n に ph ノ ， ％の 高率で 15 ， 血 中濃 度 に お い て 1 0 倍 以 上 に も 達 す る 大 き な 差 が 生 じ て い る ， 旬 遺 伝 子 の 欠 失 が 認 め ら れ ず C 4 産 生 に お け る 調 節機 構 の 異 常 が 欠損 の 原 す な わ ち産 生 異 常 が 知 ら れ て お り C4 産生異常の ー s 0 1 ， や 副 腎過 形 成症 と 強 い 連 くS L E l at o su s e m it e d p r o t ei n くS l p l の 2 つ の ア イ ソ タ イ プ が 存 在 し て い る m 種， タ ic lu p u Sy St e m ， th e ry ウ ス に は構成 的 に 発 現す る C 4 と マ ． と C 4 B の 2 つ の アイ ソ タイ プか ら成 り た ち C4 A ， pl e − Cl o n e i i c lu p u s ， 補 体 第 4 成 分 産 生 異常 の 分 子 機構 果 C 4 欠損 の 約 半数 に は遺 伝 子 の 大 き な 欠 失 は 認 め ら 釆 H e れ ず C 4 産 生 に お け る 調節 機 構 に 異 常 を き た し て い る ヒサ ジ ， ， と考え られ て い る ま た C4 A ． 富み 35 以 上 の ア に ロ ， ， C 4 B 共 に 非 常 に 多様 性 タイ プが 同定さ れ てお り鋸 多様 性 の 生 理 的 な 意 味 も 興 味 深 い 血活 性 を 持 つつ と 1i mi t e d p S e X つ したF M ． t ei ro くS l p 溶 血 活性 を 持 た な いl n ア イ ソ タイ プ か ら成り立 の 中濃度 を 支 配す る 要 因 は 構造 遺 伝 子 と 不 可 分 し く異 な る9 コ て い っ ， た と え ば C4 の 場合 ． くC 朽 と 低 発 現 系 くC 4 り が 知 ら れ て お り お い ， ロ ト に よ る 解析 の 結 軋 ッ h C4 ト 12I 方Slp 一 ． ウス に 比 マ べ 工 工 の b と C4 場合 1 ， T ． ザンプ ス の ロ o si ら 1 31 ， L W 7 evi St r − ら 1 4J a u s s l ウス では マ 構成的に Slp を発 現 し て い る H ， 個 も しく は 5 個の C 4 4 ， 現 様 式 の 変化 と う観点で興味深い r e s si o n パ タ v a ri a n t l ン ー の 存在 フ ィ ス が 見 ら れ る事 よ り デル で あ る とし て 遺 伝 子 発 現 の どの よ う な 機構 の 差 に よ っ ， 高発 現 系と低発現系が生 じて の る 目的で Sl p が の か ， また 般に テス トス 一 な ぜ特定の ， い マ て 2 3J ン ロ ジ マ ア e n t IV 工 ． er m 材 l マ ウ ス は K l ei yth e m a t o s u s 三 2 1 O H in − e 21 h y d − ， t e t r a a c e ti c a cid ニ C A T g r ap h y ． 博士 n ， C r ヒ ， o x hl o ト肝 癌 由 yl a s e ニ S D S r a m ph en ic ol fb ． D − た S O ， a ce ． di u F M m ッ ア セ ル ロ た を 15 ， の 5 プ ロ p h た ． 塩化 ナ M 0 01 ％S D S ， 0 70 C で オ − ， ロ ブI ン H a m て っ I で F M ， と 反応 する 3kb と ． フ ァ パ ッ トに 撒い た ， ． ジ 由来 の ヒ サ ー ケ ス ジン グ後 ー クリ 前述 の 5 ， ニ ー プ ン ロ ー ， グ ブ ． e n i c ol a c et y lt r a n sf e r a s e くC A Tl イ セ イは G o r m a n ら の 方法 2 5 りこ 従 っ て 行 ． t yl t r a n s f e H a m 系 マ ウ ス の C 4 遺伝 子 及 び 前述 の B l O B R d od グ ら の 方 ． ー ト ー ニ ー は B l in 電 気 泳動 に よ 方法 2 4 1 に 従 い の っ レ トリ 0 1％ ． vi t r o ー M ， 端 か ら 得 た P st I B ， in ． ． ． 高分 子 D N A を B ス を 0 2％ ， m m k i m g 部位 の ク ー で 標 ス膜 ー O 酸ナ トリ ウム っ I l 中 で 65 C で 反 応 ス膜 ー 22I 法 ン ョ 系 v a ． E DT A m ， a vis セ ッ ロ n この と結合 した chlo r a m ． C A T W 7 o n ア 料 W 7 くH 2 − ． M m 分画 を 分 取 し 入 の を用 い て お こ な ． 材料お よ び方 法 C3H ， ． L E 39 2 に 感 染 さ せ プ は B ン エ ％ アガ ロ 1 つ ム ー ロ ウ ス の 肝 高分子 D N A 従 い 調製 し た 8 kb の 2 ． ト ニ 10 ， セ ル ロ ク ． ウ ス で は構成的 に 発 現 し て い る を明 ら か に す る目的 で 行われ た に ト I l 5 kb の 断 片 く 5 で 誘 導さ れ る プと ー シ ー RI A c o ． 系 マ ウス の C 4 遺伝子 るの か を明 らか に す テ ロ をお こ な ー ， 1 ら 得た E か ロ ブと して F M ー 30 分間ずつ 3 回洗い 完全 に 消 化 し C4 端 ロ 0 2 ％ ウ シ血 清ア ル ブ ミ ン ， M m ， マ ． 歩 一 のブ 遺伝子 の 5 B lO B R ， 伴う S L E 様疾患等の 発症 の 機構 を追究 す る第 に k C4 法 プ ． を ト ニ ec r yl s u lf a t e ニ E D T A a se ニ T L C ， ． 細 抽出 し た全 R N A ． ク トラ ン ス レ ッ ニ ， ． ラ ジオ グ ラ フ イ HL の雌 と B lO ． 1 5 ， く東京J in ら の方法 w 0 2 ％ ポ リ ビ ニ ル ピ ロ リ ド ン ， 50 ， 0 ウ ス C4 は と 卜 C 4 ， の5 ニ こ ． 溶液中で 65 C 本研 究 は と 卜 C 4 産 生 異 常 さ ら に は そ れ ． D N A C − 反応後 ． ト リウ ム 産 生 異 常 の 機 構 を 解 明 す る う え で 極 め て 魅力 的 な モ の C 4 hl ， Chirg ， 1 0 0 FL g 変 性 サ ケ 精 子 D N A l させ た − 連関 した遺 ． マ ， b ト した ． ， パ ン ャ ， 塩 酸 緩 衝 液 くp H 7 4l S DS ラ ジオ ア ッ ル ー ジ ． 制限酵 ． ， 膜に プロ ス ー コ 一 す なわ ち種々 の 産生異 ， 瑚 リ ン 法 2 り で 電 気 泳動 し M 塩化ナ ト リ ウム 1 遺伝 子 重 複 と 発 ， ロ プ ． ト を抽 出し た 5 k b の 断片 を ． よ う な遺 伝子 発現 調節 に 関す る多数 の 変 異種 こ の くe x p い に N A の 配 マ 識 して 用 い た ， ウ マ ， cD ． らの フ ォ ル ウ ス の C4 マ ら1 5 J は サ o s a ほと ん どの ， 伝子 が 存 在 し て い る 事 を 示 し て お り 常の R ， ロ ッ 全 R N A い C4 特 ． 既 に 報告 ウ ス の C 4 及 び Sl p の シャム マ ， ー ． サ ンプ e h r a ch セ ル 系統で は C 4 遺伝 子 と Slp 遺 伝子 が 1 個ず つ 存 在 して い る の に 対 し 2 L トに よ る解析をお こ な い ッ ノ ， 従 に ま た 構成 的 に 発 現 す る 系統 の 3 種 の 発 現 様 式 が 知 ら れ てい る プ標 識 化 合 物 は ア ー ， 般的な テ ス ト ス 一 ， 系 ． 差が 生 じて い の 及び Sl p マ B R く軋 2 k C 4り の 雌 の 肝 臓 か ら 10 倍 て D N A C − SI p を 発 現 し て い な い B l OくH 2 ノ 誘 導 さ れ る 系 統 の 他 に 全 く 発 現 し な い 系統 ンで ロ 高発現 系 血 中濃 度 に ． C4 の プは ー 日 科 器 く東 都 に 作 製 を 依頼 し た ， よ り購 入 し た が存在し て い る事が 示さ 翻訳以 前の 段階 で C 4 ， る と考え られ る テ R N A m − イ ソ ト に 血 中 濃度 の 差 を 反 映 ウ ス の 肝臓中 に は C41 マ 以 上 の 多 量 な C4 れ 10 ， 1 0 倍以 上 に も 達 す る 大 き な 差 が 生 じ て い る て ザンプ し ， は 藤 井博 士 よ り 分 与 さ れ た プ と して 使用 した F M ー 博士 n キシ ラ ロ ， ， ウ ス の 系統 間 で 著 マ 川 1 71 は C ol t e ウ シ 21 ヒ ド ， 素 類 は 宝 酒 造 く京都う 東 洋 紡 く大 阪うよ り ． M H C の S 領域 に 位置し てお り DN A C − D N A 及 び 遺伝子 は既 に 報告 し てい る1 7 ト C て い る C 4 と Slp の 血 っ ， ロ 2 の ， は本庶博士 ム 系マ ウス 列 をも と に 誘導さ れ る ンに ロ ウス Bf マ 異 的及 び S I p 特 異 的 合成 D N A ブ ロ ． 般 に テス ト ス テ 一 ア マ ー ． ウ ス の 補 体 第 4 成 分 は 構 成 的 に 発 現 す る C 4 く溶 マ G2 細胞 及 び p ゼ く2 l O H トc D N A この ， 2 61 ， e っ マ t yl e n e d i a th i n l a y e r c h r o m a t o ． N 2 62 ウ ス の C 4 遺伝子 の 5 非翻訳領域 ， 配列 を含 む D N A 断片を p S V O C A T グ した 6 5 X lO を用 い て H i n d III サ イ ト に ク の ー H i n d III リ ン カ ， 個の ト 肝癌 由来 H ヒ 入 の 効 率 を上 げ る た め ロ e 2 5 ％ グリ セ ， ロ トと した この ． ライ セ イ オ ラ ボ社の 定量 キ 算 し て 10 0 く0 2 5 M トリ ス ． ラム フ ニ ェ コ 塩 酸緩 衝 液 一 ル ー ， 3 0 分 間反 応 を 行 い 化 され た ク T LC プ レ ホルム た M m pJ B8 テ コ ニ ェ し オ ， N ． u cl e a r 核 を 単離 した グネ シ ウ ム CT P た t ti ． ． M ， 反応は 70 ． 3 2 M m M m ． くr u o n ク ロ で行 ー ド クタ ベ ン サ 撒い た に れた っ に ス ． 