Contents コンピテントセル 注目の新製品 Simple miRNA Detection Kit………………………………… 8 DynaMarker ® Colored DIG Marker for Small RNA ………………………………………………………………… 9, 16 分子量マーカー コンピテントセル選択ガイド……………………………………… 7 クローニング・ライブラリー作製用 Giga Competent Cell ( DH5 α )… ……………………… 19 Jet Competent Cell ( DH5 α )… ………………………… 20 Competent Cell DH5 α / JM109… ……………………… 20 21 分子量マーカー選択ガイド………………………………………… 4 Electrocompetent Cell DH5 α / JM109………………… RNA サイズマーカー一覧… ……………………………………… 6 タンパク質発現用 タンパク質サイズマーカー一覧…………………………………… 6 Zip Competent Cell BL21 ( DE3 )……………………… 21 Competent Cell BL21… …………………………………… 22 Electrocompetent Cell BL21 ( DE3 )… ………………… 22 DNA サイズマーカー … ……………………………… 10 未標識 RNA サイズマーカー ® RNA Size Marker DynaMarker … ……………………………… 11 DNA SizeMarker DynaMarker ® RNA サイズマーカー ® RNA Easy Measurement N DynaMarker … ………………… 12 DNA Fragments for RNA High Probe DynaMarker … ……………12 ® ® dsRNA Marker DynaMarker … ………………………………… Small RNA Ⅱ Marker DynaMarker ® … ………………………… プレステイン RNA サイズマーカー Prestain Marker for RNA High DynaMarker ® … …………… ® Prestain Marker for Small RNA Plus DynaMarker … ……… Prestain Marker for Small RNA DynaMarker ® … …………… 13 13 14 ゲルインディケーターキット DNA 染色用 Gel IndicatorTM Kit… ………………………………………… 23 Gel IndicatorTM DX Kit… …………………………………… 24 Gel IndicatorTM DNA Extraction Kit……………………… 25 RNA 染色用 Gel IndicatorTM RNA Staining Solution… ……………… 15 15 クローニング・ライゲーションキット タンパク質サイズマーカー クローニングキット 未標識タンパク質サイズマーカー TA Cloning Kit DynaExpress……………………………………… Protein Eco Marker … ………………………… 16 DynaMarker ® Protein Recombinant Marker DynaMarker … …………… ® プレステインタンパク質サイズマーカー ® Protein Multicolor Ⅲ Marker DynaMarker … ……………… Protein BlueRed Marker DynaMarker ® … …………………… Protein MultiColor, Stable Marker 16 Protein Recombinant MultiColor Marker 17 … ……… 18 …… 27 ライゲーションキット DNA Ligation Kit Ver.2 DynaExpress…………………………… 28 17 DynaMarker ® DynaMarker ® 26 発現ベクター Expression Vector DynaVector… ……………………………… 29 19 分子生物学関連試薬 2 Alkaline Phosphatase from Shewanella sp. SIB1… …… 31 QuickBlue Staining Solution……………………………… 31 RNase-free Water… ………………………………………… 32 Salmon Sperm DNA… ……………………………………… 32 抗 6 × His タグモノクローナル抗体… ……………………… 32 Index 6 × Orange Loading Dye… ………………………… 23, 24, 25 50 bp DNA Ladder DynaMarker … ………………………………… 11 100 bp DNA Ladder, Version 2 DynaMarker ……………………… 11 Gel Indicator DNA Extraction Kit……………………………… 25 Gel Indicator DX Kit… …………………………………………… 24 Gel Indicator Kit…………………………………………………… 23 Alkaline Phosphatase, Shewanella sp. SIB1, Gel Indicator RNA Staining Solution… ……………………… 26 Recombinant <PAP>… ………………………………………… 31 JM109, Competent E.coli Cell…………………………………20 Anti-6-His, Mouse-Mono (H21-5) <Anti-6 × Histidine>… 32 JM109, Electrocompetent E.coli Cell… ……………………… 21 BL21, Competent E.coli Cell… …………………………………22 kbp DNA Ladder BL21(DE3), Competent E.coli Cell… …………………………22 Prestain Marker for RNA BL21(DE3), Electrocompetent E.coli Cell… …………………22 Protein BlueRed DynaMarker … …………………………………… 11 DynaMarker ………………………… 14, 15 DynaMarker ………………………………………… 17 BL21(DE3), Zip Competent E.coli Cell………………………… 21 Protein Eco BL21(DE3) pLysS, Competent E.coli Cell… …………………22 Protein MultiColor, Stable BPB Loading Dye, 6 ×…………………………………………… 11 Protein Multicolor Ⅲ Colored DIG Marker for Small RNA DynaMarker ………………9, 16 DynaMarker … …………………………………………… 16 DynaMarker … ………………………… 18 DynaMarker …………………………………… 17 Protein Recombinant DynaMarker … ……………………………… 16 DH5 α , Competent E.coli Cell… ………………………………20 Protein Recombinant, MultiColor DH5 α , Electrocompetent E.coli Cell………………………… 21 QuickBlue Staining Solution…………………………………… 31 DH5 α , Giga Competent E.coli Cell… ……………………… 19 RNA Easy Measurement N DH5 α , Jet Competent E.coli Cell… …………………………20 DNA DynaMarker … ……………………………………………… 10, 11 DNA Fragments for RNA High Probe DNA Ligation Kit Version.2 DynaMarker ……………… 12 DynaExpress … ………………………28 DNA, Salmon Sperm, Sonicated… …………………………… 32 dsRNA DynaMarker … ………………………………………………… 13 Expression Vector RNA DynaMarker … ……………… 19 DynaMarker …………………………… 12 DynaMarker … …………………………………………………… 11 Simple miRNA Detection Kit…………………………………… 8 Small RNA Ⅱ DynaMarker … ………………………………………… 13 TA PCR Cloning Kit DynaExpress … ………………………………… 27 Water………………………………………………………………… 32 λ Hin d Ⅲ Marker… ……………………………………………… 11 DynaVector ………………………………………30 商品コード索引 商品コード DE110 DE112 DM100 DM112 DM122 DM132 DM152 DM157 DM160 DM170 DM173 DM180 DM185 DM192 DM197 DM210 DM212 DM250 DM253 DM260 DM270 ページ 31 31 11 11 11 11 11 11 11 12 12 13 13 13 13 11 11 15 15 14 9 商品コード DM310 DM410 DM420 DM430 DM510 DM530 DM550 DM580 DM595 DM610 DM625 DM637 DM637L DM640 DM650 DM660 DM660L DM660S DR110 DR115 DR117 ページ 11 11 11 11 23 23, 24, 25 25 24 26 16 17 17 17 16 19 18 18 18 32 32 32 商品コード DR120 DR125 DR127 DS105 DS110 DS115 DS120 DS125 DS125L DS126 DS126L DS127 DS130 DS130L DS210 DS210L DS218 DS220 DS220L DS225 DS225L ページ 32 32 32 28 28 28 27 27 27 27 27 27 27 27 20 20 21 20 20 20 20 商品コード DS225S DS228 DS229G DS229M DS240 DS250 DS255 DS258 DS260 DS500 DS700 DV200 DV210 DV215 DV220 DV230 DV235 F008 F012 F013 ページ 20 21 19 19 22 22 21 22 22 31 8 30 30 30 30 30 30 32 32 32 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 3 分子量マーカー 選択ガイド 多様なラインナップがあり,幅広い分子量をカバーしています。目的に合わせてお選び下さい。 ※各製品の詳細は p.10 〜 19 をご覧下さい。 DNA サイズマーカー(p.10) RNA サイズ λ d Hin Ⅲ RNA Marker (♯DM310) RN (♯ A Hi g DM 160 h ) RN Sm kb (♯ A Lo w DM 152 Ⅱ ) (♯ all R DM N 192 A Ⅱ ) (♯ p La DM dde 430 r ) 10 (♯ 0 bp L DM 420 adde r, ) 50 (♯ bp L DM a 410 dde r ) Sm (♯ all L a DM 100 dder ) ) Hi (♯ gh D DM 122 Pla (♯ smi DM d D 132 ) Lo (♯ w D DM 112 ) Ver .2 分子量マーカー DNA Marker bp bp 7,000 bp 1,000 7,000 6,000 5,000 6,557 5,000 4,000 4,000 4,000 4,361 1 bp 3,000 base 8,000 9,416 5,000 5,000 4,000 3,000 1 1 2,686 3,000 2,000 2,000 2,000 2,000 1,500 1,500 1,500 1,500 1,500 1,000 1,000 1,000 900 800 700 600 1,000 1,000 500 500 700 700 bp 14,000 10,000 8,000 bp 10,000 23,130 2,500 2,500 700 1 550 1 500 550 1 500 400 400 300 300 bp 500 450 400 350 525 1 500 1 300 300 3,000 3,000 2,322 2,027 2,000 base 500 564 400 400 300 300 500 250 200 200 200 200 200 200 150 1 120 1 100 bp 100 100 100 base 100 100 50 50 75 50 *1 reference indicator 4 50 50 40 40 30 30 20 20 20 200 タンパク質サイズマーカー*2(p.16∼) Pro Mu tein Re (♯ ltiCo com DM bina l 650 or nt ) inan t Pro Pr (♯ tein R DM 640 ecom ) b Plu Sm (♯ all R DM N 253 A ) Sm (♯ all R DM N 250 A ) RN (♯ A Hi g DM 160 h ) Protein Protein Recombinant Marker Eco Marker (♯DM610) (♯ otein DM B 625 lueR ) e s Col for ored (♯ Sma DIG M DM l 270 l RNA arke r ) (♯DM180) Protein Marker 分子量マーカー dsRNA Marker Prestain RNA Marker d Pro / M tein M (♯ ultiC ultiC o o DM 637 lor St lor Ⅲ able ) マーカー(p.11∼) kDa 230 base 8,000 4,000 140 2,000 kDa 90 bp 1,000 1,000 500 71 95 kDa 150 kDa 150 100 100 80 80 70 66.2 60 500 kDa 97.4 60 400 300 42 200 200 base 100 base 100 75 75 50 50 40 40 40 30 30 30 30 20 20 20 20 base 50 45 44 40 40 30 30 29 20 20 20.1 15 15 14.4 100 32 32 26 27 17 17 50 10 10 *2 プレステインタンパク質サイズマーカーのロット毎の正確な分子量は製品添付のデータシートをご覧下さい。 