公立大学法人横浜市立大学における研究費の取扱に関する規程　第14号様式の１（第40条）平成 20 教育研究費　研究成果報告書年度提出日：平成 21 年 6 月 30 日私は、下記研究課題に係る研究費について、以下のとおり研究成果を報告します。また当該研究費の執行については、規程等を遵守し、適正に使用いたしました。所属１　研究者国際総合科学部環境生命コース職准教授氏名（代表者名）仁科　行雄（教室名：　※医学部医学科・医学研究科のみ記入して下さい）２　研究課題名（50字以内）胚性幹細胞、生殖細胞の発生・分化機構の解析５　【研究概要】600～800字程度で記入して下さい。（絵、図、行の挿入も可） 1)減数分裂関連遺伝子群（SCP-1, SCP-3, DMC-1)のプロモーター領域の単離および解析を行った。その結果、これらのプロモーターでは、TATA-boxが無く、CG islandが含まれるが、共通性のある塩基配列は見られなかった。また、転写因子結合サイトを予測した結果、精巣特異的な発現をする因子の結合サイトは見られず、共通性も得られなかった。そこでメチル化解析を行ったところ、SCP-1,3については生殖細胞においてプロモーター領域の全体に渡って、またDMC-1については一部の領域のみが選択的に脱メチル化されていることが示唆された。さらにこれらのプロモーターをSss-1でin vitroにてメチル化したところ転写活性が抑制された。次に生殖細胞でのNotchファミリー遺伝子（1〜4）の発現をRT-PCR 法で調べたところ、Notch3の発現が精原細胞で見られた。そこで抗体を用いて免疫染色を行った結果、未分化精原細胞を含む集団に発現が認められた。リガンドについて解析したところ支持細胞であるセルトリ細胞にjagged 1の発現が見られた。2）EC／ES細胞の細胞分化を制御している転写因子c-junのプロモーター領域において、どの部分がRAやTSAによる細胞分化の可逆・不可逆性に関与しているのかを解析するため、プロモーター領域の欠失変異体を各種作成した。まずはじめにレポーター遺伝子の一過性導入系で解析を行ったが、TSAによる作用のため遺伝子の導入高率に差がみられたため、Neo遺伝子とともに安定導入株の作成を行った。DRE領域（-196〜-36）を導入した細胞株(F9, PCC4)ではともに RA,TSAによる転写活性化がみられ、RAに比べTSAの方が5倍以上の活性化を示した。現在、 CHIP解析でアセチル化に変化が見られている他の領域についても安定導入株を作成している。著者名 T.Nara, R.Sugisaki, K.Suzuki,Y.Nishina 雑誌名投稿中 Analisis of reversible or irreversible changes on the differentiation 1 雑誌論文論文標題 of embryocarcinoma cells. 巻発行年 H　年著者名頁 K. Kumano, M.Fujimagari, T. Watanabe, Y. Nishina 雑誌名投稿中 Identification of the Notch3 expressing cells and its ligand during 2 雑誌論文論文標題 spermatogenesis in mouse testis. 巻発行年 H　年著者名 1 図書書名発行年 T. Nara, D.Kamaei, T.Sato, M.Yamada, Y Nishina 図書出版社投稿準備中 Regulation of gene expression on mouse PAD4 in vivo H 年総頁数著者名 2 頁出版社書名発行年 H 年総頁数７　研究成果による知的財産権の出願・取得状況（行の挿入も可。）知的財産権の名称発明者名権利者名知的財産権の種類、番号出願年月日取得年月日 1 H　年　月　日 H　年　月　日知的財産権の名称発明者名権利者名知的財産権の種類、番号出願年月日取得年月日 2 H　年　月　日 H　年　月　日