従 クリ て行 っ 490A ， プ ン ニ ー た っ コ ヌ ク DN A ノ p d を抽 出 した ． ， た ， ． ． ti o レ ロ W そ の後 in ． a n ah a n M − m M ド 肝臓 C ri p ti ッ と M m ED T A 10 ， ス 50 ％ホ ル ム ア ミ ， ク ． ノザ ン プ ッ ッ トの項で 既に述 1 ， 5 m ， ー っ た べ た ト と 同様 で あ る ロ ． こ ー ト ロ 後 アガ ， ト ニ レ ロ 電気泳動 に よ ロ M トロ ク m セ ル ン酸 エ を行 っ た 溶液 中で 50 C オグラフ イ ． セ ル ロ ー ス エ 膜上 に 0 N A の 3 CD − プ ， ロ ー ， tr a n s 1 ， レ 単離 は D N A ， ン酸 ク ロ G ， ッ ト と 同様 r o s v eld ス ロ ニ ロ ー ブに よる ハ を行 た っ イ トと 同様 な 条件 で お こ ッ オチドプ ， ロ 端を ン酸 エ ， タ トラ ン ス ッ ． ブは ー 3 2 ポリ ヌ ク ， P で 標識 し使用 その後0 9 M ， −70 0 C ， た 塩 ． ナ ト リ ウム ， べ ％S DS 1 で オ トラ ジ て 改良され た ー ． e r ァ ， M e s si n g に よ っ ジ を 用 い た ジ デ オ キ シ 法 3 1 ぃで行 ー っ た す ． べ ． ． を ポ ットし ロ らの を制 限酵 素 でテ 削ヒ ト した ッ 30 分間3 回洗い ら が 開 発 し3 01 g M 13 フ 成 I C4 ． ナ トリ プ及び反 応 の条件 はノ ザ ン プ ブl ー て D N A 断片を分離し っ 5 時間お こ ない M m 抽出は の ， D N A 塩基 配 列 の 決 定 ． a n ． て の 配 列 に 関 し て 両 鎖 と も 塩 基配 列 を 決 定 し た n u cl e a r ク ， ， S ウス の C4 I l 5 kb の 断 ザ ンプ て標識 した プ ザ ン プ ウ 0 C 4 膜 方 法2 7 1 イ プ リ グイ ズ は ノ ザ ン プロ ッ ト の 項 で 述 ハ ． 反応液 中で 工芸 ノ ， ゼ を用 い て 5 ー ロ 回 洗 っ 合成 ポ リヌ ク l 申 ナト 30 分 間 3 よ ノ ， 化ナ トリ ウ ム 90 ー 膜に プ ロ ス ー ン 法 221 に ． ス ト ロ ッ ス ー ッ 法2 2 I で 標 識 し て 使 用 し の ロ ョ た ミ ドD N A パ アン ー の マ O k b 断 片 く3 ． ン 方 法2 9 18 こ 従 い プ リ ダイ ズ は した l ョ の セ ル シ ー シ ー 系 H a m を が 得ら ー e s el s o n a ム の ロ ニ ロ 系マ ウス の Sl p e r n 塩酸 抽出 した R N A ． ． ， 使用 し た ブ ニ 全 R N A ． 塩化 ナ トリ ウ ム 0 3 M ウ ム 溶液 で 希釈 し 一 ト に よ る R N A の 定量 ア ッ セ イ と 同様 に 行 ロ ナトリウ ン酸 トリ ス ， ら の 核 の 単離 は， 前 述 の か o n ロ エ M m 反応後 ト ラ ジオ グ ラ フ イ トプ 10 倍量 の 3 M ． ロ O ー − h o ut オ チ ドキ ナ ル 2 JL g 熱 変 性 サ ケ 精 子 D N A l ， ， サザン プ S レ セ ー FM ， コ Cl ， ー v it r o トロ セ ル ニ ， II で v u ． Y臥 膜に ドッ トプ ロ ． 0 ． で っ 0 1 ％S D S 溶 液 中 で 52 C 70 C で オ − 方 法2 8 さに 従 っ た ス コ な ． ， っ なお ． ス ー を 防 ぐた め n ブ と して F M ー イ プ リ ダ イ ズ の 条件 は ハ を 0 4 N 水 酸化 ナ ト リ ウ ム 膿 を 0 15 M 塩化 ナ トリ ウ ム ， で ある ． ロ ゼ処理 で脱 リ ン 後 ー ト上 の ー グは H ク トラ ン ス レ ッ た C3 ， ニ 肝高 分子 も しく は P ， 25 万 の 独立 した ， プ ブっ と ー マ 遊離 の D N A c ． ロ M ． ト ニ 1 ． リ ウム を 抽 出 した R N A を ． 1 0 JJ g の C 4 1 2 時 間反 応 さ せ た ， 0 65 C ， プ ， ． 感 染 さ せ 3 0 ノJ g ノm l に 端 か ら 得 た P s t ト H i n d III て ホル ロ ， い ラ ベ ル した R N A ， 援 衝 液 くp H 7 4I ， ， ． B R 3 22 の D N A 0 1 ％ S DS 0 m ． G 50 カ ラ ム で ゲ ル ろ過 し e x ， 52 C M m 0 5 20 ニ 1 1 を加 え こ ． ， 6 ， GT P っ ， a トを行い ッ M m 及 び C 工A A くク ロ ル ー ド 0 75 M 塩化 ナ トリ ウ ム 75 ， 片 C5 ． 0 5 ， イ セ ッ さ ら に 水 中 で 5 分 間 放 置後 1 0 0 0 0 X g ， 溶液 中 で 変性 さ せ ロ ア 2 61 に 従 ら の 方法 ． ル ー オ チ ド を 除 ， l ． 3 k b と 5 k b の 2 種類の ア そ の結果 ． I v a ト と 結合 し た ー ジ ン グ を行 い ー C3H W 7 ， ． s el fli g a ． を A ー アル カリホス フ ァタ ， ， ロ C イ ソ ア ミ ル アル レ O n − ェ l の S e ph m − 塩化 カ リ ウム M m n P U T P 中で 25 C 30 分間お こ な 2 0 分 間遠 心 し て R N A た ル ニ ー ウ ス の 雌及 び B l O B R マ a r zl u f f A T P そ の後半量の フ 5 分 間放 置 し い タノ ス ミ コ い この ． ピ シ リ ン を含む L B 抽出 液 を ， ン 50 k b の 断 片 を 分 取 し て 2 5 メg をイ へ 工 で さ ら に 消化 し ケ ， アセテ ル ． トラ ジ オ グラ フ イ ー r a n s c ri p 0 5 ， 0 01 ， ム ニ ス Al 中で 37 C o ニ ー 0 3 ％ア ガ ， ト と して 使用 した ー 調製 しイ ロ I で 部分的 に 消化 し q ， ウス の雌の 肝臓か ら で C エ ク − 0 検出は ル の ー S l p を発 現 し て い な い B l O ム 1 J L Ci 1 4 C ， a 遺伝 子 の 5 端 か ら得 た P st ト B マ C ． ル をT 消化 し ． V 1 H 7 0 p セ ト で 展 開 く展 開 液 は ー タ ン パ ク量 に換 ． ウ ス の 肝臓 よ り調 製 し た マ 電気 泳動で 35 トの タ ン パ ク質濃度 を バ ， ア D N A サ 酢酸 エ チ ル で 抽 出した ， ラム フ ロ 5 こ 9 51 ニ 4 導 ト を 含 む 1 2 0 声1 の 反 応 液 ー コ W 7 一 ン っ 作製 及 び ス ク リ の ー 高 分 子 D N A は B li n ら の 方 法2 3 I に 従 昭 2 て ライ トで定量 し た ッ の ライ セ 声g ー ド ライ ブ ラ リ グ ン ． ス ミ コ ． ， で 1 分 間処 ル ー ， セ ニ ー G 2 細 胞 に 導入 し た p 理 し 4 8 時 間後 に 細 胞 を 集 め 超 音 波 処 理 に よ ー Vll ． ー の D N A 2 0 メイg を リ ン 酸 カ ル シ ウ ム 法 で こ ． クタ ベ ら上 流1 8 k b の か ッ t l ． ザン プ B lO 1 r a n s c ri p C4 績 遺伝子 と C 4 遺伝子 の 発 現 に h h マ ti o n al c o n ウ ス と C 41 マ t お ける ， p O St − r ol ウ ス の 肝臓 の 全 R N A の ノ トに よ る解析 ロ ッ マ ウ ス くH 2 ． b ， C 4 hl と B lO B R ． マ ウ ス くH 2 k − ， 補 体 第 4 成 分 産 生異 常 の 分子 機 構 C 4り の 肝 臓 か ら 全 R N A 行っ た の C4 その 結果 ． C4 ， を抽出し ウス マ ザ ンプ ノ ， 1 C4 ， を認 め た く図 1 l R N A m − h マ 2 トを ッ ． ロ モ ア タ ー セ ッ 系 マ ウ ス を用い て プライ グ の途 中の 高分子 C4 R N A 等 は検出 さ れ 主 な 転 写 調 節 部 位 は そ の 5 fl a なか た しか しな が ら い C4 C4 h っ ． 方が C4 の 1 C4 共 に レ FE g の レ ， ン ー 後 0 100 C ， た っ N A をプ CD N A プ − 10 の 膜 を 2 回洗 う こ さ らに イ ン タ M m ロ プで ー ン る ロ トロ ル ンの C D N A C 41 ， をプ ロ ー フ ー と して プ と し て 使 用 し た 場合 きた レ C4 ， ， C4 h C − D N A をプ ロ 方 に 多量 の C 4 の C 4h の レ ． タ い る か どう か は結 論 で き な か h C4 ， ン ー R N A m 濃度 や タ ウ マ RN A m ー た 3 に は 2 JL g の 全 R N A を C 41 の ， N ■ い な 1 3 2 2 3 1 h 2 1 l t r a n s c ri p ti 差が有意で あ しか しな が ら ， 血中 ロ モ こ な っ O n l アツセイ に よ ン ト 次の実験を お ， くr u n o n ア ツ セ イ はイ ン タ ー − ナル ー コ ロ が 取れ ル ー 事 及 び 5 fl a n k i n g 部位 以 外 に も 遺 伝 子 発 現 調 節 ． そ こで ． よ り 直接 的 に i ， B lO ， Yiv o n ウ ス くC 4 hl マ 肝 臓 よ り核 を単 離 し の B R 322 p 2 3 ， ． イ ン ， で の 転 写 活性 の 測 定 ア ッ セ イ を 行っ た c4 3 1 た っ こ の v i マ0 ， る c4 G2 ep そ の結 ． で の転 写活性 を どの程度 反 映 して い る の か 疑問が 残 ． L H ， 部位 が 存 在 す る 可 階 隆 を 否 定 で き な い 事 よ り i n を泳動 して い るの で そ c4 グし の方が C41 よ り もや や 強 b が無い た め ル ー ． ， くC 4 11 h ン 活性 を示 す傾 向が 見 ら れ た が トロ u cl e a r viv o 定 す る た め c4 ニ ー R N A 量 の 差 を説明 で き る ほ どの プ m CA T を検出す る事が で ン コ ロ 活性の 差は無い と 考え られ 3 明ら ， タ ー ， ． るin ． モ ロ ナル ー お い て トラ ン ス に 差は 10 倍以 上 あ る と考え られ た の い を プ と し た 場合 に は ー − は 22 声g の全 R N A ン 1 に ー 実験 こ の ， プ C4 ， D N A c ー ク に ー 過 性 の 発 現畳 を 定量 し た 示 した よう に に ， クタ 一 活 ー CA T k in g 部位 の 断 a n − ベ タ ー 系 マ ウ ス くC 4 り 及 び B l O ， 片 を pS V O C A T ， F M ． ウス の 系 マ ， ミ ン の 等 に 技術 的 な 問 題 は 無 い と 考 え る 事 が で き る ところが か に プ を除 き ー ウ ス 共に ほ ぼ同量 の 血清ア ル ブ ミ ン マ を検 出 す る 事 が で き ァ ロ た っ モ ロ るの で は ない か と考 え い ウ ス くC 4 り の C 4 遺 伝 子 の 5 fl 果 図2 プ k i n g 部位 の プ マ D N A ー a n ， イ をお こな 細胞に 導入 して， C − ． 1 遺 伝 子 と C 4 遺伝 っ セ ッ B R ． イ プ リ グ イ ズ し た結果 を示 し て ハ ア ． イ プ リ ダイ ズ し た ハ 5 fl ， h て C4 C4 遺伝子 の ， 部位 に 存在 して 喝 よ ． ， 性の 差に よ っ て生じて 2 に は8 ウ ス の 系統 間 で 発 現量 に 差 の 無 い 血 清 ア ル ブ ミ マ ． ス プと して ー 子 の 発 現量 の 差 は て を泳動 して い る 統間で 発現 童に 差の な い 血 清 ア ル ブ プ ン る 事 を 示 し て い る 32I 塩 酸 緩 衝 液 くp H 7 41 で 一 とに よりC4 コ レ ， に お い ー ブ と して 使用 した 結果 ー トリ ス ナル ー ロ 図1 ． 