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 5 RNA サイズマーカー一覧 マーカーの 種類 一本鎖 RNA 分子量マーカー 分子量サイズ Small RNA 二本鎖 RNA 分子量マーカー 低分子量 RNA 高分子量 RNA base base 分子量マーカー( RNA 用・タンパク質用 ) ─1 00 プレステインタイプ ( #DM253 ) ゲルイメージ ─ 40 ─200 ─100 50 ─ 40 ─ 30 ─ ─ 30 ─ 20 プレステインタイプ ( #DM260 ) ─ 8,000 ─ 5,000 ─ 4,000 base ─ 3,000 8,000 ─ ─ 2,000 ─ 1,500 4,000 ─ ─ 1,000 2,000 ─ ─300 100 ─ 75 ─ ─ 50 base ─500 ─400 base ─ 50 20 ─ 10 〜 1,000 bp ─ 500 1,000 ─ 500 ─ ─ 200 200 ─ ─ 20 bp origin ( well ) ─ 1,000 ─ 500 ─ 400 ─ 300 ─ 200 ─ 100 ─ 50 ─ ─ 30 20 ─ 10 標準タイプ Small RNA Ⅱ ( #DM192 ) RNA Low Ⅱ ( #DM152 ) RNA High ( #DM160 ) dsRNA ( #DM180 ) ローディング バッファー プレミックス タイプ Small RNA Ⅱ Easy Load ( #DM197 ) RNA Low Ⅱ Easy Load ( #DM157 ) ─ dsRNA Easy Load ( #DM185 ) プレステイン タイプ Prestain Marker for Small RNA / Small RNA Plus ( #DM250 / #DM253 ) ─ Prestain Marker for RNA High ( #DM260 ) ─ プレステイン DIG 標識 タイプ Colored DIG Marker for Small RNA ( #DM270 ) ─ ─ ─ 非変性ゲルで 使用可能な タイプ ─ ─ RNA Easy Measurement N ( #DM170 ) ─ タンパク質サイズマーカー一覧 天然タンパク質マーカー Protein Eco ( #DM610 ) 組換え体タンパク質マーカー Protein Recombinant ( #DM640 ) kDa 97.4 ─ 66.2 ─ 45 ─ Phosphorylase - b BSA kDa 150 ─ 100 ─ Ovalbumin 80 ─ 未着色 タイプ 29 ─ 20.1 ─ Trypsin Inhibitor 14.4 ─ Lysozyme 30 ─ 20 ─ 15 ─ 10 ─ Protein Protein Recombinant MultiColor MultiColor Ⅲ( 冷凍タイプ:#DM637 ) ( #DM650 ) MultiColor, Stable( 冷蔵タイプ:#DM660 ) kDa kDa 90 ─ Phosphorylase - b 71 ─ BSA 42 ─ Ovalbumin 32 ─ kDa 230 ─ Myosin 140 ─ 95 ─ β -Galactosidase Phosphorylase-b 150 ─ 100 ─ 80 ─ 60 ─ 70 ─ BSA Carbonic Anhydrase 44 ─ Ovalbumin 26 ─ Trypsin Inhibitor 17 ─ Lysozyme 32 ─ 27 ─ Carbonic Anhydrase Trypsin Inhibitor 20 ─ 17 ─ Lysozyme 15 ─ ※プレステインタンパク質サイズマーカーのロット毎の正確な分子量は製品添付のデータシートをご覧下さい。 6 60 ─ 40 ─ Protein BlueRed ( #DM625 ) プレステイン タイプ Carbonic Anhydrase 40 ─ 30 ─ 用途に合わせてお選びいただけます! コンピテントセル選択ガイド 用途 タンパク質発現用 クローニング・ライブラリー作製用 品名 Competent Cell BL21 商品コード DS240 DS255 DS250 DS258 DS260 DS229G DS225 掲載ページ p.22 p.21 p.22 p.22 p.22 p.19 p.20 E. coli 株 BL21 形質転換効率 ( pBR322 ) ≧ 2 × 107 ≧ 1 × 106 ≧ 2 × 107 > 1 × 109 ≧ 2 × 107 > 1 × 109 > 1 × 108 > 2 × 108 > 2 × 108 > 1 × 109 操作時間 約 80 分 約5分 約 80 分 − 約 80 分 約 80 分 約 10 分 約 80 分 約 80 分 − ヒートショック 必要 不要 必要 − 必要 必要 不要 必要 必要 − 回復培養 必要 不要 必要 − 必要 必要 不要 必要 必要 − DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 DNA と混合 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート エレクトロ ポレーターにセット ヒートショック ヒートショック パルスをかける ヒートショック ヒートショック ヒートショック パルスをかける 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 氷上で インキュベート 回復培地を 加える 回復培地を 加える 回復培地を 加える 回復培地を 加える 回復培地を 加える 培養 培養 培養 培養 培養 プレーティング プレーティング 青白 スクリーニング 誘導発現 BL21( DE3 ) pLysS BL21( DE3 ) エレクトロ 氷上で インキュベート ポレーターにセット プレーティング プレーティング プレーティング − λ ファージ CE6 の感染が 必要 DS220 DS210 DS228 プレーティング DS218 p.21 JM109 回復培地を 加える プレーティング Electrocompetent Cell JM109 / DH5α p.20 DH5α JM109 回復培地を 加える 回復培地を 加える 培養 培養 プレーティング プレーティング ◎( IPTG の添加不要 ) ○ ◎ ○ − lon protease と ompT membrane protease 遺伝子の欠損により 発現タンパク質の分解を防止 IPTG による T7 RNA ポリメラーゼ誘導 − Competent Cell JM109 DH5 α IPTG 添加 その他の 特長 Competent Cell DH5α コンピテントセル 操作手順 Zip Competent Electrocompetent Competent Cell Giga Competent Jet Competent Competent Cell Cell Cell BL21( DE3 ) Cell Cell BL21( DE3 ) BL21( DE3 ) BL21( DE3 ) pLysS DH5α DH5α T7 リゾチーム に よ り, バ ッ ク グ ラ ウ ンド タン パ ク 質 の 発 現レ ベ ル を 低下 − 80℃で 6 か 月間 保 存し て も形 質 転 換 効 率 は ほと ん ど 低下しない。 − 80℃で 12 か月間保存しても形質転換効率はほとんど 低下しない。 DH5αと JM109 のいずれも X-gal を用いた青白スクリーニングが可能だが, DH5αは IPTG を必要とせずに青白スクリーニングが可能 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 7 注目の新製品 Simple miRNA Detection Kit 注目の新製品 RT-PCR により miRNA を簡単・迅速に検出するキットです。 特 長 ●対象の miRNA を RT-PCR により検出します(プライマー ● PCR 産物のサイズから,miRNA かその他の低分子 RNA かの判断を行えます。 はお客様が準備)。 ●piRNA や 3’末端がメチル化された植物 miRNA など Poly(T)タグが付加しにくい低分子 RNA も,独自の ON tag によりバイアス無く検出できます。 Heart M a b c Brain d a b c Spleen d a b c 1 2 d bp bp 100 75 60 50 40 100 30 75 60 50 40 20 30 図 3. マウス piRNA の検出 マウス精巣 total RNA から,マウス piR-1 ( DQ539889, Mus musculus )を検出した。 ® Lane 1: 分子量マーカー ( DNA SmallDynaMarker , #DM100 ) Lane 2: Target mouse piR-1 20 図 1. ヒト各組織( 心臓,脳,脾臓 )の total RNA からの miRNA の検出 本キットで増幅した RT-PCR 産物を 10% ポリアクリルアミドゲルで電 気泳動した。PCR の際に,それぞれ下記に対するプライマーを用いた。 Lane a :hsa-miR-16-5p Lane b:hsa-miR-24-3p Lane c :hsa-miR-30c-5p Lane d:hsa-miR-93-5p ® Lane M:分子量マーカー( DNA SmallDynaMarker , #DM100 ) M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 bp 図 4. 植物 miRNA の検出 100 Arabidopsis thaliana total RNA から,ath- miR173( MIMAT0000206 )を検出した。 ath-miR173 は 3' 末端が 2'-O - メチル化されて いることが知られている。 75 60 50 40 bp 100 30 75 60 50 40 20 ® Lane 1: 分子量マーカー( DNA SmallDynaMarker , #DM100 ) Lane 2: Target ath-miR173 30 20 図 2. 段階希釈した HL-60 total RNA からの miRNA の検出 様々な量の HL-60 細胞由来 total RNA で,本キットと hsa-miR-2233p に対するプライマーを用いて RT-PCR を行い,10% ポリアクリルア ミドゲルで電気泳動した。 Lane: 1 2 3 4 5 6 RNA 量(ng): 50 20 10 5 2 1 Lane: 7 RNA 量(ng): 0.5 8 0.2 9 0.1 10 0.1 11 0.02 12 0 ® Lane M:分子量マーカー( DNA SmallDynaMarker , #DM100 ) キット内容 ◉ Ligation buffer *1 ◉ RNase-free water ◉ Ligase 3’ ◉ Optimum RT buffer *2 ◉ Reverse transcriptase ◉ Ampli buffer ◉ Taq DNA polymerase 操作方法概略 5’ P 1. miRNA にON tagを付加する。 Ligation miRNA OH 3’ ON Tag 5’ *1 ON tag が含まれています。 *2 Universal primer が含まれています。 ※ キットに各 miRNA に特異的なプライマーは含まれていません。 2. 逆転写反応を行う。 Reverse transcription 3. PCRを行う。 RT primer microRNA specific primer Universal reverse primer Amplified product 8 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 kit / 32,000 Simple miRNA Detection Kit BDL DS700 Colored DIG Marker for Small RNA DynaMarker 注目の新製品 ® RNA マーカーの各バンドを青色色素と共に DIG( ジゴキシゲニン )で標識した製品です。 電気泳動およびメンブレンへの転写効率の確認だけでなく,DIG 修飾プローブを用いたノーザンハイブリダイゼーションに おいて分子量マーカーとして使用できます。 ※可視光色素のみで標識したプレステイン RNA マーカーは p.14 を,非標識の RNA マーカーは p.11 をご覧下さい。 特 長 ノーザンハイブリダイゼーション時の分子量の確認について ◉miRNA などの Small Size RNA のノーザンハイブリダ イゼーションに大変有用です。 ◉電気泳動やメンブレンへの転写効率のモニタリングに最 適です(図 2)。 ◉マーカーを構成する着色済み核酸に DIG を導入していま す。アルカリホスファターゼ修飾された抗 DIG 抗体およ び化学発光基質を用いることで検出可能です( 図 3 ) 。 ◉Small RNA の電気泳動用分子量マーカーである Small これまで非 RI 条件におけるノーザンハイブリダイゼーション時の 分子量の確認は,主にマーカーレーンを含むゲル部分を切り離して EtBr で染色したり,メンブレンへ転写後,メチレンブルーなどによ る色素染色 1 をすることによって行われていました。 本製品は DIG 標識してあるため,抗 DIG 抗体を用いて検出が可 能です。また,従来の DynaMarker Prestain Marker for RNA シ リーズ同様,可視光色素修飾しているので,電気泳動中のモニタリ ングおよびメンブレンへの転写効率の確認にも使用できます。 参考文献 1. "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed." ,: Chapter 7.36, Cold Spring Harbor Laboratory Press( 2001 ). RNA Ⅱ DynaMarker ( #DM192:p.13 参照 )との高い一 ® 致率を実現しました。 ◉加熱変性操作なしで,そのままアプライ可能です。 1 2 3 base 100 75 転写 50 40 30 20 ナイロンメンブレン 12.5%変性アクリルアミドゲル 図 1: 12.5%アクリルアミド- 7.5M 尿素変性ゲルを用いた 電気泳動像 図 2: 左 図:12.5%アクリルアミド- 7.5M 尿素変性ゲルを用いた電気泳 動像 Lane 1:本製品( 5 μl ) Lane 2:ヒト胸部組織由来 total RNA(5 μg) Lane 3:MCF-7 細胞( Breast Adenocarcinoma )由来 total RNA( 5 μg ) 右 図:転写後のナイロンメンブレン ハイブリダイゼーション および検出 ナイロンメンブレン 品名 メーカー 商品コード DM270 miR-16 ( 露光時間:10 分 ) 包装 / 価格(¥) 1 kit / 35,000 Colored DIG Marker for Small RNADynaMarker BDL miR-21 青色色素と共に DIG で標識した RNA マーカー。約 25 回分。 図 3:DIG 標識 DNA プローブを用いたノーザンハイブリダイゼー ションによる,total RNA 中からの各種 miRNA の検出 抗体:アルカリホスファターゼ修飾抗 DIG 抗体 基質:CDP-Star® * * CDP-Star® は Life Technologies 社の登録商標です。 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 9 分子量マーカー DNA サイズマーカー DNA Size Marker DynaMarker ® 視認性に優れた DNA サイズマーカーです。 分子量マーカー( DNA 用 ) 特 長 ⃝あらかじめ loading dye に溶解されている Ready-to-use タイプの DNA サイズマーカーで,そのままアプライできます。 ⃝各バンドは正確に濃度調製されており,試料を概算定量できます。 ⃝UV イルミネーター上で見やすいバンドパターンです。 ⃝識別しやすい青色で,扱いやすい 6 × BPB loading dye( 1 ml )が DNADynaMarker 全製品に添付されています。 ® DNA Low D DynaMarker® DNA High D DynaMarker® bp ng / 10 μl ─1,000 20 ─ 700 14 ─ ─ 550 22 500 20 ─ 400 16 ─ 300 18 ─ 200 20 ─ 120 30 ─ 100 30 ─ 50 30 bp ng / 10 μl ─10,000 ─ 7,000 ─ 5,000 ─ 4,000 ─ 3,000 ─ 2,500 ─ 2,000 ─ 1,500 20 20 20 20 20 20 20 20 ─ 1,000 20 ─ 700 19 ─ ─ 525 500 ─ 300 18 21 20 bp ng / 10 μl ─7,000 ─5,000 ─4,000 ─3,000 ─2,686 20 20 20 20 20 ─2,000 20 ─1,500 15 ─1,000 20 ─ 700 14 ─ 550 ─ 500 22 20 ─ 400 16 ─ 300 18 ─ 200 20 3.5 % アガロースゲル , 1 × TAE 0.8 % アガロースゲル , 1 × TAE 1.2 % アガロースゲル , 1 × TAE DNA Small DynaMarker® 50 bp DNA Ladder DynaMarker® 100 bp DNA Ladder, Version 2 DynaMarker® bp ─ 100 ─ 75 ─ 60 ─ 50 ─ 40 ─ 30 ─ 20 bp ─ 500 ─ 450 ─ 400 ─ ─ ─ ─ 350 300 250 200 ─ 150 ─ 100 ─ 50 10 % アクリルアミドゲル,1 × TBE 3.5 % アガロースゲル , 1 × TAE kbp DNA Ladder DynaMarker® λ Hin d Ⅲ Marker kbp bp ─14.0 ─10.0 ─23,130 ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ 8.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.5 2.0 1.5 ─ 1.0 ─ 9,416 ─ 6,557 ─ 4,361 ─ 2,322 ─ 2,027 ─ 0.5 ─ 0.2 0.8 % アガロースゲル , 1 × TAE 10 DNA for Plasmid D DynaMarker® ─ 564 0.8 % アガロースゲル , 1 × TAE bp ─ *well ─ 3,000 ─ 2,000 ─ 1,500 ─ ─ ─ ─ ─ ─ 1,000 900 800 700 600 500 ─ 100 ─ ─ ─ 400 300 200 2 % アガロースゲル , 1 × TAE 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) DM112 1 set / 15,000 DNA High D DynaMarker DM122 1 set / 15,000 BDL DM420 1 set / 13,000 ※本製品はアガロースゲル電気泳動用で , アクリルアミド電気泳動に は適していません。 kbp DNA Ladder DynaMarker DNA for Plasmid D DynaMarker BDL DM132 1 set / 15,000 マーカーサイズ:200 〜 7,000 bp 容量:1 ml( 5 〜 10 μl / lane ) DM430 1 set / 13,000 各バンドの濃淡の比較により , 試料 DNA 量を概算できる。3.0 kb のバンド強度が高くなっている。loading dye 添付。容量:100 μg / 500 μl( 1 〜 2.5 μl / lane ), DNA 断片のサイズ:0.2, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0, 10.0, 14.0 kb λ Hin d Ⅲ Marker ■ その他のマーカー 品名 メーカー 価格(¥) 分子量マーカー( DNA・RNA 用 ) マーカーサイズ:300 〜 10,000 bp 容量:1 ml( 5 〜 10 μl / lane ) BDL 包装 / 100 bp ラダー( 100 〜 1,000 bp までの 100 bp 間隔の DNA 断片 10 種と , 1,500, 2,000, 3,000 bp の DNA 断片の混合物 ) 。 loading dye 添付。容量:60 μg / 500 μl( 0.5 〜 2 μl / lane ) マーカーサイズ:50 〜 1,000 bp 容量:1 ml( 5 〜 10 μl / lane ) BDL 商品コード 100 bp DNA Ladder, Version 2 DynaMarker DNA Low D DynaMarker BDL 品名 メーカー BDL 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 set / 16,000 DM310 1 set / 10,000 包装 / 価格(¥) loading dye 添付。容量:100 μg / ml DNA Small DynaMarker BDL DM100 20,30,40,50,60,75,100 bp の長さの平滑末端を有する二 本鎖 DNA を用いた DNA マーカー。6 × BPS loading dye 添付。 容量:7 μg / 50 μl( 1 μl / lane ) ※本製品は高濃度アガロースゲルを用いた電気泳動で使用可能です が,非変性アクリルアミドゲルを用いた場合より高分解能な電気 泳動が可能。 ■ BPB ローディングダイ 品名 メーカー 商品コード BPB Loading Dye, 6 × BDL DM212 2 × 1 ml / 3,000 BDL DM210 4 × 1 ml / 5,000 50 bp DNA Ladder DynaMarker BDL DM410 1 set / 13,000 50 bp ラダー( 50 〜 500 bp までの 50 bp 間隔の DNA 断片 10 種 の混合物 ) 。 300 bp のバンド強度が高くなっている。 loading dye 添付。 容量:60 μg / 500 μl( 2.5 〜 5 μl / lane ) RNA サイズマーカー RNA Size Marker DynaMarker ® 未標識 RNA サイズマーカー 変性ゲルでの RNA 電気泳動に適したサイズマーカーです。 base base 500 400 500 400 300 base 8,000 5,000 4,000 3,000 300 200 200 100 2,000 1,500 100 1,000 50 RNA Low Ⅱ Easy Load DynaMarker® ( 0.7 μg / 5 μl ) ゲル組成:5 % アクリルアミド 8M 尿素 , 1 × TBE RNA High DynaMarker® ( 0.9 μg / 1 μl ) ゲル組成:1 % ホルムアルデヒド アガロース 品名 メーカー 特 長 ⃝変性ゲル電気泳動用の RNA サイズマーカーです。バンド の濃淡の比較によって試料 RNA の量が概算できます。 商品コード 包装 / 価格(¥) RNA Low Ⅱ DynaMarker BDL 200 20 RNA Low Ⅱ DynaMarker® ( 0.7 μg / 1 μl ) ゲル組成:5 % アクリルアミド 8M 尿素 , 1 × TBE 品名 メーカー 500 50 20 DM152 BDL 50 μg / 25,000 形状:溶液 , 容量:50 μg / 72 μl( 0.7 mg / ml ), RNA 断片のサイズ:20, 50, 100, 200, 300, 400, 500 base 包装 / 価格(¥) DM157 − 80℃ 1 kit / 25,000 RNA loading buffer PA 添付。 形状:溶液 , 容量:25 μg / 125 μl( 0.2 mg / ml ), RNA 断片のサイズ:20, 50, 100, 200, 300, 400, 500 base RNA High DynaMarker BDL − 80℃ 商品コード RNA Low Ⅱ Easy Load DynaMarker DM160 − 80℃ 50 μg / 25,000 形状:溶液 , 容量:50 μg / 56 μl( 0.9 mg / ml ), RNA 断 片 の サ イ ズ:200, 500, 1,000, 1,500, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 8,000 base BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 11 RNA Easy Measurement N DynaMarker ® 非変性ゲルでの RNA 電気泳動に適したローディングバッファーと分子量マーカーのセットです。 分子量マーカー( RNA 用 ) base 8,000 特 長 ⃝添付の RNA loading buffer AG + により,ホルムア ルデヒド変性ゲルだけでなく,1 × TAE や 0.5 × TBE 5,000 ホルムアルデヒド 変性アガロースゲル 非変性 アガロースゲル ⃝R NA High AGN は RNA High 3,000 2,000 1,500 1,000 の非変性ゲルでの電気泳動も容易にできます。 DynaMarker ® 4,000 500 DynaMarker ® 200 ( #DM160 : p.11 参 照 ) と 同 種 類 の,200,500, 1,000,1,500,2,000,3,000,4,000,5,000,8,000 塩基の RNA から構成されています。 ⃝各バンドの RNA 濃度は 0.1 μg / μl に調製されている ため,バンドの濃淡の比較によって試料 RNA の量が概 算できます。 ゲルローディング液の調製方法 ® RNA High AGN DynaMarker ( 0.45 μg / well: 左端)と, ヒト組織全 RNA( 0.4 μg / well )を, RNA loading buffer AG +( ホルムアルデヒ ド添加済み )で調製した後,各アガロースゲル で電気泳動を行った。変性ゲルおよび非変性ゲ ルのいずれでも同様の泳動パターンを示した。 ゲル組成:1% ホルムアル デヒドアガロース ® 左) High AGN DynaMarker ( 0.45 μg ) 右) ヒト全 RNA( 0.4 μg ) 1 . 本製品の RNA loading buffer AG + とホルムアルデ ヒド * を混合し,ホルムアルデヒド添加 RNA loading buffer AG + を作製する。 