29CK-am07 リポタンパク質変異体による抗癌剤の細胞内デリバリー ◯村上　達也 1,2 ， Wassana WIJAGKANALAN 3 ，今堀　博 1,4 ，橋田　充 1,3 ，土田　邦博 5 2 3 4 5 （ 1 京大・物質－細胞統合システム拠点，さきがけ，京大院薬，京大院工，藤田保健衛生大・総医研）高比重リポタンパク質(HDL)は、脂質と脂質結合タンパク質から構成され、体内でコレステロール逆輸送を担う。HDL の主要構成タンパク質 apoA-I は、肝臓で合成され、まず脂質の乏しいディスク状 HDL を形成した後、コレステロール貯蔵・エステル化を経て、球状 HDL となる。ディスク状 HDL はリン脂質と組換え apoA-I から容易に再構成可能であり、近年、ドラッグキャリアとして注目を集めている。我々は、一昨年度の本学会において、ディスク状 HDL の葉酸化学修飾により in vitro 癌ターゲティングが可能であること、ドキソルビシン(DXR)内包により粒子径を様々に制御できることを発表した。今回、protein transduction domain の１つである TAT ペプチドを利用して、遺伝子工学的手法により TAT 修飾 HDL を作製し、その機能評価を行ったので報告する。 N 末端 43 アミノ酸残基を欠損し、C 末端に TAT ペプチドを有するヒト apoA-I 変異体(¨apoTAT)を設計した。¨ApoTAT を大腸菌に発現させ、ニッケルキレートカラムで精製した。¨ApoTAT を palmitoyl-oleoyl phosphatidylcholine (POPC)と反応させ、透析して再構成 HDL (r¨HDL-TAT)を得た。さらに r¨HDL-TAT を DXR と混合し、 50°C, 1 h 静置して、DXR 内包 r¨HDL-TAT を作製した。 DXR 内包 r¨HDL-TAT で癌細胞を 37°C, 1h 処理すると、細胞内から DXR 蛍光が観察された。TAT のない DXR 内包 r¨HDL では細胞内 DXR 蛍光がほとんど観察されず、 r¨HDL-TAT の細胞内侵入活性が明らかとなった。r¨HDL-TAT によって細胞内送達された DXR は、最初エンドソームに局在したが、1 日後には細胞質内に広く分布し、エンドソームリリースされることが示唆された。さらに重要なことに、DXR 内包 r¨HDL-TAT は、DXR 内包 r¨HDL に比べて、高い抗腫瘍効果を示した。