1 に は 2 2 ノ上g の ン CD − 右側 は C 4 ， 比 較 して 多か ー nki − C 4−m R N A の 量 は 明 ら か に ， 3 に は 2 JL g の 全 R N A 図の 左側 は C 4 を に 1 ， ， − 1 遺伝子 と C4 遺伝子 活性 の 比 較 ー シ ン b h イ に よ る C4 著者 ら は既 に F M た と えば ス ， CA T ． プ の 共に 5 4 kb ウ ス そ の 他の ． ロ 263 イ ンタ ， ナル ー コ ト ン と BlO B R コ ロ ー ウ ス マ ． n u cl e a r ネガ ティブ ． で の 転 写 活性 を 測 r a n s c ri t ン ト ル と して ロ ー p ti o n ル と して マ ウス の 系統間で 発現量に 差 の 見 られ ない C 3 も合わ せ て 測定 した ■ 28 S ト ■ 1 8 S ト 図3 ． あっ た っ 4 ． p rob e ALb ． ． fr BlO o m 1 くC 4 J li v e r 1an e 3トw く m Th e sa li v u nt s of u mi n of al al R N A s m − p r r o c e ssed w fo r sc re e n ed a s ， N s i s ol a t e d ． ， e re u se C4 ， b ウス マ C41 ， ウス の マ C 4 遺 伝 子 の 転 写 活性 に お い て ， sub s eq u e b JLg bl o tti n g n t l y w it h a A lb u m i n ． 核内 R N A と全 R N A 中の C 4 R N A 定量 の 1 遺伝子 と C 4 遺伝子 間で 転写活性 に大 き な善 が い という 結果 をよ り明確 n u cl e a r に するため r a n s c ri p t i o n t C4 ， b マ ア ツセイ ウス と C4 1 マ ウ ス の 肝臓 か ら 核 を 単離 し 核 内 の R N A を 抽 出 そ の 後 ド トプ ッ ， ロ を定量 した − トプ ッ ， ト を行 い C 4 R N A を 定 量 し た ッ ロ ッ トも 合わ せ て 行い 図4 上部はC4 ． 使用 した 結果 を − わ 大き な差 は 無 い 事 が 明 ら か と で − ． C4 ， ． R N A の ド o rt h e rn C4 C D N A p r ob e く 1 e ftl a n d a S e r u m C D N A M i g r a ti o n d i st a n c e s o f 2 8S p r o b e くri g h tl 4 2 k bl a n d 1 8 S く く 2 O k bl rib o s o m al R N A s w e r e i n di c a t e d − の o u se h くC 4 l li v e r a n d B l O B R m o 22 J L g く I a n e ll 8 J L g く 1 a n e 2I 2 た 認め ら れ な e R N A C 41 a nd e r t ot pro b t ot o u s e filt e m e a n a l y si s o u se すな わ ち 遺伝子 と C4 遺伝子 C4 Fig 1 N o rt h e r n bl o t i s ol a t e d f r o m C 4 h m li v e r D iff e r e n t a m o ． 1 な C4 示 した よ う に に C4 遺伝 子 及 び C3 遺伝 子 の 転 写 量 は ほ ぼ 同程 度 で ， 下部 塩 酸 緩 衝 液 くp H 7 41 C D N A をプ ロ 0 で ． − は 100 C の 10 に 膜 を洗う こ m ． C4 ， ー M また − ， 全 R N A m ブとして トリス 一 と に よ り C4 − ． C D N A プ ロ ー ． ブ を除き ． ． ロ ー ル と して マ ， さらに イ ン タ ー ナ ル コ ン ト ウ ス の 系 統 間 で 発 現量 に 差 の 無 い 血 清 264 Fi g 3 A ． ． m 一 一 伽 a ss a ヨ u u N b p b p ed a nd 32 a n dp l m C O n t t r Ol a r ed p ． ． C ell s C O n t E x t r a n sf e ct e d ai n i n p r e s si o n ， g 5 fl ． of CA T a nkin g re c o fr a m g bi m e nt s of u cl e a r s ob m g ， t ra of e r a n s c rip t ai n e d t B 10 o m fr h C4 ti on i s ol a t o m ． h くC 4 J li v e r くri gh tJ w e r e o u se l O J L g O f C 4 C D N A C 3−C D N A くi n t e rn al B R 3 22 D N A pl a s m id くn e g a ti v e − ， p ． こ − u in H pl th C4 e e t R n Z い n A 叫 一 ぺ − G2 p id a s m ． 誓誓 b ヨ ぎ 二 − 恥 一 t n a n N A a c ti vi ti e s it h w fr a n s c ri p ti o n ． 濃 帝 窯 普 泌 Fig 2 ． m o u s e く C 4 り 1i v e r E q u al a m o u n t s o f l a b el e d R N A s く1 0 8 h y b ri di z e d t o n it r o c ell ul o s e filt e r s ． e re l C O n t r Oll C O n o u se B lO B R ed w C 4 tr e m P 1 a b el d R N A r e p d ai ni n th − n u cl ei e rf o r m of C 41 it h w y 1 ef り く p n al y si s o u se h s d an 1 C4 g en es くL eftl S c h e m a ti c r e p r e s e n t a ti o n o f h m o u s el a n d C 4 1 くB l O B R m o u s e H 2り C 4 くF M h e n T h e 5 l f a n k i n e g g fr a g m e nt s of C4 g e n e ． − ． ， ， 一 ． 1 d C 4 g e n e く1 8 3 3b pI w e r e s u b c l o n e d H e p G 2 c ell s w e r e t r an Sf e c t e d in t o p S V O C A T W it h t h e s e r e c o m bi n a n t pl a s m id an d w e r e u sed t o く1 77 2 b pl e n z B y Sh o m H e r t r a n s c ri p sit e s u s ed ti o n al w e re a ct i v i ty a s I 三 H c H i n c II くR i gh tl A w s t h e c o n v e r si o n o f c hl o r a m p h a c et yl a t ed A cC Ml p r od u ct く a m it s fo y ， ． ． R ． f oll o w s e ni c ol こ B g r a m くC M I m t D ． 1 ot blo t R N A m o u s e s a nd R N A s a n al y si s i s ol a t e d f r li v er ． n u cl e a of o m t o C4 h t al m R N A o u s e D iff e r e n t a m o u n t s r R N A s i s ol a t e d f o u s e ， くC 4 り 1i v e r 5 JL g a nd t ot m al BlO ． − − ， ． ， ． ， − o er ． − ， ． ， ro a nd s li v of a nd B l O B R m o u s e くC 4 りIi v e r W ere 2 5 J L g 1 2 FL g 0 6 JL g 0 3 JL g s p o tt e d o n n it r o c ell ul o s e filt e r T h e s a m e filt e r w it h a C 4−C D N A w a s s c re e n ed s u b s e q u e n tl y A lb u m i n C D N A p r ob e u p p e rJ a n d a S e ru m p r ob e く l o w e rl く m 1 0 JL g e st ri c ti o n u t o r a di o ． n u cl e a r C4 a n ． a s sa Fig 4 ． 補体 第 4 成 分産 生 異 常 の 分 子 機 構 ア JV ブ ミ ン 示して る しl D N A C 血 清ア ． 使 用 し た 場合 ． C4 ロ ブミ ン ル 核内 R N A ， ブ と し て 使 用 し た 結果 を ー CD を プロ N A た っ 従っ ． h ウ ス マ 事が き た で R N A に お い D N A を プ C − 明らかに C4h て R N A 中 の C4 R N A m − ら 1 6 倍 程度 で あ トの 結果 と R N A に は C4 h 致 した 一 ウ ス の 方 に 多量 の C 4 マ ． − C 41 の 全 10 p g の 相 当し に た っ ， ザ ンプ ノ ロ d u n q r ， o F 41 ， を5 つ ル グ の ロ の ク ロ ロ ト に よ る 解 析 を行 い ッ る 1 引りれ 著 し い 塩基 配列 の 相 違 に 従 っ て 合 成 さ れ この ． ブ く図 6 の 上 部 に 配列 を示 す1 ー トを行 い ッ ら1 3 つ を用 い て サ ザ ン プ れ ら の 5 つ の 遺 伝子 が こ ， た べ 前述 の 5 ． ずつ コ ドク ス ミ L G T T ロ Fi g 5 − M ． Cl o n e s 2 W 7 m G G T G T T C A A C A SLp C G A A A G G T C C G G G A C A T 3 C C A G G C C C T A C A C G T A C G A II Cl o ， m c o nt ainin o u s e bled a nd u si n Xh p s of C4 e e 27 c o s m 27 fi v a c c o r di n s a nd g I d e si g o a g T h ． 1 0 k b ．工 q t h e − r el a t e d id Th es e p pi n g g t th o e w si z e fi v e n z y m es of e r o u p g ， s mi d th H e di v id er e r e st ri c ti o n c o s of en e s g cl o n e s r e st ri ct i o n ． 