2 . 作製したホルムアルデヒド添加 RNA loading buffer AG + を RNA High AGN DynaMarker または RNA 試料 ® と混合し,熱処理して,電気泳動に使用する。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 set / 25,000 RNA Easy Measurement N DynaMarker BDL DM170 − 80℃ 形 状: 溶 液, 容 量:25 μg / 28 μl, セ ッ ト 内 容: RNA High AGN DynaMarker( 0.9 mg / ml ), RNA loading buffer AG +( 1 ml ) *ホルムアルデヒドは,本製品には含まれていません。 ●関連製品 DNA Fragments for RNA High Probe DynaMarker ® RNA マーカーハイブリダイゼーション用プローブ作製のためのニ本鎖 DNA です。 base 特 長 ⃝RNA High 8,000 5,000 4,000 3,000 ( #DM160:p.11 参照)および DynaMarker ® RNA High AGN ( RNA Easy Measurement DynaMarker® N DynaMarker ( #DM170:上記参照)に添付)とのハイ ® 2,000 1,500 ブリダイゼーション用プローブを作製するための DNA 1,000 断片です。 500 ⃝ノーザンハイブリダイゼーションの際,RNA High DynaMarker ® と RNA High AGN DynaMarker® 200 のすべての RNA バンドを検 出できます。 ノーザンハイブリダイゼーションの例 ® RNA High DynaMarker( #DM160 )を 1% ホルムアルデヒドアガロースゲルで電気 泳動した後,ナイロンメンブレンにトラ ンスファーした。 アルカリホスファターゼ標識した本製品 をハイブリダイズし,化学発光法により シグナルを検出した。 ⃝ラ ジオアイソトープ末端標識,または非ラジオアイソ トープ標識に適しています。 ⃝リ ン酸化された 5' 突出末端を持つ二本鎖 DNA( 約 170 bp と約 200 bp)から構成されています。 品名 メーカー 商品コード BDL DM173 容量:5 μg / 50 μl 12 包装 / 価格(¥) 5 μg / 15,000 DNA Fragments for RNA High Probe DynaMarker dsRNA Marker DynaMarker ® ニ本鎖 RNA サイズマーカーです。 origin ( well ) origin ( well ) 1,000− 1,000− 500− 400− 300− 200− ⃝s iRNA や miRNA をはじめとする二本鎖 RNA の分析に 使用できる dsRNA サイズマーカーです。非変性ポリア クリルアミドゲル電気泳動用に調製されており,二本鎖 RNA の分子量の確認に適しています。 30− ■ dsRNA DynaMarker 500− 400− 300− 200− 100− 50− 100− 50− 30− 20− 20− 10− 10− ® ⃝10 〜 1,000 bp の二本鎖 RNA 断片から成る RNA マー カーです。 ⃝20 bp のバンドは,マーカー 1 μl あたり 25 ng に調製 されています。 ■ dsRNA Easy Load DynaMarker ® ⃝d sRNA ( #DM180 ) と同サイズの RNA 断片から成る Ready-to-use タイプの RNA マーカーです。 ⃝20 bp のバンドは,マーカー 5 μl あたり 25 ng に調製 されています。 ⃝非変性アクリルアミドゲル用のローディングバッファーが 添付されています。 分子量マーカー( RNA 用 ) 特 長 bp bp Dicer での分解により生じた約 21 bp の二本鎖 RNA がマーカーの位置から 確認できる。 左レーン:dsRNA DynaMaker®( 0.5 μg ) 右レーン:Dicer で 分 解 し た 二 本 鎖 RNA ゲル組成:7.5 %アクリルアミド, 1 × TBE ® dsRNA Easy Load DynaMaker ( 5 μl ) ゲル組成:7.5 %アクリルアミド, 1 × TBE 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) dsRNA DynaMarker BDL DM180 − 80℃ 25 μg / 29,000 非変性アクリルアミドゲル用。形状:溶液,容量:25 μg / 100 μl( 2 μl / lane ) dsRNA Easy Load DynaMarker BDL DM185 − 80℃ 1 kit / 29,000 非変性アクリルアミドゲル用。Loading buffer 添付。形状:溶液,容量:25 μg / 125 μl Small RNA Ⅱ Marker DynaMarker® small RNA サイズマーカーです。 特 長 ⃝miRNA や siRNA をはじめとする small RNA の分析に 最適な RNA サイズマーカーです。各バンドはシャープで 視認性に優れています。 ■ Small RNA Ⅱ base base 100 100 50 50 40 40 30 30 20 20 DynaMarker ® ⃝5 種類の一本鎖 RNA( ssRNA:20,30,40,50,100 ⃝変性ポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳動に適してい ます。 ■ Small RNA Ⅱ Easy Load DynaMarker ® ® 塩基 )で構成されています。 ® ⃝Small RNA Ⅱ( #DM192)と同じサイズの RNA 断片か ら成る Ready-to-use タイプの RNA マーカーです。熱処 理後,すぐにアプライできます。 ⃝変性ポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳動に適してい ます。 ⃝変性ポリアクリルアミドゲル用のローディングバッファー Small RNA Ⅱ DynaMaker Small RNA Ⅱ Easy Load DynaMaker ( 1 μl ) ( 5 μl ) ゲル組成:12.5 %アクリルアミド, ゲル組成:12.5 %アクリルアミド, 7.5 M 尿素,1 × TBE 7.5 M 尿素,1 × TBE 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Small RNA Ⅱ DynaMarker BDL DM192 − 80℃ 30 μl / 25,000 1 kit / 25,000 容量:30 μl( 約 30 回分 ) Small RNA Ⅱ Easy Load DynaMarker BDL DM197 − 80℃ Loading buffer 添付。容量:125 μl( 約 25 回分 ) が添付されています。 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 13 Check! Prestain Marker for RNA DynaMarker® シリーズの特長 これまで電気泳動の終点の確認には,Bromophenol blue( BPB )や Xylene cyanol などの低分子色素を基準とし 分子量マーカー( RNA 用 ) てきました。しかし,これら色素はゲル濃度や泳動条件によって移動度が大きく変化してしまうため,泳動しすぎなどの トラブルの原因となっていました。特に RNA のような貴重な試料の電気泳動において,失敗は避けたいものです。 Prestain Marker DynaMarker シリーズは着色した核酸鎖で構成された,変性ポリアクリルアミドゲル用( #DM250:p.15 参照, ® #DM253:p.15 参照 )および変性アガロースゲル用( #DM260:本ページ参照 )のプレステインマーカーです。低分子色素と は異なり,核酸鎖を骨格としているため,ゲル濃度や泳動条件による見かけ分子量の変化がほとんどありません。また実際の核酸 鎖と同様に,シャープなバンドが得られます。 さらには,メンブレンへの転写も可能ですので,ノーザ ンブロッティング時のブロッティング効率を確認できる ことも最大の特長の一つです。プレステインマーカーを 同時にブロッティングすることにより,メンブレンの上 下左右を間違えることもなくなります( 右図参照 )。 Prestain Marker for RNA DynaMarker ® 電気泳動 上下左右も一目瞭然! 転写後もシャープ! ノーザンブロッティング シリーズの仕様 Small RNA Plus ( #DM253 ) 品名( 商品コード ) RNA High ( #DM260 ) Small RNA ( #DM250 ) バンドのサイズ( base ) 200 〜 8,000 20 〜 50 バンドの色 青,紫 適応ゲル 変性アガロース 変性ポリアクリルアミド 対応した 未着色 RNA マーカー RNA High( #DM160 ) Small RNA Ⅱ( #DM192 ) 用途 高分子 RNA の電気泳動 プレステイン RNA サイズマーカー Colored DIG Marker for Small RNA( #DM270 ) 20 〜 100 青,赤 Small RNA 研究 青 miRNA 前駆体までカバー Small RNA のノーザン ハイブリダイゼーション Prestain Marker for RNA High DynaMarker ® 着色済みの RNA サイズマーカーです。 特 長 base 8,000 ⃝低分子有機色素とは違い,独自の色素結合方法により 核酸鎖へ直接色素を導入しているため,使用ゲル濃度 が変わっても正確な分子量を示します( 右下図参照 ) 。 ⃝電気泳動中にも分離状況を確認できるため,最適な時 間で泳動を停止できます。 ⃝ナイロンメンブレンへの転写も可能で,RNA が転写 されているかどうかを確認することができます。 ⃝青と紫の配色で,視認性に優れています。 ⃝加熱変性操作せずに,そのままアプライできます。 ⃝RNA High DynaMarker ( #DM160 : p.11 参照 )とよく ® マッチします。 品名 メーカー 商品コード 包装 / Prestain Marker for RNA High BDL 約 30 回分 14 DM260 価格(¥) 4,000 2,000 転写後 1,000 500 200 ゲル組成: 0.8% アガロース, 2.2 M ホルムアルデヒド 1 × MOPS buffer base 8,000 4,000 2,000 1,000 500 200 メンブレン base 8,000 4,000 2,000 1,000 500 200 DynaMarker − 80℃ 180 μl / 25,000 1.0% アガロース 1.5% アガロース RNA High DynaMarker® ( #DM160,未着色マーカー ) との泳動比較 それぞれの写真において 左レーン:RNA High DynaMarker® ( EtBr 染色 ) 右レーン:本製品 ゲル濃度が変化しても,未着色 RNA マーカーである RNA High DynaMarker® ( #DM160 )と高い一致率を示すこ とが分かる。 Prestain Marker for Small RNA Plus DynaMarker ® 着色済みの Small RNA サイズマーカーです。 ⃝Prestain Marker for Small RNA( #DM250:下記参照 ) 50 − 40 − 30 − に 100 mer と 75 mer の 2 つのバンドが追加されたセッ トです。miRNA から miRNA 前駆体( pre-miRNA )のサ 分子量マーカー( RNA 用 ) base 100 − 75 − 特 長 転写後 20 − イズをカバーします。 ⃝独自の色素結合方法により RNA マーカーのプレステイン 化を実現しました。電気泳動中にも分離状況を確認できる メンブレン ゲル組成:10% ポリアクリルアミド , 7.5 M 尿素 / 1 × TBE ため,最適な時間で泳動を停止できます。 ⃝ナイロンメンブレンへの転写も可能で,RNA が転写され ているかどうかを確認することができます。 未着色の RNA 分子量マーカーとの 移動度比較 ⃝青と赤の配色で,視認性に優れています。 ⃝加熱変性操作せずに,そのままアプライできます。 ⃝ポリアクリルアミドゲル濃度 10 〜 15% において,Small RNA 電気泳動用分子量マーカーである,Small RNA Ⅱ ( #DM192:p.13 参照 )と 95% 以上の一致率を実現しまし た。 品名 メーカー BPB DynaMarker® 10% ゲル 15% ゲル 左図のように,着色済み核酸バン ドは電気泳動において,未着色の RNA マーカーと近い挙動をするこ とがわかる。BPB はゲル濃度変化 で移動度が大きく変化している。 ® 左レーン:Small RNA Ⅱ DynaMarker ( #DM192 )+75 mer RNA 添加 ® 右レーン:Prestain Marker for Small RNA Plus DynaMarker 商品コード 包装 / 価格(¥) Prestain Marker for Small RNA Plus DynaMarker BDL DM253 150 μl / 25,000 約 30 回分 Prestain Marker for Small RNA DynaMarker ® 着色済みの Small RNA サイズマーカーです。 特 長 base ⃝独自の色素結合法により RNA マーカーのプレステイン化 を実現しました。電気泳動中にも分離状況を確認できるた 50 40 30 転写後 20 め,最適な時間で泳動を停止できます。 ⃝ナイロンメンブレンへの転写も可能で,RNA が転写され ているかどうかを確認することができます。 ⃝青と赤の配色で,視認性に優れています。 