Mito-ID® 細胞外 O2 センサーキット 酸素消費を高感度に検出するプローブにより、ミトコンドリア機能を測定するプレートベースのアッセイキットです。 本アッセイにより、迅速かつ簡単に、研究対象の薬剤／化合物の濃度依存毒性効果を測定することができます。薬剤機 序の解明、抗菌性化合物のスクリーニング、細菌量評価、培養条件の最適化等のアプリケーションにお使いいただけます。 特長 ● 発光性酸素感受性プローブにより、リアルタイムのハイスループット酸素消費測定が可能 ● 特殊な装置は不要です。標準的な 96/384 ウェル蛍光プレートリーダーで測定可能 ● 別商品：細胞外 pH センサープローブと併用してミトコンドリア毒性を測定可能 構成内容 推奨サンプル：単離したミトコンドリア、細菌、組織 ● ● 【品番：ENZ-51047】 ● Mito-ID® 細胞外 O2 センサープローブのみ 【品番：ENZ-51045】（High Sensitivity） 【品番：ENZ-51044】 推奨サンプル：細胞 Mito-ID® 細胞外 O2 センサープローブ Mito-ID® Oil ● ● Mito-ID® 細胞外 O2 センサープローブ Mito-ID® HS Oil アッセイ原理 アプリケーション ● ミトコンドリア機能障害の測定（細胞、組織、酵素など） 本アッセイは、O2 により消光する水溶性 Mito-ID® 細胞 ● 化合物スクリーニングと毒性効果 外 O2 センサープローブを利用しています。単離ミトコン ドリアや細胞、組織、酵素などの実験材料が呼吸をすると、 ● IC50 値の決定 周囲の溶液 / 環境の O2 が枯渇するため、プローブのリン ● 微生物代謝の研究 光シグナルが上昇します。ミトコンドリア活性の変化を反 ● 多重測定（例：Mito-ID® pH 細胞外センサープローブ を用いた ETC や解糖流量分析） 映した酸素消費の変化は、時間と共にプローブのシグナル 強度に相関します。 66 at 1.3x105 cells/mL 1 Life time µs 61 56 0.8 51 Oxgen 46 0.6 41 36 26 0.4 Corrected OD 600 31 0.2 Threshold 21 0 16 0 1.05 1.00 0.95 0.90 0.85 0.80 0.75 0.70 0.65 1E-6 O2 分析 O2 分析 1.00 #1 0.95 0.90 0.85 0.80 #2 0.75 0.70 0.65 #3 1E-5 1E-6 1.4×10-4 1.2×10-4 1.2×10-4 #1 1.0×10-4 8.0×10-5 6.0×10-5 #2 4.0×10-5 2.0×10-5 #3 1E-4 1E-5 4 6 8 Time (h) 図 2. 大腸菌の酸素消費量と細胞成長 (OD600) の閾値。 播種濃度が酸素消費量と複製速度に依存することを示している。このアッセイによ り、様々な微生物の嫌気性から嫌気性代謝へのシフトを分析する際に役立つ。 pH 分析 pH 分析 1.4×10-4 1E-4 0.0 Acidification（[H+]/min) 1.10 1.05 Acidification（[H+]/min) 1.10 O2 (normalised to control) O2 (normalised to control) 図 1. 単離したミトコンドリアを用いたミトコンドリア機能のモニタリング A) ETC 阻害剤 ( オリゴマイシン、アンチマイシン、KCN) を添加した結果、酸素 消費量が減少した。 B) KCN 濃度に依存して、ミトコンドリア機能を阻害した。 2 1.0×10-4 #2 #1 8.0×10-5 #1 6.0×10-5 4.0×10-5 0.0 #3 #3 2.0×10-5 1E-6 化合物濃度 化合物濃度 (M) (M) #2 1E-5 1E-6 1E-4 1E-5 図 3. Mito-ID® 細胞外 O2 センサーキット（High Sensitivity）（品番：ENZ-51045）及び Mito-ID® 細胞外 pH センサープローブ（品番：ENZ-51048）の並行使用 3 種類の化合物について濃度レスポンスを評価した。化合物 1 は、酸素消費量（ETC 活性） にも細胞外酸性化（解糖流量）にも影響を与えなかった。