0 V e rl a a S al p of s w I − z − A A C G T ， ， − ， ． プか ー 2 2 Th a nd e n u O 5 − C A G G A G A A T T T C T T A A ， 1 G G 5 − 8 ． ． be 1 8 1 8 h y b ri di z a t i o n w i th th e a nd S l p S p e Cifi c o li g o cl e o ti d e s e q u e n c e s o f t h e C 4 S P e Cifi c − ． Pr a 2 7 Cl ， − ． − Sl p s p e cifi c p r o b e s a n d t h ei r c o m p l e m e nt a ry st r a nd s a r e sh o w n a t t h e u p p e r p a r t of t h e fi g u r e C l o s ed ci r cl e s i n di c a t e n u cl e o tid e d iff e r e n c e s b e t w e e n C 4 a n d S l p s e q u e n c e s In ． − ． a c th e co s m id a u t ， − − es bl o t G G T 4 ． G T C C G C T A C C A d ， G A C G A T Cl ． e re n e s a re n at ed a s c o n t ai n i n g t h e C 4 g e n e d t h e Sl p g e n e s くS l p W 7 a S I p W 7 b Sl p W 7 C Sl p W 7 dl O n t h e b a si s o f t h e r e s ult s of S o u t h e rn h y b rid i z a ti o n u si n g t h e C 4 S e Cifi c a n d S l p p S p e Cifi c p r o b e s a s sh o w n in Fig u re 6 a n C4 tid S p e Cifi c S ， o u th e r n e ti c n u cl e o ed h y b ri di m S ． ym t h S o l e c ul a r i n t o fi v e g r o u p 1 n g fr a g m e n t a s se m s の グル ． c Fi g 6 千 C4 であ るの ， つ を 選 び くcl 1 ン ー C 4 ． 工 o ， て い っ た C 4 特異 的及び Slp 特異 的オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド プ Cム x h 27 ク ， 全体 的 に 非 常 に 高 い 相 同性 が あ る が ， − 9 うち て 制限酵 素 ン に つ い ー をス ク この ． ． ． 亡E を得た ン ー ー 単離 した遺伝子 の同定 ． 3 sn ウス マ e n e 9 ． 5 l W 7 ． プ に 分 け る 事が で き た く図 5 う ー か Slp で あ るの か を調 lb e C3H る ドラ イ ブラ リ ス ミ コ サザン プ ， C 4 と Sl p は ロ ． y い グ に よ る 解析 ン ブ と反 応す る 27 ク ー ン 2 ロ 日o グ した結果 ン ロ ー ニ ー ウ ス の マ 地図の 作成 ロ ドク ロ C IS 切 断 部 位 で は 著 し く 塩 基 配 列 が 異 な ッ 2 倍程度 ， W 7 ． ニ プ h と こ ろが 核内の R N A 中の C4 ． 5 そ の 差は 8 倍 か ， 結果 は 前 述 の この ． リ ー ス ミ コ C 4 及 び Slp 遺伝子 の 単離 ． C3H ． よ う な大き な差は見 られ ず こ の ， た っ 全 ， ． 方が 多 い だ け で あ の ブ と し た場合 ー 1 ほ ぼ同量 て は 1 2 JJg か ら 0 6 p g の C 4 全 R N A 中 の C 4T m R N A の ロ を検 出す る 量が で き た R N A m C4 ． 構成 的 に Slp を発現 し て ． の と 核内 R N A 及 び全 R N A を ド ッ ト して い る と考 え る の 王工 ブと し て ー 全 R N A 共に C4 ， 間 で 差が 見 られ な か ウ ス マ をプ 265 lo w e r u si n o r adio g t h S p e Cifi c g p u si n − of th of r a m C4 e a rt p S p e C ifi c th r ob e p fi g e S e rob e 1 eft sid eン く ． mi d Cl o n o u u re th w e m くri gh Th blot th e a n a l y si s si d e l o r r e s ult of t e sh o w n a s th e e x Slp e ri p cl o n e ． − l くr e p r e s e n t i n g S l p W 7 Cl 7 Cl o n e 4 く C 4W l e 8 く S l p W 7 bl Cl o n e 2 2 くSl p W 7り a n d cl o n e 2 7 く Sl p W 7 dl w e r e sh o w n i n t h i s fi g u r e m e nt g c o s ， ， ， ， ． 266 Cl 22 ． た 2 71 Cl ， H i n d III で 消 化 し サ ザ ン プ ． そ の結果 1 ． 応 し 他の 4 ， のク つ つ ロ ン の ー は Slp プ ロ W SI p 7 Sl p プ ， 78 W Slp ， れらの ロ ロ ， W をC4 コ 7b ロ ， ロ ブ を 使用 し て サ ザ ン プ ー つ の グ ル k b くS l p W k b くS l p W ブ と反応 した遺伝子 ー a ロ H m I で 消化後 トを行 ッ くC 4 W 7l ． l W 2 9 k b くS l p 7a l ． ， 7b l の 1 本のバ 太 い 矢 印 で 示 す1 ン 2 7 k b くS l p を B 3 た っ l W 7 a そ れ をす 8 蒜ふ Ih f O e e n e 9 − − − − 4 くC 4 W り ． W 7 c 3 6 くS l p l Cl ， が つ てい W 7 a 系マ ウス Sl p W ， Sl p 7b ， W 7 るが C 4 は1 に ， また FM ， UC p H i n d l 廿サ イ ト く図 の Slp ， ， 17 ． 詳細 な 制 限 酵素地 ， ， は共通 して 存在 し に Cl ， そ の 結果 3 側 は F M サ イ ト し か 存在 し な い 事 3 系マ ウス W 7C ， の つ C4 遺 の ラ − 曾 41 e y Q r C4 に連 の ． グ後 の Slp 遺伝子に も見 られ る 3 7d Cl ， ン ニ ー ． ■ − く 7 c4叶 d 0 U n つ 単離 で き た事が て ， ロ 図 を 作 成 し た く図 7 う Sl p ノ べ R I で 遺 伝 子 部分 を 切 り 出 し o 7 中 に 細 い 矢 印 で 示 すl 5 l ． サブク に ー W 7 b C l 8 くS l p ， l から Ec W 前 述 と 同様 ， 9 k b の 5 本の バ ． ． W 7 d 19 ベ ク タ で ， ウス に は5 マ ． ， 1 ． C3 H W 7 ， たと こ ろ っ 2 7 kb ， 遺 伝 子 の 全体 像 を 明 ら か に す る た め 1 9 I ． 詳 細 な 制 限酵 素 地 図 に よ る 解 析 ． くS l p ． H a m 明 ら か とな ． ． トを 行 ッ 2 9 kb ， 関し た遺伝子 が存在 し 4 1 ， ． ドが 検出さ れ ン ロ 4 1 kb ， C l 2 2 くS l p ド が 検 出さ れ た く図 7 中 に 肝臓の高分子 D N A ． ， c ． ， 5 ， l W 7 な4 2 kb プ ， サザ ンプ ， ． こ ． 5 ， たと ころ っ プ に お い て それ ぞ れ 4 2 k b ー 7d 消化 し っ ブと 反 ー と 名 付 け る事 に し た を B ン ー 7d W S lp ， ミドク ス ロ ブ と 反応 し た遺伝 子 を それ ぞ れ ー W 7 c Slp ト を行 ッ ブ と の み 反 応 し た く図 ー 6う こ の結果 に 従っ て C 4 プ ． ロ み が C4 プ 43 白 − HH F C4 k Cd ． T CGAC TG GGGA ACC CATT CTA GTT TTGT TAG GACC TTT ACCT GT CTTA TC TATGT GTCA TGTT T F r M ム W 7 S P S1P W 7 S1 d S1P W ． Sl T 1 − ． r l ぐt O n e I c I I I 3引 − 一 A − − 一 − 一 − − − − − C − −−． − G − C − ． ． ， ． ． ー 一 − − −− − ． − − − − 一 − ． ■ − ． − − − − − − − 一 一 − ー ー ー 一 − − − 一 ー． − − − − − − − 一 − ー − 一 ． ， ． − ．．−− ． − −− − −−− ． ． − ． ． ． ー − − − − − − − − − − − − − − − − − − − − − − − 一 ．． 一 1 − ． 一 再 ー ー ー − − − − 一 一 − − − − − − − − − − − − − ． ． ． ． ． ． − − ．． − ． − − − 一− − ． ． ． ． ． ． ．− ． ． ． ． ． − − − − − − − − 一． ． − − − − ． ．．− − − − − ー 而 o n e − 路路 線 細膵 経 路細 欄 撒 賦賦 紬 傭購 購 購購 購 C − − − − − 一 一 − − ー −−− ■− − − ー ー 2 2l く く っ さ − ニ川 n 十ニ S i d I HI こB Q m − 川 − A − − −− サニ B g I 五 十こ E c o R エ 7 二X h ．工 ol エ 卜S 一 一 ー − ー ー − 疇 ー − ー ー ．． ． − ． − − − − 一 一 − − − − − − − − − − − − − − − − ト ー − − − A ． ． 川 丁 − ガ ． ， ， ． − ． − − −． ． ． ． ． −− ．− − − ． − ． ． ． −− ． −． − − 一． −一 ー ー − 一 丁 − − ． − − − − − ． − − − − 一 一 − − − A 一 丁 − − − − ． − − 一 G − 一 丁 一 − − − − − − 一 − − − − − 一 − A 一 − ， ． ト ぎ − − − − − − 1． ． ． −ー ． ． ． ． −− −− 一 一 −− −− − − − 一− − 一− 一 − ．− − ， − ．− ．