メンブレン ゲル組成: 12.5% ポリアクリルアミド, 7.5 M 尿素,1 × TBE ⃝加熱変性操作せずに,そのままアプライできます。 ⃝天 然 の RNA で 構 成 さ れ る Small RNA Ⅱ DynaMarker ( #DM192:p.13 参照 )とよくマッチします。 ® 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Prestain Marker for Small RNA DynaMarker BDL DM250 150 μl / 20,000 約 30 回分 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 15 Colored DIG Marker for Small RNA DynaMarker ® 分子量マーカー( タンパク質用 ) base 100 75 RNA 分子量マーカーの各バンドを青色色素と共に ジゴキシゲニン(DIG)で標識した製品です。 特 長 電気泳動中は ●電気泳動やメンブレンへの転写効率のモニタリン 特 長 グに最適です。 青色のバンドを 目視でモニタリング ●加熱変性操作なしで,そのままアプライ可能です。 可能! 転写後は, アルカリホスファターゼ 50 40 30 修飾された抗 DIG 抗体 および化学発光基質を 用いることで検出可能! 20 ※ 製品の詳細は,p.9 をご覧下さい。 タンパク質サイズマーカー 未標識タンパク質サイズマーカー Protein Eco Marker DynaMarker ® kDa 特 長 ⃝マーカーに添付の Protein loading dye を混合して使用するタイプです( 約 120 回分 )。 97.4 ─ 66.2 ─ Phosphorylase - b BSA 45 ─ Ovalbumin 29 ─ Carbonic Anhydrase ⃝添付の Protein loading dye により,E. coli などの細胞を溶菌でき,SDS-PAGE 用細胞ライセートが簡便に得られます。得られた細胞ライセートはそのままゲルに アプライできます。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 kit / 14,000 Protein Eco DynaMarker BDL DM610 ミニゲル約 120 レーン分。 Protein loading dye( 1 ml )添付。容量:300 μl 20.1 ─ Trypsin Inhibitor 14.4 ─ Lysozyme Protein Eco DynaMarker® ( 2.5 μl ) ゲル組成:12 % ポリアクリルアミドゲル Protein Recombinant Marker DynaMarker® 組換え体タンパク質サイズマーカーです。 kDa 150 特 長 ⃝未着色の組換え体タンパク質分子量マーカーです。糖鎖な 100 どの修飾がない組換え体タンパク質であるため,シャープ 80 かつ正確な分子量を示します。 ⃝20 kDa と 80 kDa のバンドを濃くしてあり,識別が容易 となっています。 20 15 10 商品コード 包装 / 価格(¥) Protein Recombinant DynaMarker BDL DM640 ミニゲル約 100 レーン分 16 40 30 ⃝Ready-to-use でそのままアプライできます。 品名 メーカー 60 500 μl / 14,000 ゲル組成: 5 〜 20 % アクリルアミド グラジエントゲル 本製品 A社 B社 本製品と他社類似製品を 5 〜 20 % ポ リアクリルアミドグラジエントゲルを 用いて泳動比較した。本製品は,バッ クグラウンドも低く,視認性に優れて いることが分かる。 プレステインタンパク質サイズマーカー Protein MultiColor Ⅲ Marker DynaMarker ® プレステインタンパク質サイズマーカーです。 70 ─ BSA 44 ─ Ovalbumin 32 ─ Carbonic Anhydrase 27 ─ Trypsin Inhibitor 17 ─ Lysozyme Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker ゲル組成 : 5 〜 20 % ポリアクリルアミド グラジエントゲル 未染色 分子量マーカー( タンパク質用 ) Phosphorylase-b C社 β -Galactosidase 95 ─ Multi Color Ⅲ B社 140 ─ A社 Myosin C社 230 ─ B社 A社 Multi Color Ⅲ kDa CBB 染色後 12.5% アクリルアミドゲルでの電気泳動像の比較 ® ® 特 長 ⃝着色済みのタンパク質分子量マーカーです。あらかじめサ ンプルバッファーに溶解してあり,希釈や変性処理をせず に,そのままアプライできます。タンパク質のエレクトロ Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker および他社の多色着色型天然 タンパク質プレステインマーカーを電気泳動した。本製品は十分 な分子量範囲をカバーしており,シャープで強い色調のバンドを 示す。高い精製度をもつタンパク質を高密度に着色しているので, CBB 染色後も均質かつクリアーなバンドが得られる。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker BDL DM637 BDL DM637L Large 2 × 300 μl / 16,000 10 × 300 μl / 69,800 5 色で着色済み。ミニゲル約 60 レーン分( 300 μl あたり) ブロッティングや電気泳動のモニタリングに適しています。 ■ Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker® あらかじめ 5 色で着色してあり,視認性に優れています。 また,すべての色素でシャープなバンドを示します。 ※ ロット毎の正確な分子量は,製品添付のデータシートをご覧下さい。 Protein BlueRed Marker DynaMarker ® kDa 特 長 ⃝着色済みのタンパク質分子量マーカーです。あらかじめサ ンプルバッファーに溶解してあり,希釈や変性処理をせず に,そのままアプライできます。タンパク質のエレクトロ ブロッティングや電気泳動のモニタリングに適しています。 ■ Protein BlueRed DynaMarker® 90 ─ Phosphorylase - b 71 ─ BSA 42 ─ Ovalbumin 32 ─ Carbonic Anhydrase 26 ─ Trypsin Inhibitor 17 ─ Lysozyme ® あらかじめ 2 色で着色してあり,視認性に優れています。 Protein BlueRed DynaMarker ゲル組成 : 5 〜 20 % ポリアクリルアミド グラジエントゲル また,すべての色素でシャープなバンドを示します。 ※ ロット毎の正確な分子量は,製品添付のデータシートをご覧下さい。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Protein BlueRed DynaMarker BDL DM625 2 × 300 μl / 15,000 2 色で着色済み。ミニゲル約 120 レーン分 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 17 Protein MultiColor, Stable Marker DynaMarker ® 4℃で長期保存可能な,そのまま使えるプレステインタンパク質サイズマーカーです。 kDa 分子量マーカー( タンパク質用 ) 特 長 230 ─ Myosin 140 ─ β -Galactosidase ⃝従来のタンパク質分子量マーカーの多くは凍結保存の必要 95 ─ Phosphorylase-b がありましたが,本製品は 4 ℃ で長期間安定なため,凍結・ 70 ─ BSA 44 ─ Ovalbumin 32 ─ Carbonic Anhydrase 27 ─ Trypsin Inhibitor 17 ─ Lysozyme ⃝天然タンパク質由来の着色済みタンパク質分子量マーカー で,独自のタンパク質着色技術により,高い安定性を実現 しました。 融解の操作は不要で,冷蔵庫で保存できます。 ⃝4℃ で均一な溶液です。あらかじめサンプルバッファーに 溶解してあり Ready-to-use のため,そのままアプライ できます。 ⃝すべてのバンドでシャープかつ強い色調を示します。 ⃝Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker®( #DM637 : p.17 参 照 )と同じバンドパターン( 約 17 〜 230 kDa )です。 ⃝電気泳動やエレクトロブロッティングのモニターに適して います。 ゲル組成:5 〜 20% ポリアクリルアミドグラジエントゲル ⃝300 μl あたりミニゲル約 60 レーン分が含まれていま す( 5 μl / レーン )。 ※ロット毎の正確な分子量は製品添付のデータシートをご覧下さい。 従来品 0 日後 21 日後 本製品 0 日後 21 日後 Point! ポリアクリルアミドゲル中のタンパク質の染色には, 短 時 間 か つ 高 感 度 に CBB 染 色 で き る,QuickBlue Staining Solution( p.31 )がお勧めです! 着色 BSA 37℃で 3 週間インキュベート 着色法の違いによるタンパク質安定性の比較 従来品( Protein MultiColor Ⅲ DynaMarker® )および本製品の製造法で着 色したタンパク質( BSA )の 4 ℃ での安定性を確認するために,過酷条 件として,37 ℃ で 3 週間インキュベートし,SDS-PAGE のバンドの状 態を確認した。 本製品の製造法で着色した BSA は,バンドの位置および形状が従来品よ りも保たれており,安定性が高いことが分かる。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Protein MultiColor, Stable DynaMarker BDL DM660S 300 μl / 12,000 BDL DM660 600 μl / 18,000 BDL DM660L 5 × 600 μl / 78,500 5 色で着色済み。ミニゲル約 60 レーン分( 300 μl あたり ) 18 Protein Recombinant MultiColor Marker DynaMarker ® プレステイン組換え体タンパク質サイズマーカーです。 す。 150 100 Un sta in Pr es tai n ⃝5 色に着色済みの組換え体タンパク質分子量マーカーで Un sta in Pr es tai n kDa 分子量マーカー( タンパク質用 ) 特 長 80 ⃝糖 鎖などの修飾がない組換え体タンパク質であるため, シャープかつ正確な分子量を示します。 ⃝あらかじめ 5 色で着色してあり,視認性に優れています。 また,すべての色素でシャープなバンドを示します。 40 30 コンピテントセル(クローニング・ライブラリー作製用) ⃝Ready-to-use でそのままアプライできます。 60 20 15 品名 メーカー 本製品 商品コード 包装 / 価格(¥) Protein Recombinant, MultiColor DynaMarker BDL DM650 600 μl / 17,000 5 〜 20 % アクリルアミドグ 本製品と他社類似製品を 12.5 % ポリ アクリルアミドゲルを用いて泳動比較 した。本製品は同一分子量から成る未 着色の分子量マーカーとの整合性が高 いことが分かる。 ラジエントゲル ミニゲル約 60 レーン分 コンピテントセル クローニング・ライブラリー作製用 他社 ゲル組成: Giga Competent Cell( DH5α ) クローニング・ライブラリー作製用 9 ギガ( 10 )レベルの形質転換効率を有するコンピテントセルです。 特 長 ⃝形質転換効率:> 1 × 10⁹ cfu / μg DNA( pBR322 ) ⃝クローニング,ライブラリー作製に適しています。 ⃝lac Z が含まれるプラスミドベクターを用いた場合,青白 スクリーニングが可能です。 ⃝- 80℃で 6 か月間保存しても,形質転換効率はほとんど 低下しません。 形質転換効率(×108 cfu) 30 包装 / 価格(¥) DH5α, Giga Competent E. coli Cell 質転換効率 ×109! 25 を実現 20 15 10 5 0 品名 メーカー 商品コード 形 A B C Giga 他社製品との比較 BDL DS229M − 80℃ 5 × 100 μl / 18,000 BDL DS229G − 80℃ 10 × 100 μl / 32,000 本製品および各社コンピテントセルの形質転換効率,cfu /( μg / 100 μl of cells )を,プラスミド pBR322 を用い,各 2 回測定した結果を示す。 A は A 社 DH5 αコンピテントセル,B は B 社 DH5α コンピテントセル, C は C 社高効率 DH5 α コンピテントセル,Giga は本製品を示す。 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 19 Jet Competent Cell( DH5α ) クローニング・ライブラリー作製用 ヒートショック不要で迅速,高効率な衝撃のコンピテントセルです。 特 長 操作方法概略 ⃝形質転換効率:> 1 × 10⁸ cfu / μg( pBR322 ) ⃝ヒートショックとプレーティング前の培養操作が不要で, 10 分で形質転換! ヒートショック不要! 培養不要! 約 10 分で形質転換操作が完了します。 プラスミド DNA ⃝− 80 ℃ で 12 か月間保存しても,形質転換効率はほとん ど低下しません。 