キラル化合物の逆相分離のポイント

YMC CHIRAL多糖誘導体シリーズ
耐溶剤型カラムを用いた
逆相条件下でのイオン性化合物の分離最適化
～pH値による保持挙動の変化～
(F140718A)
YMC CHIRAL多糖誘導体シリーズ耐溶剤型カラムの特長
¾
YMC CHIRAL多糖誘導体シリーズ耐溶剤型カラムは、一般的なHPLC用カラムに
使用可能な溶媒を適用できます
¾
非水系から水系溶媒まで使用できるため、順相と逆相の両モードでの使用が可能です(*)
¾
分析対象物がヘキサンなどの非水系有機溶媒に溶解しにくい水溶性化合物の場合、
逆相モードを用いることで分離最適化が容易になるケースがあります
¾
本資料では、逆相モード条件下におけるイオン性化合物のpH値による保持挙動の変化と、
分離最適化例について紹介します
(*) 頻繁に順相⇔逆相を切り替えてのご使用はカラムへのダメージが大きくなるため、専用化を推奨いたします
2
逆相条件下でのイオン性化合物の保持挙動
酸性化合物
● 移動相のpH変更に伴う保持挙動の変化
Column
CH 3
pH 2.1
O
OH
*
140618_0001001.D
O
pH 3.1
O
Warfarin (pKa 5.56)
140619_0000001.D
: YMC CHIRAL Cellulose-SB 5 µm
250 X 4.6 mmI.D.
Eluent
: 20 mM phosphate
buffer/acetonitrile
(50/50)
Flow rate
: 1.0 mL/min
Temperature : 25℃
Detection
: UV at 254 nm
Injection
: 2 µL (0.2 mg/mL)
pH 3.5
140704_1000002.D
pH 4.6
pKa付近では
ピーク形状不良が
生じる場合もある
140619_0000003.D
pH 6.0
25
140620_0000002.D
pH 7.0
酸性化合物はpHを低くすることにより
イオン化が抑制されて保持が大きくなり、分離達成
0 140620_0000004.D
0
2
4
6
8
10
12
14 min
3
逆相条件下でのイオン性化合物の保持挙動
塩基性化合物
● 移動相のpH変更に伴う保持挙動の変化
Column
N
*
pH 4.6
Donepezil
¥_002_140701_0000005.D
(pKa 8.62)
pH 6.0
O
O
O
CH3
CH 3
: YMC CHIRAL Cellulose-SB 5 µm
250 X 4.6 mmI.D.
Eluent
: 20 mM phosphate
buffer/acetonitrile
(40/60)
Flow rate
: 1.0 mL/min
Temperature : 25℃
Detection
: UV at 254 nm
Injection
: 2 µL (0.2 mg/mL)
¥_001_140701_0000002.D
pH 7.0
¥_004_140627_0000206.D
pH 8.0
30
¥_003_140627_0000203.D
pH 8.9
塩基性化合物はpHを高くすることにより
0
イオン化が抑制されて保持が大きくなり、分離達成
¥_005_140627_0000006.D
0
2
4
6
8
10
12
min
4
逆相条件下でのイオン性化合物分離最適化のポイント
¾ 移動相
⇒ 分析対象化合物のイオン化を抑制するpH値を選択する
（保持が増大し、分離の可能性up）
¾ カラム
⇒ 耐久性に優れた「YMC CHIRAL 多糖誘導体シリーズ耐溶剤型カラム」が最適
分
Warfarin (pKa 5.56)
離
最
化
例
N
Donepezil (pKa 8.62)
CH 3
O
適
*
OH
O
*
O
mAU
14
Column
Eluent
12
O
O
: YMC CHIRAL Cellulose-SB
: 20 mM phosphoric acid (pH 2.1)/acetonitorile
(50/50)
12
10
10
8
8
6
6
4
4
2
2
0
Column
Eluent
mAU
14
O
CH 3
CH3
: YMC CHIRAL Cellulose-SB
: 20 mM NH4HCO3-DEA (pH 9.0)/acetonitrile
(40/60)
0
F140707A
0
F140618A
2
4
6
8
10
12
14
min
0
2
4
6
8
10
12
14 min
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