− − − − − − ． −− − − − − − − 一 一 − A ト − − − − − − − − − − − 一 ■． −−． − − − 一 T ．．． ．． − − − 叩 一 一 − − ． −． ． − ． ． ． ． − − − − − − − − ．． − 一 − − − − − G − ．． ．． ＋ − ． − − ， − − A − − − − − − − − 一 一 ． ． − − − A − A − ． ． ．．． ． ． ． ． ，− ． ． ． ． ． ． ． − − − 疇 −． ． ． ■ − − − −一 一 − 一 − u． − − 一 −， ， 一 − − ．．．． − − − − − ． − ． − − − − ． − G − − ． − − − A ． − ．． A 一 − 1 17 GGCC AT CAC GTG GTT TCCC GG 正 oc ー 一 TTT GGG GCC AAG ATT TCTA CAG AGA CCCT GG TGTT TGG GTTG CCT CCCC AGC TCT GGHC CT AGGG CCA GTTC TGTTT CTT 5 kb Y ー A − 銅 錯錯 闘 ゎ 路紺 緒 経絡 緒 路緒 膵 臓 描描 撒 購職 制 制服 闇 〆 t cl 一 A G A G G G A C A C G C A C A C G C A C A C A A A C A C A C A C A C A A G G G G A A G T C C C T G G T A C T G G G A A T A A A C A A G C A C C A G A T 岸C A A T 掴 朗噺 指 封 8ナ sl ，．， H 7b c1 0 n 8 − 7 − 一 謹 sl l − GGA GC TGAA TAC ACG CAC ACAT GGG CAAG CA CATG TAT TCG TACA CAC ACAC ACA CACA CA CAC ACGC ACAC GCAC ATGC A 州都購 柚描紺錯 錯銅 錯錯 ト 丁 G ト り 励 指 錯 銅 価錯 銅 鋸榔 指 錯 − 7 sl G W ノ r H − 7 W C丘 喜鑑 三 F −− −． ．− − P 一 Fi g 7 R e st ri c ti o n m a p s of t h e D N A s p an 1 n g t h e C Odin g re g lO n a n d t h e 5 fl a n k i n g r e g 1 0 n O f fi v e C 4 r el a t e d of th e H 2W 7 m o u se T he ge n e s S u b cl o n s c o n t a i ni n g fi v e C 4 r el a t e d g e n e s w e r e ． ． ， − − − ． − Ch a r a c t e ri z ed r e st ri c ti o n a rr o w s m o rp hi d u n th e r D N A c d p rob e t h e 3 en d e n di g e st i o n e s Th e by e n zy m e h e ， s ． e r e co m un 1 q u e Slp W C en t 7 8 r al bin a ti o n B gl II g a nd re gi o n of i a th e n a w g t t a h d o tt e d p p ro xi m hich th th indic e o ri z o n t al i ndic ai n i n al t a n sit e sit e e n e o n t t c o n H i n d III sit e H o ri z C 4 W 7 g en e i ndic at e s th h ed t e 5 w a s 7 p w i th th u niq u e E C 4 ge n e a rr o w l at e infe d c o R I ． ol a t re o v e r y − ， ed o c a ti o n rr ed gl th O n si t e f gi r e 5 e indic s ． ck c h a r a c t e ri st i c e e n − h Fig 8 ed t a th i e h y b ri d i zi n g a l th i n a r r o w e nt s o ri z o n t s eg m e n e n e s g s eg m Th ． it h w ． e B R D N A ． of o n th q C4 くH 2 り a − tid l e ft sid W it h th e n u cl e o e n u at e a n p re s e o f t h e 5 fl a n k i n g di v e r g e n t S l p g e n e s o f F M くH 2 dl B lO 7 nd C 3 H W 7 くH−2 W J st r ai n s The m b e r o f th e C 4 F M g e n e i s p r e s e n t e d d all t h e o t h e r s e q u e n c e s a r e a li g n e d se e − ． ， ． ． C 4 FM nt ed i n th e s eq u e n c e s e q q u e n c e s th at a re a S e q u e n C e D a sh i n di c q u e n Of th e S e in t h e d el e ti m C e o n a xi m i z i s th e sa m N ． u e n c e s a re S e − − a nd of ro m ， u e n c e s e d iff a a s o se fr e re nt e th e th e C4 t u cl e o t id e th p o m o siti o n s F M ． r e sid u e s o f o th e r th w h g e n e F M C4 e ere th e 揮i n d i c a t e d th i nt ro d u c ed i nt o th e s e q e t h e h o m ol o g y w it h t h e C 4 F M u e n c e se q t e o u en c e ． 補体 第 4 成 分 産 生 異常 の 分子 機構 伝子 C4 見 られ る E に W 7 ユ ニ ク で た っ あり を持つ と考 えられ た W 7 b Sl p Sl p W ， 7 C ， 従っ て3 側に ， ． 他の ， 4 SI p SIp W 7C み が の Slp W ， 7 d W 7 分及 び S l p a ド様 構 造 を と た ユ ー ニ 側に ， ク W 7 a Slp ， い お W 7 で あ た っ ， W 7 3 つ の 遺伝 子 は C 4 に 類似 した 3 部分 を持 ， ッ て い る遺伝子 で ある 事が明 らか と な っ ， 5 fl a nki n − 前述 の W 7 d あっ た イ ブ リ ッ ド様 構 造 を 持 つ 3 つ の 遺 伝 子 の 構 ハ 造 を よ り 詳細 に 解 析 す る た め 5 イ1 ， a 2 配列を部分的に 決定 した 既に 報告 して い る よう に I ． FM 系 fl a nkin れるが ． て 5 つ の 遺伝子 に つ い て こ の 部位の塩 基 配列 を 決 定 し た した よう に F M ， 比較 し た 系 マ ウ ス の C 4 くC 4 F M 図8 ． Slp ， W 7 b に Sl p ， W 7C ， W 7 b ， Slp W の つ 7C ， 塩 基 置換 は 2 b p ， イブリ ハ Slp I ッ ， W 7 d みで の ド 様構 造 を 持 の 5 fl ． kin g 部位 an ． ウ ス と C 41 マ ウ ス の肝臓 か ら全 R N A マ R N A を定量し たと こ ろ m ． 嚢 1 0 ト 1 2I と 致 して 一 C4 ， ， 1 にC4 が 検出さ れ た R N A m b ． を抽出 既 に 報告 さ れ て い る に 比 べ 約10 倍以上 こ のよう に R N A m l C4 の 善が翻訳以 前の段階で 生じて い る事 を示 して い F M ， C4 る ．川 せ b ln ロI1 0 n くS ユ キ C 4 8 f ． − ． S ． ． r e c o m 7 7b W ， S Jp n 8 n− VY 7 c ． sI p W n 8 S J 8 c 4 − M 几 r o d el d bi n a ti o n ． ． ． ． ． ． e s c ri bi n of th e i g u n e C4 a n q 一 山． ． ．．． u al c ro s s d Slp g e th e 5 e nd n e O V er − i n th ．i b et e w H 2 − − t e en W 7 m h w o o m ol o g − ， o u s − ． 几j ch r o m e − − ． o cc u rr ed i ． i g i n th e of cr o ss ． ． 7 W e s r e s ult i n o so m X i n d i c a t e s a p r o p o s e d r e gi o n al t h o u g h t h e p r e c is e sit e o f r e c o m bi o u s e ， r o b a bl ． ．i nJ re g p y l o c a t ed i n i o n of t h e g e n e s w a s n ot d et e r m i n ed A d d it i o n al u n e q u al c r o s s O V e r S m a y h a v of t h e r e c o m b i n a n t C 4 S l p g e n e s r e s u lti n g i n t h e m u lti p li c a ti o n o v e r e g 7d ゆ ．．． ．L ． r Fig 9 W bJ r 8 C O m SIp − くS ．p と 次 に 転 写活 性 を 比較 し た と こ ろ ， C 4 b と C 4 1 間で 有 ． 計 用 C O m h 1 ， o n ロl 2 に 量 が C 4 の 血 中濃 度 の 差 を 反 映 し て い る 事 は と を比 較 し た と こ ろ 32 2 b p 申 2 2 塩 基 の 置換 及 び C A A dd 椚 28 示 に J と Sl p くS l p 8 b p の欠 を比 較 したと こ ろ 8 b p の 欠失 F M と C4 従っ て前述の 3 の 多量 な ． k 伝 子 くC 4 うの 塩 基配 列 も 決定 し に比 べ を比較す る と F M 認められ たが に ． h 結果 合 わ せ て B l O B R く鉦 2 り の C 4 遺 ． FM 塩基 置換 は 1 b p し か 見 ら ， 考 C4 っ C4 ， を比較す る と とC4 − し C4 よ 7c ， 部 位 に も 非 常 に 高 い 相 同性 く9 5 ％l が 認 め ら 見られ る は は C4 遺伝子 由来で あ ると考 えられ る 開始 コ ド ン か ら 約 3 00 b p 上 流 に 著 し い 相 違 が g ， は完 ， ウ ス の C 4 遺 伝 子 及 び Sl p 遺 伝 子 間 で 5 マ W 7 d 遺 伝 子 くSl p つ k i n g 部位 の 塩 基 弧 ， F M とC4 Slp W ． ． 部位 の 塩 基配 列 の 決 定 g た っ が SIp ． W 7 b Slp ． あっ た Slp ． 4 7a b p の 欠失及 び 3 b p の 塩基置換 が 認 め ら れ た だ け で イ ブリ ハ ， た っ れ なか ， つ W 7 C4 ． と Sl p W の 遺伝子 は 明 ら か に， 4 つ b p の欠失が 認め られ た が ， 類似 した 5 部 に 方他 の 一 ． 