コンピテントセル(クローニング・ライブラリー作製用) 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) DH5α, Jet Competent E. coli Cell BDL DS225S − 80℃ Mini 2 × 100 μl / 5,000 BDL DS225 − 80℃ 10 × 100 μl / 18,000 BDL DS225L − 80℃ Large 50 × 100 μl / 72,000 セルを氷上で解凍し, DNA を加え,5 分間 インキュベートする。 2. 回復培地を入れた新 しい 1.5 ml チュー ブにコンピテントセ ルを入れる。 Competent Cell DH5α / JM109 3. 室 温で 5 分間イン キュベートしプレー ティングする。 クローニング・ライブラリー作製用 高い形質転換効率を有するコンピテントセルです。 特 長 ⃝形質転換効率:> 2 × 10⁸ cfu / μg( pBR322 ) ⃝SOC medium を添付しています。 ⃝− 80 ℃ で 12 か月間保存しても,形質転換効率はほとん ど低下しません。 ⃝青白スクリーニングが可能です( lac Z 遺伝子を持つプラ スミドの場合 )。 20 1. 凍 結したコンピテント 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) DH5α, Competent E. coli Cell BDL DS220 − 80℃ 10 × 100 μl / 18,000 BDL DS220L − 80℃ Large 50 × 100 μl / 72,000 JM109, Competent E. coli Cell BDL DS210 − 80℃ 10 × 100 μl / 18,000 BDL DS210L − 80℃ Large 50 × 100 μl / 72,000 Electrocompetent Cell DH5α / JM109 クローニング・ライブラリー作製用 エレクトロポレーション用のコンピテントセルです。 特 長 操作方法概略 ⃝形質転換効率:> 1 × 10⁹ cfu / μg( pBR322 )* ⃝SOC medium を添付しています。 る。 ⃝lac Z 遺伝子が含まれるプラスミドベクターを用いた場合, 2 . 本製品( 50 μl )を氷上で溶かし DNA を加える。 3 . エレクトロポレーターにセットし,パルスをかける。 青白スクリーニングが可能です。 4 . 直ちに SOC medium( 0.95 ml )を加え,37 ℃ で 1 *Cell 50 μl あたりの形質転換効率が > 1 × 10⁹ cfu / μg 時間培養する。 ※エレクトロポレーターが必要です。 5 . 寒天プレートに植菌し,37 ℃ で一晩培養する。 商品コード 包装 / コンピテントセル 品名 メーカー 1 . 冷やしたエレクトロポレーション用キュベットを用意す 価格(¥) DH5α , Electrocompetent E. coli Cell BDL DS228 − 80℃ 5 × 50 μl / 12,000 5 × 50 μl / 12,000 SOC Medium( 5 × 1 ml )付き。 JM109, Electrocompetent E. coli Cell BDL DS218 − 80℃ SOC Medium( 5 × 1 ml )付き。 タンパク質発現用 Zip Competent Cell BL21( DE3 ) タンパク質発現用 ヒートショック不要,約 5 分で形質転換完了する発現用コンピテントセルです。 特 長 操作方法概略 プラスミド DNA ⃝プラスミド DNA を加えた後,ヒートショックおよびその チューブからコンピテ ントセルをプレーティ ングする。 後の培養をせずに,そのままプレーティングできます。 ⃝約 5 分で形質転換操作を終了でき , 操作時間の大幅な短縮 が可能です。 凍結したコンピテントセルを 氷上で解凍し,プラスミド DNA を加え,5 分間インキュ ベートする。 ⃝形質転換効率:≧ 1 × 10⁶ cfu / μg( pBR322 ) 1 BL21( DE3 )株の 発現機構 品名 メーカー 商品コード 包装 / 2 3 4 5 6 約 5 分で 形質転換操作 が完了 7 8 ➡ 本製品を 90 kDa のタンパク質発現 遺伝子を組み込んだプラスミドで形 質転換した。得られたコロニーから 7 クローンを培養し発現実験を行った。 レーン 1:分子量マーカー レーン 2 〜 8:クローン 1 〜 7 価格(¥) BL21( DE3 ), Zip Competent E. coli Cell BDL DS255 カルタヘナ − 80℃ 10 × 100 μl / 20,000 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 21 Competent Cell BL21 タンパク質発現用 高い形質転換効率を有する発現用コンピテントセルです。 ■ Competent Cell BL21 特 長 BL21( DE3 )株および BL21( DE3 )pLysS 株の親株と ⃝lon protease と ompT membrane protease 遺伝子 なる E. coli 株です。 を欠損しており,発現タンパク質がこれらのプロテアーゼ ■ Competent Cell BL21( DE3 ) で分解されるのを防ぐことができます。 ⃝形質転換効率:≧ 2 × 10⁷ cfu / μg( pBR322 ) BL21 株のゲノム DNA に λ DE3 遺伝子が組み込まれた E. coli 株です。λ DE3 遺伝子上には lac UV5 プロモーターの 制御下に T7 RNA ポリメラーゼ遺伝子が配置されています。 コンピテントセル(タンパク質発現用) BL21( DE3 )pLysS 株の 発現機構 ■ Competent Cell BL 21( DE3 )pLysS BL 21( DE3 )株に T7 リゾチーム遺伝子を持つプラスミ ド pLysS を導入した T7 発現系の宿主 E. coli です。T7 リ ゾチームは T7 ポリメラーゼに結合して転写を抑制し,非誘 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) BL21, Competent E. coli Cell BDL DS240 10 ×1 ml SOC medium − 80℃ 10 × 100 μl / 導時にバックグラウンドとなる発現レベルを低下させます。 毒性のあるタンパク質の発現に有用です。 20,000 BL21( DE3 ), Competent E. coli Cell カルタヘナ − 80℃ 10 × 100 μl / BDL DS250 10 ×1 ml SOC medium 20,000 BL21( DE3 )pLysS, Competent E. coli Cell カルタヘナ − 80℃ 10 × 100 μl / BDL DS260 10 ×1 ml SOC medium 20,000 Electrocompetent Cell BL21 ( DE3 ) タンパク質発現用 エレクトロポレーション用の発現用コンピテントセルです。 特 長 操作方法概略 ⃝T7 プロモーターによる強力なタンパク質の発現が可能で す( T7 プロモーターを持つプラスミドベクターの場合 ) 。 1 . 冷やしたエレクトロポレーション用キュベットを用意す る。 ⃝高効率形質転換 > 1 × 10⁹ cfu / μg( pBR322 )* 2 . 本製品( 50 μl )を氷上で溶かし DNA を加える。 *Cell 50 μl あたりの形質転換効率が > 1 × 10⁹ cfu / μg 3 . エレクトロポレーターにセットし,パルスをかける。 4 . 直ちに SOC medium( 0.95 ml )を加え,37 ℃ で 1 ※エレクトロポレーターが必要です。 時間培養する。 5 . 寒天プレートに植菌し,37 ℃ で一晩培養する。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) BL21( DE3 ), Electrocompetent E. coli Cell BDL DS258 カルタヘナ − 80℃ 5 × 50 μl / SOC Medium( 5 × 1 ml )付き。 22 15,000 Gel Indicator™ Kit ゲルインディケーターキット DNA 染色用 アガロースゲルからの DNA 切り出し補助キットです。 特 長 操作方法概略 ⃝電気泳動後のアガロースゲルから可視光条件下で DNA 断 ■ Protocol Ⅰ:迅速法( 検出感度:> 500 ng ) 1. アガロースゲル作製時に 0.1% 濃度になるように Gel 片を切り出せる便利なキットです。 ⃝エチジウムブロミドや紫外線を用いないため,損傷の少な い DNA 断片を切り出すことができ,プラスミドベクター へのクローニング時に高い形質転換効率が得られます。 ⃝UV トランスイルミネーター,暗室での操作は不要です。 ⃝迅速に検出できる方法( > 500 ng ) ( Protocol Ⅰ )と, DNA をより高感度( > 50 ng )に検出できる方法 ( ProtocolⅡ ) の 2 種類のプロトコルが用意されています。 ⃝キットに含まれる 6 × Orange loading dye により,試 indicator solution を添加し,ゲルを着色する。 2. 分離する DNA 試料を 6 × Orange loading dye と混 合し,1. のゲルにアプライする。 3. 3-Colors indicator を同じゲルの別のレーンにアプライ する。 4. 電気泳動し,試料を分離する。分離されたバンドは可視 光条件下で青紫色で判別でき,容易に切り出すことがで きる。 料のゲルへのアプライがしやすく,また,色調が異なるた め DNA バンドと容易に識別できます( Protocol Ⅰの場 ■ Protocol Ⅱ:高感度法( 検出感度:> 50 ng ) 合 )。 1. 通常の方法で,アガロースゲルを作製する。 Ⅰの場合 )。 2. 分離する DNA 試料を 6 × Orange loading dye と混 ゲルインディケーターキット( ⃝電気泳動中にも DNA バンドを確認できます( Protocol 合し,1. のゲルにアプライする。 ⃝市 販されているキットを使用して,切り出したゲルから 3. 電気泳動後のゲルを 0.1% Gel indicator solution で, 2 時間以上振とうしながら染色する。 DNA を精製できます。 4. DNA が青紫色に染色され,判別できるようになったら切 り出す。 3 - Colors Indicator ( 10 μl ) 1,000 DNA 試料( > 500 ng )10 μl 6 X Orange loading dye 2 μl D N A 800 染色用) 形質転換効率( コロニー数 ) 1,200 600 DNA 断片 1000 500 200 ( ng / lane ) 400 100 50 30 20 10 200 0 0 3 5 紫外線照射時間( 分 ) 10 UV 照射による形質転換効率の低下 制限酵素処理で得られた約 500 bp の DNA を本製品または,エチジ ウムブロミド染色と紫外線照射によりアガロースゲルから切り出した ( 図で 0 分が Gel Indicator による )。紫外線照射は,切り出したゲル 片を時々 UV イルミネーター上で反転しながら,一定時間行った( 図で 3, 5, 10 分 ) 。DNA は,切り出したゲル片からスピンカラムキットによ り精製し,プラスミドベクターへライゲーションした後 E. coli を形質 転換した。縦軸に,本実験で得られたプレート上の白色コロニーの数を 示す。Gel Indicator により切り出した DNA を用いたものが高い形質 転換効率を示している。 品名 メーカー Protocol Ⅰ による アガロースゲル電気泳動像 Protocol Ⅱ による アガロースゲル染色像 キット内容 ⃝Gel indicator solution ⃝3-Colors indicator 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 set / 12,000 ⃝6 × Orange loading dye Gel Indicator Kit BDL DM510 Protocol Ⅰ で使用した場合,ゲル溶液 3 L 分( ミニゲル約 200 枚 ) ※キットに含まれる試薬の取り扱いや廃棄は,細胞染色用色素の 処理方法に準じた方法で行って下さい。 6 × Orange Loading Dye BDL DM530 1 ml / 3,500 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 23 Gel Indicator™ DX Kit Gel Indicator Kit の DNA 検出感度を増強したキットです。 特 長 操作方法概略 ⃝迅速に操作を行える方法( Protocol Ⅰ )と,DNA をよ り高感度( > 20 ng )に検出できる方法( Protocol Ⅱ ) の 2 種類のプロトコルが用意されています。 ⃝エチジウムブロミドや紫外線を用いないため,損傷の少な い DNA 断片を切り出すことができ,プラスミドベクター へのクローニング時に高い形質転換効率が得られます。 ⃝UV トランスイルミネーター,暗室での操作は不要です。 ■ Protocol Ⅰ:迅速法( 検出感度:> 500 ng ) 1. アガロースゲル作製時に Gel indicator solution DX を 添加し,ゲルを着色する。 2. 分離する DNA 試料を 6 × Orange loading dye と混 合し,1. のゲルにアプライする。 3. Four-colors indicator を同じゲルの末端のレーンにア プライする。 ⃝キットに含まれる 6 × Orange loading dye により,試 4. 電気泳動し,試料を分離する。分離されたバンドは可視 料のゲルへのアプライがしやすく,また,色調が異なるた 光条件下で青紫色で判別でき,容易に切り出すことがで め DNA バンドと容易に識別できます。 きる。 ⃝電気泳動中にも DNA バンドを確認できます( Protocol ■ Protocol Ⅱ:高感度法( 検出感度:> 20 ng ) Ⅰの場合 )。 ⃝高感度プロトコル( Protocol Ⅱ )の場合,従来の 2 倍 ゲルインディケーターキット( の感度( > 20 ng )で DNA を検出できます。 ⃝市 販されているキットを使用して,切り出したゲルから 1. Gel indicator solution DX を添加せずに,アガロース ゲルを作製する。 2. 分離する DNA 試料を 6 × Orange loading dye と混 合し,1. のゲルにアプライする。 DNA を精製できます。 3. 電気泳動後のゲルを 0.2 % GI coloring solution で,2 1,000 500 200 100 50 30 20 10 DNA 断片 ( ng / lane ) 時間以上振とうしながら染色する。 4. DNA が青紫色に染色され,判別できるようになったら切 り出す。 ※ Gel indicator solution DX を添加して作製したアガロースゲルで も Protocol Ⅱ を行えます。 D N A 染色用) Gel Indicator™ DX Kit( Protocol Ⅱ )によるアガロース染色像 Gel Indicator solution DX を添加し て作製した 0.8 % アガロースゲルで, 図に示した量の DNA 断片を電気泳動 し,GI coloring solution で染色した。 ⃝Gel indicator solution DX 形質転換効率( コロニー数 ) 2,500 ⃝GI coloring solution 2,000 ⃝6 × Orange loading dye ⃝Four-colors indicator 1,500 1,000 ※キットに含まれる試薬の取り扱いや廃棄は,細胞染色用色素の 処理方法に準じた方法で行って下さい。 500 0 Gel Indicator™ DX 紫外線照射 ( 3 分間 ) Gel Indicator™ DX Kit を使用した高効率クローニング 2 kb の DNA 断片を Gel Indicator™ DX Kit を使用してアガロースゲ ル電気泳動し, DNA を切り出し精製( 左 ),または通常の方法でアガロー スゲル電気泳動し,エチジウムブロミドで染色したゲルを 3 分間紫外線 照射した後に,DNA を切り出し精製( 右 )した。DNA の量をそろえ, ベクターにライゲーションし,形質転換した。縦軸は形質転換体のコロ ニー数を示す。 24 キット内容 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 set / 18,000 1 ml / 3,500 Gel Indicator DX Kit BDL DM580 6 × Orange Loading Dye BDL DM530 Gel Indicator™ DNA Extraction Kit Gel Indicator Kit に DNA 精製試薬も含まれた,便利なキットです。 特 長 み合わせ,アガロースゲルからの DNA バンドの切り出し から DNA の精製までを行えます。 ⃝エチジウムブロミドや紫外線を用いないため,損傷の少な い DNA 断片を切り出すことができ,プラスミドベクター へのクローニング時に高い形質転換効率が得られます ( 右図参照 )。 形質転換効率( コロニー数 ) ⃝Gel Indicator™ Kit( p.23 参照 )に DNA 精製試薬を組 1,800 1,600 1,400 1,200 1,000 800 600 400 200 0 ⃝UV トランスイルミネーター,暗室での操作は不要です。 0 1 ⃝キットに含まれる 6 × Orange loading dye により,試 料のゲルへのアプライがしやすく,また,色調が異なるた ⃝電気泳動中にも DNA バンドを確認できます( Protocol ⃝1 × TAE,0.5 × TBE いずれのバッファーで作製したア ガロースゲルからでも DNA を回収できます。 10 約 2 kb の DNA 断片 5 種類を本キットでアガロースゲル電気泳動後, 切り出した。そのうち 1 つはそのまま本キットで DNA を精製し,残り はエチジウムブロミド染色後,紫外線を 1,3,5,10 分間照射した後 に DNA を精製した。等量の精製 DNA を使用して,プラスミドベクター にクローニングし,E. coli への形質転換効率を比較した。紫外線照射し なかった DNA では,高いクローニング効率を示している。 ゲルインディケーターキット( Ⅰの場合 )。 5 UV 照射による形質転換効率の低下 め DNA バンドと容易に識別できます( Protocol Ⅰの場 合 )。 3 紫外線照射時間( 分 ) ⃝精製した DNA は,クローニング,制限酵素処理,シーク エンシング,PCR のほか,様々な実験に使用できます。 ⃝DNA( 直鎖状 )の回収率は 70 〜 80 % です。 ⃝本キットではクローニングに適するよう環状 DNA より直 キット内容 ⃝Gel indicator solution 鎖状 DNA が選択的に得られるよう調製されています。環 ⃝3-Colors indicator 状 DNA の収率は 10 分の 1 以下です。 ⃝6 × Orange loading dye D N A 染色用) ⃝Dissolving and binding solution ⃝Wash buffer ⃝Elution buffer ⃝Collection tube ⃝Spin column ※キットに含まれる試薬の取り扱いや廃棄は,細胞染色用色素の 処理方法に準じた方法で行って下さい。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 1 kit / 20,000 Gel Indicator DNA Extraction Kit BDL DM550 Protocol Ⅰ で使用した場合,ゲル溶液 3 L 分( ミニゲル約 200 枚 ) の Gel Indicator Kit と 50 回分の DNA 精製試薬・スピンカラムを含 む。 6 × Orange Loading Dye BDL DM530 1 ml / 3,500 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 25 RNA 染色用 Gel Indicator™ RNA Staining Solution ポリアクリルアミドゲルからの RNA 断片抽出に適した RNA 染色試薬です。 特 長 ⃝電 気泳動後のポリアクリルアミドゲルから可視光条件下で RNA 断片を切り出せます。 ⃝染色済みゲルから crush and soak 法で抽出でき,抽出した RNA は RT - PCR,酵素反応,標識反応等に使用できます。 21 mer の RNA を 12.5 % 変性ポリアクリルアミドゲル( 7.5 M 尿素 )で電気泳動した。50 ng からの RNA が検出されている。 ⃝20 〜 30 分間で染色できます。 ⃝低分子量の RNA( 20 mer )も検出できます。 ⃝UV トランスイルミネーター,暗室は不要です。 ⃝1 × 溶液 500 ml でミニゲル約 10 枚が染色できます。 ⃝検出感度:> 50 ng( UV shadowing 法の約 5 倍の感度 ) 品名 メーカー BDL ※キットに含まれる試薬の取り扱いや廃棄は,細胞染色用色素の 処理方法に準じた方法で行って下さい。 ゲルインディケーターキット( 染色用) R N A 26 商品コード 包装 / 価格(¥) Gel Indicator RNA Staining Solution, 100 × DM595 10 ml / 12,000 クローニング・ライゲーションキット クローニングキット TA Cloning Kit DynaExpress 迅速,高効率な TA クローニングキットです。 特 長 操作方法概略( #DS120 および #DS127 の場合 ) ⃝わずか 30 分で高効率のライゲーション反応が行えます。 PCR 産物 ⃝キットに含まれる T ベクターは非常に安定で,室温で 3 週間放置してもクローニング効率に変化はありません。 T ベクター ⃝pTAC-2 と pTAKN-2 は,薬剤耐性遺伝子部分以外は同一 すべての操作が 約 40 分で 完了します! の配列から成る T ベクターで,マルチクローニング部位 ( MCS )の両端にレアカッター配列( Not Ⅰ )とプロモー ライゲーション(30 分) ター配列( T7 / SP6 )を有します。 ⃝pTAKN-2 は,カナマイシン耐性遺伝子( Kan )を持ち, ベクター間での PCR 断片のサブクローニングが容易です。 形質転換(5 分) ⃝#DS120 および #DS127 に含まれる Jet Competent Cell は,ヒートショックおよびプレーティング前の培養が不要 なため,約 10 分で形質転換操作が終了します。また,高 回復培地で室温静置(5 分) 効率( > 5 × 10⁷ cfu / 50 μl )の形質転換が可能です。 プレーティング キット内容 ⃝T-vector, linearized( キットにより異なります ) ⃝Ligation buffer クローニング・ライゲーションキット(クローニングキット) ⃝Ligase mixture ⃝Forward sequence primer ⃝Reverse sequence primer ⃝Jet competent cell( DH5α ) ( #DS120, #DS127 のみ ) ⃝Recovery medium( #DS120, #DS127 のみ ) コロニー数(個) 各キットに含まれる T ベクター 白色コロニー 青色コロニー (偽陽性) 6,000 4,000 2,000 0 0 5 10 20 40 80 PCR 断片の量(ng) 約 1 kb の PCR 断片を #DS120 を用いてクローニングした結果。 セルフライゲーションによる偽陽性クローンが少ないことが分かる。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格 (¥) TA PCR Cloning Kit, pTAC-1 DynaExpress BDL DS125 ( 20 reactions ) 20 units / 12,500 BDL DS125L Large( 80 reactions ) 80 units / 39,000 TA PCR Cloning Kit, pTAC-1, with Jet Competent Cell DH5α DynaExpress( 20 reactions ) BDL DS120 − 80℃ 20 units / 27,000 Jet Competent Cell( DH5α ), 回復培地( Recovery medium )添付。 TA PCR Cloning Kit, pTAC-2 DynaExpress BDL DS126 ( 20 reactions ) 20 units / 12,500 BDL DS126L Large( 80 reactions ) 80 units / 39,500 TA PCR Cloning Kit, pTAC-2, with Jet Competent Cell DynaExpress( 20 reactions ) BDL DS127 − 80℃ 20 units / 27,000 Jet Competent Cell( DH5α ), 回復培地( Recovery medium )添付。 TA PCR Cloning Kit, pTAKN-2 DynaExpress BDL DS130 ( 20 reactions ) 20 units / 12,500 BDL DS130L Large( 80 reactions ) 80 units / 39,500 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 27 ライゲーションキット DNA Ligation Kit Ver. 2 DynaExpress 極めて高い効率で短時間に DNA のライゲーション反応が行えます。 特 長 操作方法概略 ⃝高いライゲーション効率を有します。 1. ベクター DNA とインサート DNA の混合溶液 10 μl に, ⃝ライゲーション反応が短時間( 16 ℃,5 〜 30 分 )で行 等量の 2 × Ligation buffer と,0.25 〜 1 μl の Ligase mixture を加える。 えます。 ⃝反応後,直ちに形質転換に使用できます。 2. 16 ℃ で 5 〜 30 分インキュベートする。 ⃝2 × Ligation buffer は凍結・融解を繰り返しても活性を 3. 反応終了後,そのまま形質転換に使用する。 保ちます( 下図参照 )。 ※上記の Ligase mixture の使用量は,レギュラーサイズ( #DS110 ) ⃝レギュラーサイズのキット( #DS110 )では 50 〜 200 回のライゲーションができるので経済的です。 を 50 回分として使用する場合です。Ligase mixture の使用量によ り,各キットの使用回数は変わります。詳細は下表をご参照下さい。 ⃝お 試 し 用 Mini キ ッ ト( 10 〜 40 回 分 ) と, お 得 な Large キット( 250 〜 1,000 回分 )もあります。 ライゲーション効率[%] DNA Ligation Kit, ver. 2, DS105 Mini 120 100 DNA Ligation Kit, ver. 2 DS110 0.25 μl 0.5 μl 1 μl 40 回分 20 回分 10 回分 200 回分 100 回分 50 回分 DNA Ligation Kit, ver. 2, DS115 1,000 回分 500 回分 250 回分 Large 80 60 40 20 0 キット内容 0回 50回 ⃝Ligase mixture Ligation buffer の凍結・融解数 ⃝2 × Ligation buffer 700 コロニー数 600 500 品名 メーカー 商品コード 400 DNA Ligation Kit, Version 2 DynaExpress BDL 300 200 100 0 5 15 30 60 5 15 30 5 15 30 50 回分 100 回分 200 回分 として使用 として使用 として使用 30 30 30 [分] T Y N 社 社 社 クローニング・ライゲーションキット(ライゲーションキット) 28 Ligase mixture 使用量 商品 コード キット名 140 各社のライゲーションキットを用いて,pBluescript の Eco RV 部位 へ平滑末端を有する約 1 kb の DNA 断片をサブクローニングした。