化合物 2 は、閾値濃度以下で濃度 依存的に酸素消費量を著しく低下させ、細胞外酸性化を上昇させた。このため、ミトコンド リア毒性は陽性と判断できる。化合物 3 は、濃度依存的に酸素消費と細胞外酸性化の両方を 低下させた。細胞外酸性化に明確な増加が認められなかったため、毒性の主な要因はミトコ ンドリア毒性ではないと判断できる。 1E-4 化合物濃度 化合物濃度 (M) (M) Enzo Life Sciences, Inc. メーカー略号：ENZ 品名 Mito-ID® Mito-ID® Mito-ID® Mito-ID® Mito-ID® Extracellular Extracellular Extercellular Extercellular Extercellular O2 O2 O2 O2 O2 Sensor Sensor Sensor Sensor Sensor kit kit kit (High Sensitivity) kit (High Sensitivity) Probe 品番 ENZ-51044-K100 ENZ-51044-K500 ENZ-51045-K100 ENZ-51045-K500 ENZ-51047 包装 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 vial 希望販売価格 \55,000 \249,000 \55,000 \249,000 \49,000 Mito-ID® 細胞内 O2 センサープローブ プローブの発光寿命測定により、静止細胞及び刺激応答細胞中の平均酸素濃度を、リアルタイムに定量評価します。 96/384 ウェル蛍光プレートリーダーでのハイスループット測定にも利用可能です。 特長 ● Mito-ID® 細胞外 O2 センサーキットを並行 して使用することで、細胞の完全な酸素分析 結果が得られる ● Cyto-ID® 低酸素 / 酸化ストレス検出キット ( 品番：ENZ-51042-K500) との併用によ り、低酸素およびミトコンドリア毒性の評価 が可能 ● 96/384 ウェル蛍光プレートリーダーでの ハイスループット測定が可能 図 1. RyR1 アゴニスト（リアノジン）に対する代謝応答 HCT116 細胞をリアノジンで処理し、プローブ寿命の一時的な上昇を検出した。 Enzo Life Sciences, Inc. メーカー略号：ENZ 品名 Mito-ID® Intercellular O2 Sensor Probe 品番 ENZ-51046 包装 1 vial 希望販売価格 \70,000 Mito-ID® 細胞外 pH センサープローブ 細胞外の酸化評価をする pH 感受性蛍光プローブです。解糖系活性を、ピルビン酸から乳酸への変換速度として測定します。 解糖系の分析により、糖の代謝、解糖抑制の変動、ミトコンドリアの機能障害の検出の研究にご利用いただけます。 特長 ● 標準的な 96/384 ウェル蛍光プレートリー ダーでのハイスループット測定が可能 ● Mito-ID® 細胞外 O2 センサキットとの多 重測定により、ミトコンドリア毒性を直接 測定することが可能 ● 簡単に使用できる高感度プローブ 図 2. HepG2 細胞を L15 培地中で、播種濃度を変化させて培養した。細胞密度 が増加すると、プローブの発光レベルが低下した。ETC 機能の低下に伴い、 ATP の損失を補うために、解糖系レベルが上昇したことが示唆された。 Enzo Life Sciences, Inc. メーカー略号：ENZ 品名 Mito-ID® Extracellular pH Sensor Probe 品番 ENZ-51048 ● 希望販売価格 ･･･「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は２０１4 年 1 2 月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。 ● 使 用 範 囲 ･･･ 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用等としては使用しないよう、十分ご注意下さい。 包装 1 vial 希望販売価格 \49,000 （12157）
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