類似 し て い た に なか W 7 b ま り Slp 致 した 遺伝子 の つ の F M ろ， S l p こ 特徴 的な 60 に 失 が 認 め ら れ た が ， 塩 基 置換 は わ ずか 1 b p し か 見 ら れ ， つ ． F M C4 W 7 はC4 て 全に 一 F M 得ら れた 5 ． 配列 を こ れ ら と 比較 し た と の み は 見ら れ ず に の っ て C4 い お b p の 大 き な 欠失 が 見 ら れ る は 共通 し た H i n d III サ イ ト及 に び S al l サ イ トが 見 ら れ た が W 7 a を 基本と した 繰 り返 し構造 中に Slp I サイ ト が o 遺伝子 は類似 した構造 の つ と こ ろが 5 ． W 7 d Slp Xh ， 遺伝子 に は見 られ な い の つ ， 事が 明 ら か と な が サイ ト 存在 し 他の 4 の み に ー R I c o 2 67 i n th e li m it ed − n a ti o n r e gi o n 2 68 意な差は 認め られ な か 定量 し 比 較 し た と こ ろ けであ た っ ま た肝臓の 核内 R N A ． を 2 倍程 度 の 差 が 認 め ら れ た だ ， 2 倍程度の 量の 善 が こ の ． た っ ど の 程度 転写 ， 活性 の 菱 を反 映 し て い る の か は 現在 の と こ ろ 明確 で は い な し か し な が ら 現在 ま で 考 え ら れ て い た よ う な 転 ． 1 1 ト1 引が 写活 性の 大 き な 差 O St P r a n S C ri p t − ti o n al コ 無い事 は明 らか で あ り ト ン ロ な 役割を 演 じて い る と 結論 す る こ と が で きた H e m b くC 4 I 2 W 7 y らは w a en ウス の雌 マ ウス マ Slp を 全 く 発 現 し て い な い H ， k 汁2 ， くC 4り マ ウ ス の 雌 を 使用 し D N ， 雌 の d − I 感 受 性 部位 を 検 出 a s e し て い る 3 引 そ の 結果 C 4 遺 伝 子 の 5 fl a kin g 部位 に ， n − ， ． 2 そ して H ， 4 ケ所 の 感受 性部位 が存在 し て い る 事 を明 ら か に し た そ の 部 位 の 感 受性 は ． d 甘2 ， h くC 4 コ くC 4り マ ウ ス で は 同程 度 の 強 さ で あ り は こ れ ら に 比 べ て 数倍 程 度 強 か た っ W 7 H 2 − ， 部位 を 持 つ ． の 事は こ ． ， C4 遺伝子 が 3 つ と で はp ． o st r a n s c ri p t ． ti o I C4 の 差が生 じて い る か と い う 問題で あ るが とこ ろ び成 長 ホ ル が られ てい る c えら れ 351 遺伝 子 C y の 以外 に R N A の これ ． ス も しC4 ． プ ライ b シ ン プ ン ロ トに お い て ス プライ シ ン ッ が検 出さ れ る はず で あ る ． また 一 ． 量 の 差は 2 倍程度 核 内 C4 R N A − ， は 大 き な 差 は生 じ て い な い と 思 わ れ る R N A の 安 定性 の 差 が ， C 4 h 以上の事より ． と C 41 の 発現量の 差 の 原 因で あ る 可 能 性 が 高 い と 思 わ れ る が 後 の 問題 で あ る ス ミ ドを ． マ びSlp W 7 8 てC3H ． W 7 くH 2 り W 7 a つ ， ． ， くS l p つ この の 遺 伝子 くS l p W W 7 そ して C 4 に類 似 し た 3 明ら かと な っ た 3 l 部分 を持つ W 7b ， Slp よ うな 7 b ， に類似 Sl p W ハ 7C ， ハ W 7 C ， ス の ウ マ C4 遺 その結果 ． W 7 l ， した 5 ， 部 分及 イ ブ リ ッ ド様構 Slp W 7 d l 持つ 事が イ ブ リ ッ ド様 構 造 は Slp W 7 d ， Sl p 遺 伝 ， l が C4 遺伝子 と 391 と 翻訳 ， イ シ ン ま で は 完全 ロ ， bin の モ 遺 伝 子 由来 で あ t a n デル は bin r e c o m まず ． 遺 a nt 不 対 接合 ， ， ， ， 側 が 白 で 示 し た S l p 由来 の 生 じた の bin a n t が 最も 5 側に 位 置 し ， 子はその 3 り こ また 3 ， つ の 遺伝子 が a nt 典 型 的 な Sl p ， 最終 的 に 3 ， デル で あ モ W あ る Sl p で bi re c o m ッ トにより 事実 ． ， W 7 a Slp ， 遺 Bf 遺伝子 が 存在 して い る 事を に トにより ロ 7 a 遺伝 t n a n 側 に 2 トO H 遺 伝 子 を 伴 う 事 に な る ， D N A を用 い た サ ザ ン プ C − bin m 遺伝 子 が 生 じ た と い う の モ デ ル に よ ると こ ． r ec o 同様 な 不 等交 叉 が さ ら に 起 ． r e c o m また ． 5 ， 側 に 2 1 O H 遺伝 子 を 伴 21 O H ， ， て っ CD を用 い た N A 遺伝 子 は す べ て そ の 3 の つ − る事が 確認で き た い 著者 ら は既 に F M 系 ウ ス を用 い て マ ， S l p 遺 伝 子 の 発 現 様 式 の 相 違 は 5 fl a n ． る事 す な わ ち C 4 遺 伝 子 の 5 fl a − 的 な 転 写 活性 が 見 ら れ る が bin つ 事が H 2 W ． 7 Slp 遺伝子 の 発現の 原 因 い Slp ア ッセ ， 5 fl の a n − み ， イ を行 っ の つ たと こ ろ ep bin a n t 遺伝子 で あ る Slp な 転 写満 性 が 認 め ら れ た る W 7b ， Slp c c る 事を示 して D N A は ， W 7a い る 欄 4 a nt ベ W 7 b Sl p ， ク タ ， に ー あ る SI p で の い W 7 a W 7 対 し に ， で は構成的 C D N A の 解析 よ り ウス で は少な く と も 2 種 類の SI p てい bin 前述の 結論 をさ ら に 支持す ． る結果 と し て O g a t a ら は マ ， G 2 細胞 に 導 入 し て C A T 典型 的な Slp ， a nk − r e c o m 実際に Sl p ． の つ ， 5 fl の は C 4 様 の 発現 をし て kin g 部 位 を p S V O C A T ト肝 癌 由来 H ヒ つ で は 全 く 転写 活性 が 検 出さ れ な re c o m れら3 こ ， ウ ス に お け る 構成 的 な まり3 少な く と も 1 ， る と結論 す る事 が で き る W 7C 従っ て ． マ つ ， う ち の n 遺 伝 子 が 機 能 的 な C 4 由来 a nt in g 部位 を持 遺伝子 C4 遺伝子 と ， kin g 部位 に あ Slp 遺伝子 に は 活性が認 ， め ら れ な い 事 を 示 し て い る 3 21 r e c o m ． k i n g 部 位 に は構 成 ， ， ， これ ． ら の 結 果 は こ の モ デ ル を 支持 し て い る と 考 え ら れ る 組み込 W − ウ ス は C 4 遺 伝 子 を 1 つ くC 4 造 の 遺伝 子 を 3 の点 は今 ． 用い 子 を 1 つ くS l p こ ， 伝 子 及 び S l p 遺伝 子 の 構 造 解 析 を 行 っ た C3 H W 7 ， て っ D N A C − 結果不等交叉 が起 こ り 5 側が 黒 で 示 した C4 由来 グ と C 41 に お い ． コ 3 ， − ， て 調節 され て い る と考 っ ， m の 遺伝 の そ れ 以 降 で は 4 ％程 度の r e c o m 図9 ． C4 の ． 伝子 が 生 じて 来た過程 を示 して い る 伝子 の 上 流約 4 0 kb しか認め ら れ ない 事よ り 核内 で の C 4 R N A の 分解 に − る事 を示 唆 して い る ， つ 塩 基配 列 を 比 較 す る と の が ． 発現及 M E C の ク ラ ス 1 遺伝子 の発現 は ， 細 る 検 出でき な い C4 W 7 1 Bf 示 した よう に その よ う な高分子 C 4 R N A に ． ， W 7 る H 2 い と こ ろが 置換が 見 られ Slp ． 実 際 図8 3 つ kin g 部 位 を 持 n ら 1 6 3 番目 の ン か ニ ッ − 図1 401 − ロ 全 RN A のノザ ， チオ メ 致 して い る 一 l W 7 1 サザ ン プ グ の途 中の高分子 C 4 R N A が 開始の に くS l p D N A C − 現在の て R N A ス プ ラ イ シ ン グの 段 階で 差 が 生 じ て い る な ら ， ま た既 に 発 表され て の 安定性 を介 して調節 さ れ て い る と 考 え また ド様 構 造 を持 ッ − Slp ． 特 異的 な に ． ， ． 7 た と 考 え られ た っ イブ リ ハ とが で き た の 段 階で の 調 節 も 考 え ら れ る ば 示 した よ う に る 結 果 生 じ たre の 特 異 的 な B g l II サ イ ト か ら C 4 W サイ トの 間で起 こ こ ． n a ti o n 図 7 上 部 に 破線 の 矢 印 で 示 し た ， 確認す る の誘 導 抑 核 内 R N A の 分解 の 程 度 に よ てい m − と は n や リ ン ホ カ イ ン の 誘 導3 7 I 等 モ ン R N A m ， ト ン 遺伝 子 3 4 1 や ヒ ス ， ， h bi m 子 は C 4 由 来 と 考 え ら れ る 5 fl a る ， ti o n a に RI c o 存在 し そ の う どの段 階で C 4 の n E re c o 遺伝 子 だ と 考 え れ ば 説明 す る 事 が で き る t a n bi W 7 a Slp つ ち の い くつ か が発現 して い る事 を支持 して い る と考 え られ る m kin g a n ． t h さ ら に 後述 ， ， an k ウス で マ ウ ス に は C 4 由来 の 5 fl マ bin r e c o m W 7 H 2 ， C 41 間 で転写活性に 有意 な善が 無い 事 を するように ウ ス と 牲2 マ bin r ec o い ． − C O m に ， が こ の 間題 で 重 要 ル ー SIp 遺 伝 子 と の り ． − m 彼 らが Sl p C A P サイ トのす ぐ3 ， R N A W H− 2W ， が発現し と呼 んで 7 1 − 側に B 7 a m H い I サ 補 体 第 4 成 分産 生 異 常 の 分 子 機構 イ ト を持 Slp W 7 b つ 事及 び H in る と考 えられ 方の た R ， obin s c W 7 b W 7 Slp ， e らは H 2 − W 7 単離 し L 細胞 に 導入 し て つ は C 4 も しく は Slp を分泌 す る よう に な た っ ， ． 感謝 る事 を示 し て お り 思 われ た R ei d ， り そ p r o t e ol y R e v T 肝臓 か ら 全 R N A ス の を抽 出 し C4 ， た と こ ろ 血 中濃度 を 反 映 し C 4 h 以上 多量 の C4 2 C A T ． フ ァッ 3 h C4 ， を抽出 し h ア コ 5 ， H r a n s c ri p t ti 1 っ ． た ． を検 出 し た − た っ n その 結果 ． 