各 データ左側は白色コロニー数を,右側は青色コロニー数を示す。DNA Ligation Kit DynaExpress の効率は極めて高く,#DS110 を 200 回分とし て用いた場合でも充分な高活性を示す。50 回分として用いた場合,30 分で反応は飽和している。付着末端ライゲーションの場合は 200 回分 として用いても 5 分以内に反応は終結する。 包装 / 価格(¥) DS105 Mini( 10 - 40 reactions ) 1 kit / 6,000 BDL DS110 ( 50 - 200 reactions ) 1 kit / 20,000 BDL DS115 Large( 250 - 1,000 reactions ) 1 kit / 85,000 発現ベクター Expression Vector DynaVector 強力な T7 プロモーターを持つ,E. coli での高効率タンパク質発現ベクターです。 特 長 ⃝6 種類のベクターのマルチクローニングサイトはすべて共 通です。そのため,DynaVector のシリーズ間で,他の ベクターへのサブクローニングが容易に行えます。 ⃝ベクターのサイズが小さいため,大きなサイズのインサー トを挿入しても高効率の形質転換が期待できます。 ⃝N 末端に 6 × His タグを融合したタンパク質を発現でき ます。また,クローニングサイト中の Nde Ⅰ部位に目的 遺伝子を挿入すると,タグなしのタンパク質を発現できま す。 各ベクターの特長 薬剤耐性遺伝子 アンピシリン カナマイシン プラスミドの コピー数 特 長 プラスミドの精製が容 pETUA pETUK 高コピー 易。宿主に毒性のない ( #DV200 ) ( #DV220 ) ( 500 〜 700 個 ) タンパク質の発現に適 している。 幅広い種類のタンパク pETBA pETBK 中程度 質発現に使用できる。 ( #DV210 ) ( #DV230 ) ( 10 〜 20 個 ) IPTG による誘導発現 が可能。非誘導時の発 pETIA pETIK 中程度 現を抑制できるため, ( #DV215 ) ( #DV235 ) ( 10 〜 20 個 ) 宿主に毒性を有するタ ンパク質の発現に適し ている。 発現するタンパク質の宿主 E. coli への影響が明らかでな い場合,またベクターの選択に迷った場合は,pETBA をお 試し下さい。非誘導時に発現を抑えたい場合は,pETIA の 使用が考えられます。発現するタンパク質が宿主 E. coli に あまり影響しない場合は,pETUA を使用すると,プラスミ ドのコピー数が多いため,ミニプレップ,シークエンシング などがしやすいメリットがあります。カナマイシン耐性のベ クターは,アンピシリン耐性のクローニングベクターからの サブクローニングに有効です。 ベクターマップ 発現ベクター BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 29 kDa M 1 2 3 4 5 6 DynaVector と Zip Competent Cell BL21( DE3 ) ( #DS255:p.21 参照 )を用いた各種タンパク質発現例 97.4 66.2 M:Protein Eco DynaMarker®( #DM610:p.16 参照 ) 1:pETUK( 65 kDa タンパク質 ) 2:pETBA( 65 kDa タンパク質 ) 3:pETUA( 45 kDa タンパク質 ) 4:pETBA( 44 kDa タンパク質 ) 5:pETBK( 44 kDa タンパク質 ) 6:pETIK ( 30 kDa タンパク質 ) 45 29 20.1 14.4 kDa M 1 2 3 4 5 6 pETIA を用いた 70kDa タンパク質発現例( lac Ⅰ での制御 ) 97.4 M:Protein Eco DynaMarker®( #DM610:p.16 参照 ) 1:培養開始 3.5 時間後 A( IPTG 誘導無 ) 2:培養開始 3.5 時間後 B( IPTG 誘導直前 ) 3:培養開始 5.5 時間後 A( IPTG 誘導無 ) 4:培養開始 5.5 時間後 B( IPTG 誘導後 2 時間 ) 5:培養開始 7.5 時間後 A( IPTG 誘導無 ) 6:培養開始 7.5 時間後 B( IPTG 誘導後 4 時間 ) 66.2 45 29 同一のタンパク質を pETIA を用いて発現させた。A は培地に IPTG を添加しな かった場合,B は IPTG を添加した場合。pETIA では lac Ⅰ により厳密な発現制御 がなされるため,非誘導時の発現が極めて低レベルに抑えられる。 20.1 発現ベクター 14.4 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Expression Vector DynaVector 30 BDL DV200 pETUA 15 μg / 20,000 BDL DV210 pETBA 15 μg / 20,000 BDL DV215 pETIA 15 μg / 20,000 BDL DV220 pETUK 15 μg / 20,000 BDL DV230 pETBK 15 μg / 20,000 BDL DV235 pETIK 15 μg / 20,000 分子生物学関連試薬 Alkaline Phosphatase from Shewanella sp. SIB1 BAP と CIAP の長所を併せもつ低温性細菌由来アルカリホスファターゼです。 特 長 他のアルカリホスファターゼとの比較 ⃝ DNA 末端を脱リン酸化後,容易に熱失活できます。 ⃝速やかに,効率の良いライゲーション反応が可能です。 ⃝PAP は DNA の末端構造が変性しやすい 60 ℃ において 37 ℃ の約 4 倍高い活性を示すため,DNA の末端構造を 選ばず脱リン酸化できます。 ※低温性細菌 Shewanella sp. SIB1 は 0 〜 20 ℃ で生育する,低温条 件に適応したバクテリアです( 特許第 3507890 号 )。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) 熱失活 フェノール 失活処理 60 ℃ 酵素反応 TE 中での 活性 PAP ( Shewanella 由来 ) できる できる 高活性 あり BAP ( E. coli 由来 ) できない 残存する 場合あり 高活性 あり CIAP ( ウシ腸由来 ) できる できる 急速に 失活 弱い BAP は高い活性を有しますが,フェノール処理でも容易に失活しないた め,その後のライゲーション反応にしばしば悪影響を及ぼします。一方, CIAP は熱失活できますが反応条件によっては活性が弱いといった欠点 があります。 PAP は BAP と CIAP の長所を併せもつ酵素です。 Alkaline Phosphatase, Shewanella sp. SIB1, Recombinant〈 PAP 〉 BDL DE110 1,000 units / 15,000 BDL DE112 5 × 1,000 units / 60,000 PAP によるベクター DNA からの脱リン酸化と サブクローニング 濃度:5 units / μl 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 500 0 白0 青 2412 白 13.5 青0 白 664 青8 PAP 処理後熱失活 ─ ○ ○ Insert 断片添加 ─ ─ ○ ○ ○ ○ ライゲーション反応 白は White colony 数を, 青は Blue colony 数を示す。 QuickBlue Staining Solution ポリアクリルアミドゲル中のタンパク質に適した染色試薬です。 特 長 時間かつ高感度に CBB 染色できる試薬です。 分子生物学関連試薬 ⃝電気泳動したポリアクリルアミドゲル中のタンパク質を短 ( 操作時間 ) QuickBlue Staining Solution ⃝検出限界は 8 ng( BSA )と高感度です。 ⃝染色開始から数分でバンドが確認できます( 右図参照 ) 。 ⃝ゲルの脱色は脱イオン水のみで行えます。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) QuickBlue Staining Solution BDL DS500 ミニゲル約 20 枚分 500 ml / 11,000 他社 染色液 他社製品との比較 高感度な上,全工程を短時間で完了できるため迅速に結果が 確認できます。 BioDynamics Laboratory 社 製品カタログ 2013 31 RNase - free Water RNase フリーグレードの水です。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Water, DEPC - Treated 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Water, RNase - free, Non DEPC - Treated BDL DR110 5 × 1 ml / 3,000 BDL DR120 5 × 1 ml / 3,000 BDL DR115 2 × 50 ml / 4,000 BDL DR125 2 × 50 ml / 4,000 BDL DR117 500 ml / 8,000 BDL DR127 500 ml / 8,000 DEPC( Diethylpyrocarbonate )処理水。オートクレーブ済み。 限外ろ過による精製水。RNA 実験に有用。 Salmon Sperm DNA ブロッキング剤として有用なサケ精子由来 DNA です。 特 長 ⃝超音波破砕,および Shearing によって断片化処理した サケ精子 DNA です。 ⃝ハイブリダイゼーションの際のブロッキング剤として有用 です。 ⃝DNA のサイズは 300 〜 700 bp です。 ⃝DNase フリーです。 ⃝濃度:10 mg / ml 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) DNA, Salmon Sperm, Sonicated BDL F012 1 ml / 4,000 BDL F013 5 × 1 ml / 18,000 抗 6 × His タグモノクローナル抗体 6 × His タグ融合タンパク質の検出用抗体です。 1 特 長 2 3 4 5 6 7 8 ⃝N 末端側に 6 × His タグのついた融合タンパク質を認識 します。 ⃝一般的な 6 × His タグ融合タンパク質発現ベクターを用 いて産生した組換え体タンパク質を認識することを確認し ています。 ⃝E LISA,ウエスタンブロッティング,アフィニティクロマ トグラフィーなどに適用できます。 ⃝アフィニティ精製品です。 品名 メーカー 商品コード 包装 / 価格(¥) Anti - 6 - His, Mouse - Mono( H21-5 )〈 Anti - 6 × Histidine 〉 BDL F008 100 μg / 25,000 Mono:Monoclonal,( )内はクローンを表します。 NOTE ※ 本紙に記載されている価格は,2013 年 1 月 1 日現在です。 ※ 本紙に掲載されている製品は,すべて研究目的用にのみ販売しています。医薬品, 診断用医薬品,食品検査等の用途には使用できません。 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様 ※ カルタヘナ 印の製品は, 分子生物学関連試薬 性の確保に関する法律( 通称:カルタヘナ法 )」使用規制対象となりますので,ご 使用に際しては規制に則し,適切にお取り扱い下さい。詳細は当社テクニカルサポー ト( 試薬に関して:下記参照 )までお問い合わせ下さい。 ※ − 80℃ 印は,− 80℃ での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送して いますが,製品到着後,直ちに − 80℃ のフリーザー等に保存して下さい。 6 × His タグ融合タンパク質の検出 市販されている発現ベクターを使用して産生した 6 × His タグ融合タンパ ク質( レーン 3 〜 7 )を,本抗体を用いてウエスタンブロッティングによ り検出した。レーン 1,8 は分子量マーカー。レーン 2 は 6 × His タグを 含まないタンパク質を泳動したコントロール。 ※ 外観・仕様は改善のため,予告なく変更することがあります。 ※ 記載されている会社および商品名は,BioDynamics Laboratory 社の商標または登 録商標です。 ※ 表示価格に,消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合 がありますので,あらかじめご了承下さい。 ※ ご注文の際は, [ 品名,メーカー( BDL ),商品コード,包装,数量 ]をお知らせ 下さい。 フナコシのライ フ サ イ エ ン ス 研 究 用 試 薬 と 機 器 総代理店 販売店 印刷 用の 紙にリ サイクルできます 不 要となった 際 は、古 紙 回 収・ リサイクルに出し てください 32 〒 113-0033 東京都文京区本郷 2 丁目 9 番 7 号 http://www.funakoshi.co.jp/ e-mail:[email protected] 試薬に関して:Tel. 03-5684-1620 Fax 03-5684-1775 e-mail:[email protected] 機器に関して:Tel. 03-5684-1619 Fax 03-5684-5643 e-mail:[email protected] Z1-W01T-01( 2013.01 )
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