小児歯科学雑誌 45（2）13672007 367 アメロジェニンによる骨芽細胞分化調節機構の解析（第2報）Wnt／β一cateninシグナル伝達系について Dual・Luci免rase ReporterAssay Systemを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。【結果】 O松澤光洋、室井剛史、進士久明、木本茂成、川瀬俊夫幸、 TOPGALマウスのX−Ga1染色による陽性細胞は、主に黄嘉道纏、許綜仁紳、JEPuzaずヘルトヴィッヒ上皮鞘（囲RS）に相当する根尖部付近と歯（神歯大・小児歯、串歯生工学、＊＊Un拉Rochester）根表面上に沿った歯根膜組織および歯槽骨表面において顕著であった。Ca！varial cellsにおけるLacZ遺伝子の【目的】転写活性は、5μg／ml rM179添加によりコントローノレと比 Wnt／β一caten圭nシグナル伝達系は、様々な組織や器官の発生や、癌をはじめとする多くの疾病の発症に重要な較して約2．3倍の上昇を示した。また、PDLcellsの TOPFLASHレポーターアッセイでは約4倍の転写活性化役割を果たしている。Wntシグナルを受け取るレセプターを示した。さらに、抗β一catenln活性化抗体によるWestem の一つであるLRP−5の突然変異によって骨量が大きく変 blottingの定量分析においても約2倍の上昇を示し、タン動すること、またTGF一βシグナリングとのクロストークが存パク質レベルでのβ一catenin誘導が確認された。在することなどの理由から、Wntシグナリングの骨形成に【考察及び結論】対する役割が注目されている。最近、アメロジェニン我々は、第44回大会においてアメロジェニンの骨芽細（rM玉79）の骨形成における重要性が分子レベルで明らか胞におけるTGF一βシグナリングの誘導を報告した。になりつつあるが、Wn重シグナル伝達系との相互作用に Smad3、4がWntシグナリングの活性を増強することから、ついての報告はみられない。本研究では、TOPGALレポアメロジェニンとの関連性を疑い本研究をデザインした。ーターマウスリを用いてアメロジェニンのカノニカルWnt TOPGALマウスのX−Ga1染色が示したHERS近傍およびシグナル伝達系に与える影響にっいて検索を行った。歯根膜組織内におけるβ一galactosldaseの発現は、アメロ【試料及び方法】ジェニンとWntシグナリングの相互作用を支持するもので rMl79は、マウスアメロジェニンcDNA／pETllaベクター 2）（ミシガン大学DL JP Simmerより供与）をE ooli BL21（DE3）pLyssに導入し、イソプロピルβ一D一チオガラクあり、歯周組織の発生においてβ一cate熱inが重要な regulatorであることを示唆している。Westem blottlngの結果は、TOPGALマウスCalvarialcellsにおけるLacZ遺伝トシド（IPTG）により発現誘導を行った。アメロジェニン可子およびPDLcellsのTOPFLASHレポーターの転写活性溶性画分はゲル濾過カラムにより分離精製し、ROSl7／2・8 化に一致しており、β一catenln活性化による付加的なシグ cellsの骨基質タンパク質（COL1、ALP、OCN）のmRNA ナルの誘導を証明する。本研究が示すアメロジェニンの発現に対する影響をReal−time RT−PCRにより検討した。 Wntシグナル伝達系への関与は、歯周組織発生におけ Wntシグナリングの解析には、転写因子TCF（T Cell る未分化問葉系細胞の増殖、分化誘導に対するアメロジ Facto「）／LEF（lymPhold enhancePb1nding五actor）の合成ェニンの新たな多様性を表現するものと思われる。プロモーターの制御下にLacZ遺伝子（β一galactosidase）【文献】を発現するトランスジェニックマウス（丁OPGALマウス）を用 1）DasGupta R and Fuohs E：Multiple roles慣or aoti’vated いた。LacZ遺伝子の発現はX−Gal染色により確認した。 LEFITCF transcription complexes during hair 負⊃11圭cle 1ηvi∫roにおけるWntシグナリングの応答は4霞齢の development and dif驚rentiatlon声 Development，三26： TOPGALマウスよりC＆lvarial cellsを拍出し、Wnt3aをポ 4557−4568，1999．ジティブコントロールとしてrM179（3、5μg／m1）と共に24 2）Si田mer JE Lau BC，Hu CC，AobaエLacey M，Nelson D，時間培養を行った。培養終了後、Lysis b慧ffer（200μ Zelchne卜D舗d M，Snead ML，Slaykin HC，Flncham AG： 1／we11）を加えてβ一galac‡osldase活性を測定した。また、ヒ Isolation and characterlzation ofamouseamelogenin トおよびマウス歯根膜由来細胞（PDL cells）に対する応答 expressed in E50hεπohio oo1∫，Caloif Tissue Int，54：312−319，性については、TCF結合配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流に連結したレポータープラスミド（TOPFLASH）を用 1994、いて丑αηsl㍗LT1により48時間遺伝子導入を行い、