量 の 差 を説明 で き る穣 R N A m ドを用 い て ス ミ 得 られ た ． つ ク ， ス ミ コ 5 ， ロ ドク ウ ス は C 4 遺伝 子 を 1 マ つ bi r e c o m ン の ー ， 解析 結果 Slp 遺伝子 を 1 bin の re c o m 5 側が C 4 由来 3 持 つ a ti o n ， ， そ 事が明らか とな 無い b に と C4 比較にお い て の もか か わらず C4 ， きな差が 生 差 はp t o st t − 転 写活 性 に 大 き な 羞 が R N A 量 に 10 倍程度 の 大 m る事よ り C4 じて い h と C4 ， r a n S C ri p ti o じて い る と考 えられ た 側 が C 4 由来 − ， n al な コ ン また B 2 − ト ロ W 7 マ ， ． 1 の ー C4 発 現 量 の ル の 段階 で 生 ウスは3 つ の 5 ， つ は ， ， − つ 事が ， 臥2 W 7 マ ウ ス に お け る Slp の 構成的発 現 の 原 因で ある と考 え る事が で き た a w P 稿 を終 え る に 臨 み ， 辞 御 指 導 御校 閲 を賜 ， た 高橋守信教授 W ， ． al p o r t B l a ck ， A fa N ． C ， il y m u11 di s 臥 u f e r o c M ， a tl B t， o n p o u r th N ． e a se B ． r ， B ， こ ． c o m A ． − c ad ． a t c h el o r di o of th I ， ed J A ． d a n ， 及 ． M H C e C4 A of M ． ． D ． dy st u J ． M ． a11 el e s ， R a u m u nis ， E Y C ri g l e ， d ed n c r J ， g in e s yp h J ， of C4 B 186 425 428 ． ． ． ， ， AIs り ． A ， G il e s ． ， pl o ty p a e ni t D ， ． E ． M H C c o n y ot J ． s ． al C ， M ． L ． ．． ， e r， r o x − h y p e r pl ， ． I ． 鹿 A lp ． a ti e n t p M ． Z ， in 21 h y d e s a d r e n al u n r el a t e d S c o， d eh w y − a si a こ a n cet i ， ， ． R ， y J ， I ． ． ， cC a n n a n se n H LA こ ． s u li n M ． C h ri s ti ， lく in e C a r r oll ， ot er R ， d gi o e T ． a nd Y ， F ， ． E ， a pl c o m J di ab ， ， G E ． J ． a1l o e m e nt et es P y 0 N ei11 ， e nd e nt p J ． ， ． ． ty p es D i a b e t ol o i g ． ， ． 鹿 ， a ， ． u Y p o n e n H yd ． M こ ． yl M h a se ． ， D6 m a n pt m a n n a u B a u e r ell s u m ， n e r ， a n 1 9 8 3I く ． t ． ， C ， L ． ． C4 4 ， a n I m G m ． ， ニ ， P G ， g ． ． e r ， Ed ， El N e rl R o o s S t at e ， all o t ， C e v H LA e T ． C4 t en 盈 ． d a n cl a s s IIl o rLd a M ， ， m en t yp es ． Sk ， m f e a nd t ti r A ， 鹿 ． c o m st e r oid − 2ト ． ， A ， d w eh ， et er se n J ． ． G ， L ， n th m o u r th t e ， V Z ． m B ． ， ． a ch el o r D ． ， T ei s b ． ， e r g t ， ． ， u ll e n ， G ， P ． ， ． ， 良 of u r e 184 191 − ， ， n s H ， eiIl e n cl a 164 e M ， 0 N ki a w W il d − L ， B ， ， ， n o m u n o bi ol ， G ro ss e a m ， a n e s， o n I o th ， 87 39 60 く 1 9 8 51 ， Olaise ． ． ． P ， ． P al s d of P − a rd s w ． − ． A ． r a u n C T ． e m e n R ． ， B ， ， pl c o m ． K e n e ti c s u n ol J s， m − B el t ， Alp ， B elt ， K ， ． pl e m i n th e n es g A ， co 2 5 4 7 2 5 52 く19 8 51 ． u m o tt i r of n a s e ， C ． ert r a m E ． M ． a uff， R ， yl r o x ， P al 良d ， ol e c ul a r of t ro x 8I ． a r r o ll ． D el e t i o EM B O J ． Y C ． ニ ． − n ， M R ． 21 h y d C h っ ． pl a P ， 71 W 謝 ． ， ， ， R itt ． e nt ． − 位うを持 らの う ち少な く とも 1 L ． e 2 4 1 62 1 6 5 く1 9 8 31 h これ ， J ． cClu sk e M kin H り th S ． 156 く 1 9 8 3I D 的 な C 4 由 来 の 5 fl a n k i n g 部 位 く遺 伝 子 発 現 調 節 部 て お n a nt P 二 ． e xt en h o R っ bi 及 D ． pl e m e n n − 5I 機能 を持 r ec o m Y ． c o m SL E in ， E こ ． Z il k J 側 が S l p 由来 の S ， g th I ． V ． i th r m ， Sh a r ed 遺伝 子 3 ， ， R ． w d e fi ci e − g A ， ． c o n t r olli n H ． R ， r a n ad o s re ． C4 A ， eS G A a n Th ニ ． e nt m ． P ． Y ， R ． pl e m o ci a n s ell n i c k a s e ． ， e r G St e r Oid っ m e r ald 6I 結果 J ． R ， co ． in t y p 汁 側 が S l p 由来 ， ， つ ． の つ ， ， 遺伝子 を 3 t n a n グ した ン ニ ー ロ ． C 4 に 連関 した遺伝子 の G 4 ナ F l ei C of ， G 1 o rt e r − d et e y P 7 5 5 1 6 5 5 1 6 9 く1 9 7 即 R y rL ， e s， g a ， u 鹿 ． s y st e m s 5 0 4 33− 4 64 く 1 9 8 1J ． ， h ， a ti e n t s 15 2 ． ウス か ら マ u ． く1 9 8 31 ウ ス の 肝臓 か ら核内 R N A マ て約 2 倍量 の C4 R N A べ くr u o n of Fi eld R m − eill US A ． ． P ． 核 内C 4 R N A を定量 比 較 し た ， て 10 倍 転 写活 性 を 測 定 し て C 4 b と C 4 1 ， し て C 4 遺 伝 子 と S l p 遺 伝子 の た を定 量 し べ 有意な 差は認め られ な か ， 生 じた と考え られ る の J S l p を構 成 的 に 発 現 し て い る 発 現 変 異 種 C 3 H ． ， W 7 イ と て も 血 中濃度 や ， 4 2 n u Cl e a r C 41 に 比 に W 7 く臥 2 W り を ツ セ ウ ス と C4 マ 羞で はな か の を検 出 し た 較 した と こ ろ で比 が RN A イ を行い セ o n m − R N A m − C41 に 比 に ， C4 ウ マ M ． − 鋸I C 4 の 高発 現 系 くC 4 l と 低 発 現 系 くC 4 り の ． B ． H L A 1i n k ed l o o n e nt 論 h 献 a c ti v a ti o n o ch e m ， S ci 1 ． K ti c O N w p ． 結 Bi ． 2I 今回 の 結果を強 く支持 して い る と ， ， ． 一 文 結果 は 少な く と も 2 種 の Slp 遺伝 子 が 発 現 し て い の た しま す い ま た御 指 導 を賜 っ た 野 中勝 博 士 御 教 授 な ら び に 免 疫 生物 部 各 位 に 深 く た し ま す ， れら こ ． た 山本 健 一 Slp 遺伝子 を導入 した細胞 の つ つ 瑚 る い ， 結果 C 4 遺伝子 と 2 い い ま ． ウ ス か ら C 4 遺伝 子 を 1 マ に深く感謝 教 示 を頂 ， う ちの の が肝臓 で 発現 して い る と 考え ら れ る S l p 遺伝 子 を 3 の 事よ り い ず れ か の 遺 伝 子 に 対応 す の い 少な く とも Slp ， R N A m 工1 サ イ ト を 持 た な c W 7 も し く は Slp 269 270 9I Sh C O m F o c o ． Ch G M ニ ． N a tl p 189 210 ul O g at 1i mi t e d 1 9 8 5I く a o fo u rt h 1i m e m bi rL S D ， E l eil l e of a n d H all ， ， d a n L e th D ， E ． Il R ． 及 S ei d ． u ri n e m e ad ， S gi re m a n o n ． J ， P ． A ， S t ru ct u r e e nt m c o m m e x ro c R ． e v 87 ， ． ． Pl e c o of m 鳳 W ， a ri s o n p pl e c o m se x ci d s L a M D ， a 11 el e s くC 41 t e n A ， e Yi eo S tr ． T ， e nt e m ． S tr 87 ， a 北 ind R of th a nd e s ． 14 ， 及 ． rm H t th ei r T th e o r se x 2 53 9 ， 1 5ナ R O g at a o s a r o t ei n N ． P ， R ， T 由 o M ニ ． d e n e x p m e n t r e gi o n ニ S is ot y p r e s si o n ， a nd e s 1i e x k a M ， S t ei り d H 2 − r e s si o n N ． a tl e a ti o ． c ad n s ． ， f o C O n t r Oll e d − of A ． 也， M m pli c u it h w n it s ． T ， T ， of s ex ． ， ， r eff l e r， o r ul ti p m t C ． 1i s e x − 及 ． it ed m Slp g e h a sh i S ， ． M ， cl o n e s pl c o m ro c N ． ． S hi ， s N ， A ． A ， a nd e nt a tl u e c if y i n p e m at u u iz m c ad m S 鹿 H ． fo e is ot y p e U S A ． k o n a a h a s hi ， a c h a r a c t e ri z a t i o n of ic f I m m m u n ol 1 8I T a k a ． D N A ． R ev N o n 礼k a h a shi， M a cl o n e s a m y 2ru e n o 也 Tak k ， a M ． こ c o m o r Y ． ， n ol e c ul a r pl e m e n C4 E Y 叫 t D ， M o u se m 8 7 8 1 9 9 く1 9 8 51 E ， a r y a nd ， ， H ， ． 二 ． ， C N ak a y o m pl e t e a m a a a y m pl e t e o m ． o n en p of t 2 60 1 0 93 6 ， − ， a E ， ． Y ， u n u cl e o ti d e of Y ． d d a n 1i mi t e d p se x D ， r o t ei n − 也 ． e ri v e d くS lpl ． ． J ， J ． M ． ． 鹿 R ． a c ti v e R r z ， W ， tt u e r b yl y J ． rib o n u cl ei c rib o n u cl e a s e r a ch H ， H ， D ia ． ， o ch e m d D a A ， E ． ． こ I s o l a ti o n ． a cid Bi ． m R N A ニ ． el g hi g h e r o n C riti c al ， ． fr o m ist ry W ， o l e c ul a r m el e c t r o ， of s o u r ce s 18 ， 5 29 4 ， ． ph o r e si s i re e x a m o z n ey w ei gh u nd er n a ti o n d Bi ． J ． M ． d et t 鹿 ． mi er n a − e n a t u ri n o ch e mi g st r y ， ． 2 3I ro 1 9 7 61 く ， ， k u e s p ti bin N rib o n u cl ei c J M ol ． ． Rh a n n y by ， ． nick B i ol ． D ， hi g h ， od e s， a cid t o r a n sl a ti o n t 1 1 3 2 3 7 2 51 ． ． ， W ． ， A cid s R e s A こ ． ol e c u l a r m u cl ei c e c o m bin a n Biol ． ff ． ei 3 ， ， e n e r al g w D N A t gh 2 3 0 3 2 30 8 − p r e ss W ， H ． a ， gt a n ah a n en o m F ． es L ， F ． hich w t n 皮 H ． e x in 息 ． J ． D C o n D ， t H m 11 a n i s ol a t e d n si n o g gl e ． a rd o w ali a n m B ， ． c hl o r a m r es s p a m − c ells ． ． ， a M c ol o n C ． I a ti ro a ch n T 二 ． H ． ra n s m e s， ． a nd o n p8 9 12 9 IR L − ． B − ， ． e s el s o n e n sit d y R ， r a n s c ri p T ， pp 1984 ． g n u cl ei くe d s 1 ． 鹿 ． hi g h at g offa r a C ti c al p a sh i n c r e e ni n − 1 0 4 4 1 05 1 く1 9 8 21 ， S ， S こ ． − W n s W ． ， a n sf e r a s e 2 ， ， R ， 19 6 1 8 0 1 8 2 く1 9 7 7I ， M ， a vi s b y h y b rid i z a t i o n c e ． t g RN A i H ig g i r a n sl a ti o n M ． yl tr a c et of 8t S ci e ． 鹿 D ． cl o n e s t a n C a r 21l u D ． a rL ， t y M ， G ． Pl ニ ． e n e ， 10 id a s m 6 3 67 − ， ． g 2 8I G Fla v el fr W ， o r m C ell ． 2 7I of n ． sit u R く1 9 8 01 ． o n e ni c ol ． I M m vit r o S t a f f o rd ti o in G a nd Slp t e n pl ol 鹿 ， a ry ot e s r e c o m 二 y in e o x ． B ． D ie ck ， e r a se ris ola 入 gt H a c ti v it N ， d fo e u q ． b eli n g d a ． m a J ． L ニ ． ol y m p B li n et h o f W ． P ， it h D N A W P ， g s p e cifi c o n り cl o n i n n R y R ig b y 鹿 B ． D r o s Y el d ， o m R h u o llt h a F ， G ． ． ， ニ I s ol a ti o n ． m a n c o s m D al e ， H of P gl lib r a ry id 軋 ． obin − ． G − B o er E ， relat ed e n e 13 ， g ． 皮 e n e s 22 7 2 37 − ， く1 9 8 1ナ − ． C C ri 81 Y ． C k a u e n c e s q i w o n s， a S Cr e en ln N ． a nd ， d iti ， ． M ， S hi mi g A a N ， ， ， by n s ， u rt h ， m e m 1 3 6 2 9 8 9− 2 9 9 3 く1 9 8 6ン ， in e r M jo it s k t 2 6ン a k ai o n g th S ci ． e − ． ． ニ ． s e g C a11 Le h o ed M e n e − N B ph ． ， ak a P ai n t f D − N A ． Sh ． r M ， M ， o n a ld 24I − S ci U S A 135 627 631 く 1 9 85I ， o u s e it e d p r o t ei n S ． c o n ． ak a a n cD m D ， ak a C hi a cD m c o n s tit u ti v e e u n ol ． ． Of e pi c h r e s si o n m M ， S ， p 6 82 2 68 2 6 く 1 9 8 41 1 7I 2 0I 2 5J M ic ． o 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nt C O m − h m ， pl e p M ． u n ol 1 4I 1i ru ct u r e ． ． ， A n o n C O m n こ ． S ol e c ul a r t C ol t e ． v ol u ti o n a r y m s S l pン I く r o t ei n o si o r， m T w 乱y m p T a nd d p c o m こ ． co it e d 1 3I I St a n e nt ． e n s こ m p o o ， a ． h e n 2 5 5 4 く1 9 8 61 m a m m J くe d s 1 e r 2 1I H R E ti g pl e c o m in g m ． 1 2I m d S t ro a n ． n W ， US A ． r o t ei n p ． m R ， o u rt ． G ， S ci ． D ． a r c ad f D ， e rg e r ol e c u ri n e A P Ch ， ed − A y − pli n a A ． 1 1I m M H C 1i n k こ ． a rh a m a t i b ili t ， G ol d b ， 1h P ． C ． ． 10I S D ， p m u n c ti o n 1 9 82 tS O n e n p H ist r e ffl e r ． ． ， ． ， n u cl e o tid e a n D ． d d Y ． 及 e ri v ed 2 9I Se q S u e n Ce S e rn a m E ， O n g ． M ． こ D D N A fra g e t e c ti o n m e nt s s e of p s a r at ed p e c ifi c b y g el 補 体 第 4 成 分 産 生 異 常 の 分子 機構 h el e c t r o p S 30I a n DN A P r o c M y a m S ， o n sibl e p c o nt rol e n e s g M ， ． N ， N − K im a k e w e e n ro c a 血 e n l s o n A ， 3 6I R ． こ ． g i n hib it o a ti n rs 7 4 5 4 6 3 5 4 6 7 く1 9 7 71 ． ． ， fo v ect o rs cl o ni n r a y u ra g ． m a diff e A 此 T r e ． c o c ad − g h a a s hi C4 t e n 83 ， Y ． a n ． M ， ， こ ． h yp o r m P r o c N ． F ． th at o n P ． 1 9 8 3I く 3 5I Ch J a y a in G D ， n e N ． B 3即 ． G ， 84 A ． C4 a n d Slp 48 1 6 d SIp tr a nd c ad S ci ． 鹿 M ． d a n a r e r e 80 ， a m ch a rd b t e u r − a rd ， A ， P ． ． J ． M ． Pi ， F r a n chi m y fib ro ， こ C a r r e St e d in ， ． C bl re sp o n s e 31 7 4 4 3 4 4 5 く1 9 8 5 1 − ． J ， e n e tr a st s in g t o b ec g ． ， a ヱy P k o u ， y M ． ro w o st th − t f ， D ， − e g r ad a at a mi ， hig h J ， C ． r a − り a o r s ． N a m rm O n e ニ A h e n RN A m a n c e M ． ol ． e n ． R ， ． of o n R N A m ed c o n s e rv gi r e d A U G M CSF − d a ti eg ra o n ． ed e c o m N ． ， s e pl e q r e s si o n ti g o n al in Ad A ， 晶 ． c o n t r ol e n o vir u s of 12 2 3 5 1 4 8 6 1 4 88 く 1 98 71 ． − ， ， D ， of u e n c e P w eli n o u p en ce ． H ， r a n S C rip o o n a m e nt m ． 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